陳夢(mèng)瑩，陶 杰，徐川嵐，蘭 鵬

（1. 四川大學(xué)華西廣安醫(yī)院，四川 廣安 638000 ；2. 西南醫(yī)科大學(xué)，四川 瀘州 646000）

腎陽(yáng)虛是由于腎陽(yáng)虛衰、溫煦失職、氣化失權(quán)所導(dǎo)致的一類(lèi)虛證證候，臨床表現(xiàn)為面色晄白、形寒肢冷、腰膝酸軟、小便頻數(shù)、性功能減退等?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)中的多種器官疾病都可表現(xiàn)出腎陽(yáng)虛證候，常見(jiàn)的有慢性腎炎、慢性腎功能衰竭、腎上腺皮質(zhì)功能減退等腎臟疾病[1-2]。腎陽(yáng)虛動(dòng)物模型的建立和復(fù)制對(duì)于研究各系統(tǒng)疾病中腎陽(yáng)虛證的本質(zhì)和評(píng)價(jià)受試藥物療效具有重要的價(jià)值。目前該動(dòng)物模型的研制依據(jù)及造模機(jī)理主要分為中醫(yī)病因造模和西醫(yī)病理造模兩大類(lèi)[3]。但因其造模方法復(fù)雜、給藥途徑多樣、給藥劑量、給藥周期尚未統(tǒng)一、無(wú)規(guī)范化的模型對(duì)象、無(wú)特異性的檢測(cè)指標(biāo)等問(wèn)題，使得腎陽(yáng)虛動(dòng)物模型造模的成功率不高。因此，本文參考了近10 年有關(guān)腎陽(yáng)虛實(shí)驗(yàn)研究類(lèi)的期刊文獻(xiàn)，整理挖掘相關(guān)數(shù)據(jù)，旨在為腎陽(yáng)虛動(dòng)物模型的制備提供一個(gè)合理的建議。

1 材料與方法

1.1 數(shù)據(jù)來(lái)源

以“腎陽(yáng)虛”“動(dòng)物模型”為檢索詞在中國(guó)知網(wǎng)、萬(wàn)方、維普、PubMed 數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索，得到中文文獻(xiàn)327 篇，英文文獻(xiàn)120 篇。

1.2 納入及排除標(biāo)準(zhǔn)

選擇全部動(dòng)物實(shí)驗(yàn)相關(guān)類(lèi)型的期刊文獻(xiàn)，篩除重復(fù)、資料不全、不相關(guān)文獻(xiàn)。最后共納入有效文獻(xiàn)126 篇，包括中文文獻(xiàn)110 篇，英文文獻(xiàn)16 篇。

1.3 數(shù)據(jù)庫(kù)建立

在Excel 2019 軟件中錄入文獻(xiàn)名、造模方法、造模藥物單劑量及給藥總量（給藥總量=給藥單量×造模周期）、造模周期、動(dòng)物品系、性別、體重等信息，建立數(shù)據(jù)庫(kù)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

將涉及各要素的文獻(xiàn)單獨(dú)計(jì)數(shù)，計(jì)算百分比，制作表格及圖形展示。

2 結(jié)果

2.1 模型復(fù)制方法

將所得數(shù)據(jù)庫(kù)中涉及造模方法的資料進(jìn)行分類(lèi)排序，如表1 所示，納入的所有文獻(xiàn)中共有15 種造模方法，歸納為兩大類(lèi)，即西醫(yī)病理造模法和中醫(yī)病因造模法。從表1 中可見(jiàn)，使用頻次最高的造模方法是氫化可的松造模（占58.9%），其選用率遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過(guò)了其他造模方法。

表1 造模方法分類(lèi)及頻數(shù)分布

2.2 動(dòng)物品系選擇

將數(shù)據(jù)庫(kù)中所有實(shí)驗(yàn)動(dòng)物按性別、使用頻次分類(lèi)排序，如表2 所示，累計(jì)10 種動(dòng)物，使用頻次排名前3 的分別是雄性SD 大鼠（53 次，占39.55%）、雄性KM（20 次，占14.93%）、雄性Wistar 大鼠（17 次，占12.69%）。在性別的選擇上差異較為顯著，實(shí)驗(yàn)大多選擇雄性動(dòng)物，所占比例高達(dá)77.63%，而雌性或雌雄各半等所占的比例較小。

表2 動(dòng)物品系、性別和頻數(shù)分布

2.3 氫化可的松腎陽(yáng)虛動(dòng)物模型造模方法概況

將數(shù)據(jù)庫(kù)中涉及氫化可的松給藥方式、給藥劑量、給藥周期的資料進(jìn)行分類(lèi)排序，由于大鼠和小鼠生理的差異性，二者給藥劑量及周期差異較大，鑒于本研究中大鼠選擇的頻次遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于小鼠，故本文主要統(tǒng)計(jì)計(jì)算了大鼠給藥的相關(guān)數(shù)據(jù)，并使用Excel 2019 軟件繪制餅狀圖。如圖1 所示，氫化可的松腎陽(yáng)虛動(dòng)物模型的造模方法共涵蓋4 種給藥方式，其中肌內(nèi)注射應(yīng)用最多（i.m.，占51.9%），皮下注射次之（s.c.，占22.78%）。基于126 篇文獻(xiàn)數(shù)據(jù)分析得知（圖2），給藥劑量以25 mg·kg-1·d-1使用的頻次最高。氫化可的松腎陽(yáng)虛動(dòng)物模型的造模時(shí)間不等，主要分布在6 個(gè)區(qū)間（0 ～7 d，7 ～14 d，14 ～21 d，21 ～28 d，28 ～35 d，＞35 d），從圖3 可知，造模周期為14 ～21 d 所占的比例最高，達(dá)40%，其中以14 d、20 d 最為常見(jiàn)。根據(jù)給藥總量數(shù)據(jù)分布特點(diǎn)，本文將其分為9 個(gè)區(qū)間（＜100 mg/kg，100 ～200 mg/kg，200 ～300 mg/kg，300 ～400 mg/kg，400 ～ 500 mg/kg，500 ～ 600 mg/kg，600 ～700 mg/kg，700 ～800 mg/kg，＞800 mg/kg），如圖4 所示，分布在100 ～200 mg/kg 和300 ～400 mg/kg 區(qū)間所占的比例較高，分別是38%、20%，其中以300 mg/kg 作為總給藥劑量出現(xiàn)的頻率最高。

3 結(jié)果分析

腎陽(yáng)虛動(dòng)物模型主要分為西醫(yī)病理模型和中醫(yī)病因模型兩大類(lèi)。西醫(yī)病理模型主要是根據(jù)現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究腎陽(yáng)虛證的病理變化，運(yùn)用藥物干預(yù)、手術(shù)損傷等手段模擬的腎陽(yáng)虛病理?yè)p傷[3]，具有操作相對(duì)簡(jiǎn)單、耗時(shí)短、成本較低等優(yōu)點(diǎn)[4]，相比于中醫(yī)病因模型應(yīng)用更為廣泛。但這種造模方法只能部分?jǐn)M合人腎陽(yáng)虛的病理特點(diǎn)，契合程度較為局限。中醫(yī)病因模型非常接近人自然發(fā)展的病理生理狀態(tài)，理論上更加符合造模需求，但耗時(shí)較長(zhǎng)，成本較高，刺激因素不易控制，使得模型的質(zhì)量常受質(zhì)疑，故選用率不高。鼠類(lèi)動(dòng)物與人類(lèi)的基因序列最為相似[5]，因而常被選作為腎陽(yáng)虛模型復(fù)制的對(duì)象。基于模型要素?cái)?shù)據(jù)庫(kù)可知，在實(shí)驗(yàn)研究中多選用鼠類(lèi)動(dòng)物復(fù)制腎陽(yáng)虛模型，選用的種類(lèi)多樣，其中以SD 大鼠、KM 小鼠、Wistar 大鼠使用頻率最高。SD 大鼠是由Wistar 大鼠培育而成，相較于Wistar 大鼠，SD 大鼠生長(zhǎng)發(fā)育更快，自身免疫力更強(qiáng)，對(duì)性激素尤為敏感[6]，且來(lái)源廣泛，價(jià)格低廉，對(duì)飼養(yǎng)環(huán)境要求不高，因此研究者更愿意選擇SD 大鼠作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象。此外，模型動(dòng)物的性別差異較大，大部分期刊文獻(xiàn)均選擇雄性動(dòng)物制作腎陽(yáng)虛動(dòng)物模型。史年剛[7]等報(bào)告稱(chēng)這是由于雌雄激素個(gè)體差異所致，雄激素對(duì)能量代謝指標(biāo)更為敏感，更易表現(xiàn)出陽(yáng)虛的證候。本研究表明，腎陽(yáng)虛大鼠模型最常用的造模方法是肌內(nèi)注射氫化可的松25 mg·kg-1·d-1，連續(xù)給藥14 ～21 d。氫化可的松主要是通過(guò)抑制腎上腺皮質(zhì)激素的分泌而使模型動(dòng)物出現(xiàn)一系列的“耗竭”現(xiàn)象，符合中醫(yī)腎陽(yáng)虛證的臨床表現(xiàn)。作為最早建立的腎陽(yáng)虛模型之一，氫化可的松腎陽(yáng)虛動(dòng)物模型的理論基礎(chǔ)及實(shí)驗(yàn)技術(shù)已趨于成熟，已有多篇文獻(xiàn)報(bào)道其可以作為腎陽(yáng)虛理想的動(dòng)物模型[8-9]，而腺嘌呤灌胃、手術(shù)造模因死亡率較高等問(wèn)題常常不作為首選。目前，氫化可的松的給藥途徑以肌內(nèi)注射最為多見(jiàn)，秦文艷等[10]、劉振中等[11]對(duì)比了氫化可的松不同給藥方式、不同劑量的優(yōu)劣，發(fā)現(xiàn)腹腔注射出現(xiàn)陽(yáng)虛癥狀較早，但連續(xù)給藥5 d 動(dòng)物的死亡率可高達(dá)到80%，且不易把控成模劑量，皮下注射易出現(xiàn)滲液、皮膚變硬結(jié)痂等問(wèn)題，影響模型的建立，肌捏注射會(huì)導(dǎo)致注射部位肌肉萎縮、壞死，影響一些應(yīng)激指標(biāo)的檢測(cè)。戴冰等[12]、秦文艷等[10]認(rèn)為灌胃給藥操作方便，且成功率高，是一種理想的給藥途徑。但本研究統(tǒng)計(jì)顯示灌胃給藥所選用的比例最小，其原因有待于進(jìn)一步探索。此外，氫化可的松所采用的給藥劑量、持續(xù)天數(shù)不同，可分別復(fù)制出腎陽(yáng)虛和腎陰虛模型，這是因?yàn)榇髣┝客庠葱云べ|(zhì)激素?cái)z入的早期能使機(jī)體呈煩躁多動(dòng)等腎陰虛表現(xiàn)，但由于腎上腺皮質(zhì)激素可使促腎上腺皮質(zhì)激素釋放受到抑制，使類(lèi)固醇激素分泌減少，晚期則出現(xiàn)“陰損及陽(yáng)”的轉(zhuǎn)變[12]，因此給藥劑量、持續(xù)天數(shù)不足則會(huì)降低成模率，太過(guò)則會(huì)延長(zhǎng)實(shí)驗(yàn)周期，降低實(shí)驗(yàn)效率。本文通過(guò)對(duì)大量文獻(xiàn)的整理及分析，發(fā)現(xiàn)以25 mg·kg-1·d-1給藥劑量、連續(xù)用藥14 ～21 d給藥最為普遍，且各期刊文獻(xiàn)均造模成功，因此筆者認(rèn)為該給藥劑量及周期更符合實(shí)驗(yàn)需求。

4 討論

自鄺安堃等[13]使用皮質(zhì)激素誘導(dǎo)首個(gè)腎陽(yáng)虛動(dòng)物模型以來(lái)，已發(fā)展創(chuàng)造出10 余種造模方法，為臨床中西醫(yī)病證結(jié)合研究提供了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。但是目前腎陽(yáng)虛動(dòng)物模型存在造模方法不統(tǒng)一、病理模型與人體腎陽(yáng)虛證候吻合程度欠佳、模型缺乏客觀公認(rèn)的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)等問(wèn)題，使得國(guó)內(nèi)外尚無(wú)統(tǒng)一的造模標(biāo)準(zhǔn)[4]。因此筆者收集了國(guó)內(nèi)外近10 年關(guān)于腎陽(yáng)虛動(dòng)物模型的期刊文獻(xiàn)，對(duì)相關(guān)造模數(shù)據(jù)進(jìn)行挖掘，結(jié)果表明選用SD 大鼠作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，采用氫化可的松造模，推薦用藥劑量為25 mg·kg-1·d-1，用藥周期為14 ～21 d可以提高造模的效率，為有效評(píng)價(jià)受試藥物提供方法學(xué)參考。