吳際, 趙靜瑜, 李曉勇, 王乃平, 趙盼, 趙二麗

開封市中心醫(yī)院 1血液透析室，2腎病風(fēng)濕免疫科(河南開封 475000)

原發(fā)性腎病綜合征是一種由腎小球損傷而引起的腎臟疾病，腎小球是腎臟的過濾單位，其無法過濾蛋白質(zhì)，導(dǎo)致蛋白質(zhì)漏入尿液，出現(xiàn)蛋白尿、低蛋白血癥和水腫等[1-2]。原發(fā)性腎病綜合征的病因和發(fā)病機(jī)制目前尚未有定論，其早期若不能得到及時治療，隨著病情發(fā)展，可能會導(dǎo)致急性腎功能衰竭等并發(fā)癥，影響患者的生活質(zhì)量和身心健康[3]。尋找相關(guān)指標(biāo)用于指征原發(fā)性腎病綜合征疾病狀態(tài)或預(yù)測疾病惡化，可能對降低各類并發(fā)癥的發(fā)生風(fēng)險有重要意義。硫氧還蛋白相互作用蛋白(TXNIP)是硫氧還蛋白系統(tǒng)中的成員，可調(diào)節(jié)體內(nèi)氧化應(yīng)激水平[4]。微小RNA-146a-5p(miR-146a-5p)在炎癥反應(yīng)中發(fā)揮抗炎作用，且同時參與了機(jī)體炎癥反應(yīng)中的適應(yīng)性免疫和固有免疫[5]。研究顯示，TXNIP、miR-146a-5p均與腎臟病變有一定的相關(guān)性[6-7]。此外，miR-146a-5p/TXNIP軸通過抑制相關(guān)信號通路的自噬來減輕腸缺血再灌注損傷[8]。然而，有關(guān)二者對原發(fā)性腎病綜合征的影響尚不清楚。因此，本研究通過檢測原發(fā)性腎病綜合征患者血清TXNIP、miR-146a-5p表達(dá)情況，分析二者表達(dá)相關(guān)性，以期為臨床治療原發(fā)性腎病綜合征提供新的參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料 納入2019年10月至2022年2月本院收治的85例原發(fā)性腎病綜合征患者為腎病綜合征組，男64例，女21例，年齡32～76歲，平均(54.24±9.57)歲。同期納入85例健康體檢者為對照組，男62例，女23例，年齡35～74歲，平均(53.26±8.78)歲。收集研究對象年齡、性別、體質(zhì)指數(shù)(BMI)、吸煙、飲酒、糖尿病、高血壓、三酰甘油(TG)、總膽固醇(TC)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)等資料，經(jīng)對比，兩組差異無統(tǒng)計學(xué)意義，具備可比性。見表1。本研究經(jīng)本院臨床倫理委員會審批通過(批號：KFZX-KYLL-2019285)，患者及家屬知情同意，并自愿簽署同意書。

表1 腎病綜合征組與對照組一般資料比較

納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)原發(fā)性腎病綜合征診斷符合相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)[9]；(2)近1個月內(nèi)無急慢性感染者；(3)患者資料完整。

排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)合并有惡性腫瘤、惡性心律失?；蚱渌鞴俟δ軗p害者；(2)先天性腎臟疾病或繼發(fā)性腎臟病變者；(3)合并嚴(yán)重內(nèi)分泌疾病及自身免疫系統(tǒng)疾病者。

1.2 方法

1.2.1 血清miR-146a-5p水平檢測 抽取健康體檢者體檢時及原發(fā)性腎病綜合征患者入組時(治療前)靜脈血5 mL，靜置30 min后以3 000 r/min轉(zhuǎn)速離心15 min，收集上層血清，置于-80℃冰箱待檢。按照RNA提取試劑盒(上海羽哚生物科技有限公司)說明書提取血清中總RNA，檢測其完整性后按照逆轉(zhuǎn)錄試劑盒(上?？泼羯锟萍加邢薰?說明書對RNA進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄操作以合成cDNA，此后采用美國Applied Biosystems公司生產(chǎn)的V115896型實時熒光定量PCR(qRT-PCR)儀檢測血清miR-146a-5p水平，內(nèi)參為U6，所用引物經(jīng)軟件設(shè)計后由北京鼎國生物科技有限公司合成，序列見表2。qRT-PCR反應(yīng)體系共20 μL，反應(yīng)程序為：94℃ 5 min；94℃ 30 s，60℃ 30 s，72℃ 30 s，40個循環(huán)。血清miR-146a-5p相對表達(dá)量采用2-ΔΔCT法計算，每個樣本各進(jìn)行3次重復(fù)。

表2 qRT-PCR引物序列

1.2.2 血清TXNIP及腎功能指標(biāo)檢測 采用武漢益普生物科技有限公司生產(chǎn)的酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)試劑盒檢測血清TXNIP水平，采用德國西門子公司生產(chǎn)的Atellica CH930型全自動生化分析儀檢測腎功能指標(biāo)血尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)、尿酸水平。

2 結(jié)果

2.1 腎病綜合征組與對照組腎功能指標(biāo)比較 腎病綜合征組BUN、Scr、尿酸水平顯著高于對照組(P<0.05)。見表3。

表3 腎病綜合征組與對照組腎功能指標(biāo)比較

2.2 腎病綜合征組與對照組血清TXNIP、miR-146a-5p表達(dá)比較 腎病綜合征組血清TXNIP表達(dá)顯著高于對照組(P<0.05)，miR-146a-5p表達(dá)顯著低于對照組(P<0.05)。見表4。

表4 腎病綜合征組與對照組血清TXNIP、miR-146a-5p表達(dá)比較

2.3 原發(fā)性腎病綜合征患者血清TXNIP、miR-146a-5p表達(dá)與一般資料及腎功能指標(biāo)的相關(guān)性 Pearson相關(guān)分析結(jié)果顯示，原發(fā)性腎病綜合征患者血清TXNIP與miR-146a-5p表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(r=-0.524，P<0.05)；TXNIP與BUN、Scr、尿酸呈正相關(guān)(P<0.05)，與Alb呈負(fù)相關(guān)(P<0.05)；miR-146a-5p與BUN、Scr、尿酸呈負(fù)相關(guān)(P<0.05)，與Alb呈正相關(guān)(P<0.05)。見圖1、表5。

表5 原發(fā)性腎病綜合征患者血清TXNIP、miR-146a-5p表達(dá)與一般資料及腎功能指標(biāo)的相關(guān)性

圖1 原發(fā)性腎病綜合征患者血清TXNIP與miR-146a-5p表達(dá)的相關(guān)性

2.4 影響原發(fā)性腎病綜合征發(fā)生的多因素logistic回歸分析 以是否發(fā)生原發(fā)性腎病綜合征為因變量，以TXNIP、miR-146a-5p、Alb、BUN、Scr、尿酸為自變量進(jìn)行多因素logistic回歸分析，結(jié)果見表6。

表6 影響原發(fā)性腎病綜合征發(fā)生的多因素logistic回歸分析

3 討論

研究顯示，腎病綜合征的病理生理學(xué)涉及濾過屏障損傷，濾過屏障主要由足細(xì)胞、腎小球內(nèi)皮、腎小球基底膜組成[10]。相關(guān)研究顯示，腎病綜合征患者體內(nèi)存在不同程度的促炎狀態(tài)、內(nèi)皮功能障礙及氧化應(yīng)激增加[11]。原發(fā)性腎病綜合征的治療形勢目前仍十分嚴(yán)峻，無特異性用于治療原發(fā)性腎病綜合征的藥物，而部分患者對傳統(tǒng)治療方案敏感性差，最終容易進(jìn)展為終末期腎病[12]。原發(fā)性腎病綜合征治療方案可能會隨著對其相關(guān)靶分子的深入認(rèn)識而改變。

研究顯示，活性氧簇(ROS)在維持細(xì)胞正常代謝和信號傳導(dǎo)中發(fā)揮重要作用，ROS積累量超過體內(nèi)抗氧化能力時，可誘發(fā)氧化應(yīng)激反應(yīng)，而TXNIP相關(guān)系統(tǒng)是機(jī)體內(nèi)最重要的氧化應(yīng)激調(diào)控機(jī)制[13-14]。TXNIP可通過抑制硫氧還蛋白的抗氧化功能來調(diào)節(jié)ROS的生成[15]。Dai等[16]研究顯示，TXNIP介導(dǎo)的氧化應(yīng)激和核苷酸結(jié)合寡聚化結(jié)構(gòu)域樣受體蛋白3炎性激活的表觀遺傳調(diào)節(jié)有助于加重糖尿病腎病。本研究結(jié)果中，原發(fā)性腎病綜合征患者血清TXNIP表達(dá)上調(diào)，且與腎功能指標(biāo)BUN、Scr、尿酸均呈正相關(guān)。推測原發(fā)性腎病綜合征患者體內(nèi)處于高炎癥反應(yīng)及氧化應(yīng)激狀態(tài)，使得體內(nèi)大量炎癥因子和ROS生成并釋放，進(jìn)而誘發(fā)腎臟等臟器進(jìn)一步產(chǎn)生更嚴(yán)重的損傷，同時TXNIP被激活后可抑制硫氧還蛋白的抗氧化功能，調(diào)節(jié)細(xì)胞氧化還原狀態(tài)，進(jìn)一步促進(jìn)氧化應(yīng)激反應(yīng)。

許多研究顯示，miRNA的異常表達(dá)在腎臟疾病中發(fā)揮著重要作用，且有望作為腎臟疾病的治療靶點[17-18]。Li等[19]研究表明，人尿源性干細(xì)胞通過靶向miR-146a-5p在大鼠腎缺血/再灌注損傷模型中發(fā)揮保護(hù)作用。李莉等[20]研究顯示，miR-146a-5p對高脂飲食/鏈脲佐菌素誘導(dǎo)的糖尿病腎病大鼠腎組織具有保護(hù)作用，且其過表達(dá)能抑制炎癥反應(yīng)并改善腎小球損傷。本研究結(jié)果中原發(fā)性腎病綜合征患者血清miR-146a-5p表達(dá)下調(diào)，且與TXNIP及腎功能指標(biāo)均呈顯著負(fù)相關(guān)。推測miR-146a-5p表達(dá)下降后，其調(diào)控生理生化指標(biāo)以及改善腎小球濾過的功能降低，無法抑制炎癥反應(yīng)對腎臟的損傷。且鑒于TXNIP與miR-146a-5p表達(dá)的相關(guān)性，考慮miR-146a-5p可能同時通過負(fù)向調(diào)控TXNIP，使其表達(dá)水平升高，加重腎臟損傷。此外，本研究中多因素logistic回歸分析結(jié)果顯示，TXNIP、miR-146a-5p均是原發(fā)性腎病綜合征發(fā)生的影響因素。進(jìn)一步提示TXNIP、miR-146a-5p可能參與疾病發(fā)病機(jī)制，在原發(fā)性腎病綜合征疾病進(jìn)展中發(fā)揮重要作用，二者有望成為疾病治療靶點，有待進(jìn)一步基礎(chǔ)研究深入探究具體調(diào)控機(jī)制。

綜上所述，原發(fā)性腎病綜合征患者血清TXNIP表達(dá)上調(diào)，miR-146a-5p表達(dá)下調(diào)，二者呈顯著負(fù)相關(guān)，且均與腎功能指標(biāo)呈顯著相關(guān)性。血清TXNIP、miR-146a-5p檢測可能對原發(fā)性腎病綜合征疾病治療具有潛在應(yīng)用價值，且有望成為其治療靶點。然而本研究病例數(shù)不足，入選研究對象有一定的隨機(jī)性，無法完全排除部分系統(tǒng)誤差和實驗誤差的干擾。且鑒于腎臟結(jié)構(gòu)的特殊性，部分患者未能取腎臟組織進(jìn)一步檢驗，造成研究較為單一。今后將擴(kuò)充樣本量，以獲得更科學(xué)、客觀且更具臨床價值的結(jié)論。

利益相關(guān)聲明：所有作者均聲明不存在利益沖突。

作者貢獻(xiàn)說明：吳際是本研究的實驗設(shè)計者和實驗研究的執(zhí)行人，完成數(shù)據(jù)分析，論文的寫作和修改；趙靜瑜、李曉勇、王乃平、趙盼參與實驗設(shè)計和試驗結(jié)果分析；趙二麗數(shù)據(jù)分析；全體作者都閱讀并同意最終的文本。