聶鳳英，焦曉寧，王偉

1 濮陽(yáng)市中醫(yī)醫(yī)院檢驗(yàn)科，河南 濮陽(yáng) 457000

2 河南省胸科醫(yī)院檢驗(yàn)科，鄭州 450000

非小細(xì)胞肺癌（non-small cell lung carcer， NSCLC）是常見(jiàn)的肺癌類(lèi)型，因該病早期無(wú)特異性臨床癥狀，超過(guò)70%的患者確診時(shí)病情已進(jìn)展至中晚期，術(shù)后復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)隨病情進(jìn)展逐漸升高，總生存率也逐漸降至20%，嚴(yán)重威脅患者的生命健康[1]。早期診斷NSCLC，明確疾病嚴(yán)重程度及轉(zhuǎn)移情況，并采取合適的措施有效控制，才能進(jìn)一步提高治療效果，從而改善患者的預(yù)后[2]。目前，臨床主要通過(guò)檢測(cè)血清腫瘤標(biāo)志物診斷NSCLC，但血清腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)存在靈敏度、特異度低等不足，在NSCLC的早期診斷中的效果不明顯[3]。因此，找到理想的NSCLC診斷、療效和預(yù)后評(píng)估的指標(biāo)成為臨床研究的重點(diǎn)。血清Dickkopf-1（DKK1）為DKK家族成員之一，是臨床近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的一種抑癌基因，可直接參與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程[4]。血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）是促腫瘤血管生成的因子之一，目前已有大量研究證實(shí)，VEGF與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移和新生血管生成有關(guān)[5]。基于此，本研究探討血清DKK1、VEGF水平對(duì)NSCLC的診斷效能及與患者臨床特征的關(guān)系，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2019年10月至2021年10月濮陽(yáng)市中醫(yī)醫(yī)院收治的NSCLC患者。納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合《中國(guó)臨床腫瘤學(xué)會(huì)（CSCO）：非小細(xì)胞肺癌診療指南2020》[6]中關(guān)于NSCLC的診斷標(biāo)準(zhǔn)；②經(jīng)病理學(xué)檢查證實(shí)為NSCLC；③TNM分期為Ⅰ~Ⅳ期；④臨床資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并其他惡性腫瘤；②合并免疫性或代謝性疾?。虎垡驀?yán)重精神疾病存在認(rèn)知功能障礙。根據(jù)納入和排除標(biāo)準(zhǔn)，本研究共納入136例NSCLC患者作為觀察組，其中男70例，女66例；年齡26~86歲，平均（53.87±5.34）歲；TNM分期：Ⅰ期42例，Ⅱ期38例，Ⅲ期36例，Ⅳ期20例；病理類(lèi)型：鱗狀細(xì)胞癌60例，腺癌64例，腺鱗癌12例；分化程度：低分化50例，中分化42例，高分化44例。另選取同期濮陽(yáng)市中醫(yī)醫(yī)院收治的100例肺部結(jié)節(jié)患者作為對(duì)照組，其中男52例，女48例；年齡25~87歲，平均（54.12±5.13）歲。兩組患者性別、年齡比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)通過(guò)，所有患者均知情同意并簽署知情同意書(shū)。

1.2 檢測(cè)方法

抽取兩組患者空腹肘靜脈血5 ml，靜置30 min后3000 r/min離心15 min，取上清液后-70℃保存待檢，采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)DKK1和VEGF水平，操作步驟嚴(yán)格遵守試劑盒說(shuō)明書(shū)。DKK1水平＞119.56 pg/L判定為陽(yáng)性，VEGF水平＞142 pg/ml判定為陽(yáng)性。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 20.0軟件對(duì)所有數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，正態(tài)分布計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，組間比較采用兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，組內(nèi)比較采用配對(duì)t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以例數(shù)和率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)；繪制受試者工作特征（receiver operating characteristic，ROC）曲線(xiàn)，計(jì)算曲線(xiàn)下面積（area under the curve，AUC），評(píng)估血清DKK1、VEGF單獨(dú)及聯(lián)合檢測(cè)對(duì)NSCLC的診斷效能；以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 血清DKK1、VEGF陽(yáng)性表達(dá)情況的比較

觀察組患者血清DKK1、VEGF陽(yáng)性表達(dá)率均明顯高于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。（表1）

表1 兩組患者血清DKK1、VEGF陽(yáng)性表達(dá)情況的比較[n（%）]

2.2 血清DKK1、VEGF單獨(dú)及聯(lián)合檢測(cè)對(duì)NSCLC的診斷效能

血清DKK1+VEGF檢測(cè)診斷NSCLC的AUC為0.832（95%CI：0.289~0.846），此時(shí)的靈敏度、特異度分別為98.21%、91.67%。（表2）

表2 血清DKK1、VEGF單獨(dú)及聯(lián)合檢測(cè)對(duì)NSCLC的診斷效能

2.3 不同臨床特征NSCLC患者血清DKK1、VEGF陽(yáng)性表達(dá)情況的比較

不同性別、年齡、病理類(lèi)型、腫瘤直徑NSCLC患者血清DKK1、VEGF陽(yáng)性表達(dá)率比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。分化程度為低分化、TNM分期為Ⅲ~Ⅳ期、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、有骨轉(zhuǎn)移的NSCLC患者血清DKK1、VEGF陽(yáng)性表達(dá)率分別明顯高于分化程度為中高分化、TNM分期為Ⅰ~Ⅱ期、無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和無(wú)骨轉(zhuǎn)移患者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。（表3）

表3 不同臨床特征NSCLC患者血清DKK1、VEGF陽(yáng)性表達(dá)情況的比較（n=136）

3 討論

中晚期NSCLC患者的5年生存率隨著病情進(jìn)展而降低，這可能是因?yàn)橹型砥贜SCLC已出現(xiàn)侵襲轉(zhuǎn)移，而腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移主要由多種抑癌基因和致癌基因共同參與調(diào)控[7]。因此，尋找預(yù)測(cè)NSCLC侵襲轉(zhuǎn)移的分子標(biāo)志物，明確NSCLC的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移機(jī)制，可有效抑制疾病進(jìn)展，提高生存率。但癌胚抗原、細(xì)胞角質(zhì)蛋白19片段抗原21-1（cyto-keratin 19 fragment antigen 21-1，CYFRA21-1）等血清腫瘤標(biāo)志物預(yù)測(cè)NSCLC發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移的靈敏度和特異度均低于80%，預(yù)測(cè)結(jié)果可信度較低，無(wú)法滿(mǎn)足臨床需求[8-9]。

研究認(rèn)為，腫瘤的生長(zhǎng)對(duì)血管存在依賴(lài)性，VEGF作為促新生血管生成的細(xì)胞因子之一，逐漸成為臨床研究的熱點(diǎn)[10-11]。也有研究認(rèn)為，DKK1在肺癌中高表達(dá)，有望為肺癌早期診斷、治療及預(yù)后的預(yù)測(cè)提供參考[12-13]。本研究結(jié)果顯示，觀察組患者血清DKK1、VEGF陽(yáng)性表達(dá)率均明顯高于對(duì)照組，提示血清DKK1、VEGF陽(yáng)性表達(dá)與NSCLC的發(fā)生存在一定關(guān)聯(lián)。與黃麗珍等[14]的研究結(jié)果一致，該研究顯示，NSCLC患者血清VEGF水平明顯高于肺部良性疾病患者，表明NSCLC的發(fā)生與新生血管生成有關(guān)。這可能是因?yàn)?，VEGF可刺激血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖和移行，促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞有絲分裂和轉(zhuǎn)移，重塑細(xì)胞外基質(zhì)，增加血管通透性，促使大量腫瘤血管新生，加速腫瘤的發(fā)生發(fā)展[15-16]。DKK1作為分泌型糖蛋白，可阻斷WNT/β-catenin信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，調(diào)控細(xì)胞分化、增殖和遷移過(guò)程，促使腫瘤細(xì)胞迅速增殖[17-18]。

此外，TNM分期、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和骨轉(zhuǎn)移情況等均與腫瘤進(jìn)展密切相關(guān)，TNM分期越高、分化程度越低，腫瘤進(jìn)展的越快，隨之出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移或骨轉(zhuǎn)移，而腫瘤進(jìn)展過(guò)程中常會(huì)分泌大量的細(xì)胞因子和促血管生成因子，導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞異常增殖，且DKK1對(duì)WNT/β-catenin信號(hào)通路的阻斷可直接參與腫瘤細(xì)胞增殖和侵襲過(guò)程，因此NSCLC患者分期越高、分化程度越低、存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和骨轉(zhuǎn)移等，均會(huì)導(dǎo)致血清DKK1、VEGF異常表達(dá)。本研究結(jié)果顯示，分化程度為低分化、TNM分期為Ⅲ~Ⅳ期、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、有骨轉(zhuǎn)移的NSCLC患者血清DKK1、VEGF陽(yáng)性表達(dá)率分別明顯高于分化程度為中高分化、TNM分期為Ⅰ~Ⅱ期、無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和無(wú)骨轉(zhuǎn)移患者。與李銀鵬等[19]、王林輝等[20]的研究結(jié)果相似，李銀鵬等[19]研究發(fā)現(xiàn)，不同TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和骨轉(zhuǎn)移情況肺癌患者血清DKK1水平存在差異。王林輝等[20]研究發(fā)現(xiàn)，不同分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、器官轉(zhuǎn)移和臨床分期NSCLC患者的血清VEGF水平存在顯著差異。表明血清DKK1、VEGF水平與NSCLC嚴(yán)重程度、器官轉(zhuǎn)移情況密切相關(guān)，可通過(guò)檢測(cè)血清DKK1、VEGF水平對(duì)NSCLC患者的預(yù)后進(jìn)行評(píng)估。但葉颯等[21]的研究發(fā)現(xiàn)，NSCLC高分化和中低分化患者的血清VEGF水平無(wú)明顯差異，與本研究結(jié)果相反，這可能與本研究納入的樣本量較少有關(guān)。

目前臨床對(duì)DKK1+VEGF聯(lián)合檢測(cè)對(duì)NSCLC診斷價(jià)值的研究較少，本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，血清DKK1+VEGF檢測(cè) 診 斷NSCLC的AUC為0.832（95%CI：0.289~0.846），此時(shí)的靈敏度、特異度分別為98.21%、91.67%，高于二者單獨(dú)檢測(cè)。提示血清DKK1、VEGF聯(lián)合檢測(cè)對(duì)NSCLC的診斷價(jià)值較高，可在一定程度上提高診斷準(zhǔn)確度，在早期NSCLC中發(fā)揮十分重要的作用。

本研究尚存在一些不足，如樣本量較少，且為單中心回顧性研究。建議后續(xù)開(kāi)展大樣本量、多中心的前瞻性研究，進(jìn)一步驗(yàn)證本研究結(jié)果。

綜上所述，NSCLC患者血清DKK1、VEGF的陽(yáng)性表達(dá)率較高，且與NSCLC患者臨床分期、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況和骨轉(zhuǎn)移情況有關(guān)，血清DKK1、VEGF聯(lián)合檢測(cè)對(duì)NSCLC患者的診斷價(jià)值較高。