王 靜，姚 靜，王海亞

（石家莊高新技術產(chǎn)業(yè)開發(fā)區(qū)供水排水公司，河北 石家莊 050035）

呋喃丹是一種氨基甲酸酯類殺蟲劑和殺線蟲劑。純品為白色結晶，按中國農(nóng)藥毒性分級標準，呋喃丹屬于高毒農(nóng)藥，不能用在蔬菜和果樹上。在《生活飲用水衛(wèi)生標準》（GB5749-2006）及《生活飲用水衛(wèi)生標準》（GB5749-2022）中呋喃丹均為毒理指標。因此，準確測定呋喃丹意義重大。

1 實驗方法與驗證參數(shù)

高壓液相色譜法，參數(shù)：線性方程、有證標準物質校準等；對照《生活飲用水標準檢驗方法》（GB/T 5750.9-2006）15.1對高壓液相色譜法進行驗證，參照該標準方法，建立線性方程，進行準確度（正確度、精密度、加標回收率、標準樣品）、檢出限等參數(shù)驗證。

2 標準依據(jù)

《生活飲用水標準檢驗方法》（GB/T 5750.9-2006）[1]15.1高壓液相色譜法；《合格評定 化學分析方法確認和驗證指南》（GB/T 27417-2017）[2]；《環(huán)境監(jiān)測分析方法標準制訂技術導則》（HJ168-2020）[3]；《化學分析方法驗證確認和內部質量控制要求》（GB/T 32465-2015）[4]。

3 采用方法學驗證參數(shù)

驗證方法：有證標準物質校準、加標回收率測定；

驗證參數(shù)：檢出限、正確度。

4 方法原理

樣品經(jīng)過濾后注入反相HPLC柱中，其各種組分經(jīng)梯度洗脫色譜方式分離。經(jīng)過柱分離后，氨基甲酸酯類化合物與氫氧化鈉發(fā)生水解反應，生成的甲胺與鄰苯二醛（OPA）和2-巰基乙醇（MERC）反應生成一種強熒光的異吲哚產(chǎn)物，可用熒光檢測器定量。柱后反應一般對伯胺類比較敏感，因為它們能生成測定的熒光加合物。干擾的大小取決于它們的洗脫時間或熒光強度，干擾還可能來源于污染，因此，要求使用高純度試劑和溶劑[5]。

5 試劑和材料

柱后反應產(chǎn)生干擾較大，干擾還可能來源于污染，因此，要求使用高純度的試劑和色譜純的或相當?shù)娜軇ㄒ?HPLC 檢驗無雜峰出現(xiàn)）。衍生劑、流動相、上機樣品采用0.45 pm過濾膜過濾。

①甲醇：HPLC級；②純水：電阻大于18.0 MΩ；③水解試劑；④衍生試劑：OPA溶液。

6 儀器設備

液相色譜儀

7 測定條件

儀器的調整，見表1

表1 流動相：梯度洗脫

流量：1.0 ml/min；

熒光檢測器Ex=339 nm；Em=445 nm；

柱后反應條件：

A水解試劑：0.3 ml/min；

B銜生：OPA溶液，0.3 ml/min。

8 校準

8.1 線性回歸方程及相關系數(shù)見表1

參考《生活飲用水標準檢驗方法》（GB/T 5750-2006）配制標準系列，濃度范圍2.00～200.00 μg/L。

分別移取濃度為1.0 mg/l呋喃丹標準使用液20 μl，100 μl，400 μl，1.00 ml，2.00 ml溶于10 ml容量瓶中，用甲醇+水溶液定容（42+58）。則呋喃丹溶液的濃度分別為2.00 μg/L，10.00 μg/L，40.00 μg/L，100.00 μg/L，200.00 μg/L。見表2。

表2 呋喃丹的標準曲線

8.2 結論

通過以上檢測數(shù)據(jù)結果，可以計算得出方法的相關系數(shù)滿足《生活飲用水標準檢驗方法》（GB/T 5750.9-2006）質量控制要求；方法的線性范圍符合《生活飲用水標準檢驗方法》（GB/T 5750.9-2006）質量控制要求。

9 方法檢出限的測定

根據(jù)《環(huán)境檢測分析方法標準制定技術導則》（HJ168-2020）相關要求，對空白中未檢出目標物的樣品，按照樣品分析的全部步驟，對濃度值或含量為估計檢出限值的3～5倍的樣品進行n次（n≥7）平行測定。計算n次平行測定的標準偏差，計算出方法檢出限。

方法檢出限測定：測定濃度為2.00 μg/L的樣品，7次測定結果分別為：2.83 μg/L，2.90 μg/L，3.03 μg/L，3.03 μg/L，3.14 μg/L，3.21 μg/L，3.25 μg/L。通過Dixon檢驗法對數(shù)據(jù)進行檢驗，未檢測出離群值。見表3。

表3 方法檢出限、測定下限的測試數(shù)據(jù)

檢出限和測定下限的確定

方法檢出限：MDL=t（n-1，0.95）*S=3.143*0.156 μg/L=0.49 μg/L

測定下限：0.49*4=1.96 μg/L

根據(jù)以上測定數(shù)據(jù)，結合本單位實際水樣測定情況，規(guī)定方法測定下限為2 μg/L，能夠滿足本實驗室方法項目要求。

10 準確度測定

10.1 精密度的驗證

選取北京壇墨質檢科技有限公司標準物質配制標準系列，分別選取低、中、高三個不同濃度值進行測定，每個濃度測定7次，結果見表4。

表4 精密度驗證

通過以上檢測數(shù)據(jù)對精密度進行評估，以上檢測數(shù)據(jù)結果符合《合格評定化學分析方法確認和驗證指南》（GB/T 27417-2017）、《化學分析方法驗證確認和內部質量控制要求》（GB/T 32465-2015）相關要求。

10.2 正確度的驗證

10.2.1 標準樣品測定

選用北京壇墨質檢科技股份有限公司標準樣品，產(chǎn)品批號A2007096，標準值：83.8 μg/L，擴展不確定度（K=2）：4.2 mg/L稀釋1000倍后標準值為83.8 μg/L，擴展不確定度（K=2）：4.2 μg/L。見表5。

表5 標準樣品測定

從以上測定結果可知，質控樣品的測定值在規(guī)定范圍內，符合要求。

10.2.2 加標回收率測定

對兩個樣品分別進行加標回收實驗，低濃度原液和加標后的樣品各測定7次，高濃度樣品原液和加標后的樣品各測定10次，結果見表6。

表6 加標回收率測定

根據(jù)實驗結果可知，加標回收率測定結果滿足《合格評定 化學分析方法確認和驗證指南》（GB/T 27417-2017）、《化學分析方法驗證確認和內部質量控制要求》（GB/T 32465-2015）要求。

總結：根據(jù)以上檢測數(shù)據(jù)可知方法相關系數(shù)r=0.999 96符合《生活飲用水標準檢驗方法》（GB/T 5750.6-2006）質量控制要求；精密度范圍2.8%～5.3%符合相關要求；標準樣品滿足要求；加標回收率為98.3%～100%，滿足《合格評定 化學分析方法確認和驗證指南》（GB/T 27417-2017）要求，所有測定參數(shù)均符合相關標準規(guī)定。本實驗室有能力正確使用該方法。