袁 園

（營(yíng)山縣產(chǎn)品質(zhì)量計(jì)量檢驗(yàn)檢測(cè)所，四川南充 637700）

苦蕎即苦蕎麥，學(xué)名韃靼蕎麥，別名喬葉七、烏麥，屬廖科，被譽(yù)為“五谷之王”[1]。苦蕎主要分布在四川、云南、貴州等地，其在涼山彝族自治州的產(chǎn)量約占全國(guó)產(chǎn)量的70%，被稱(chēng)為“世界苦蕎之鄉(xiāng)”[2]?？嗍w由籽粒和麩皮組成，麩皮占其干重的24%，苦蕎麩皮中含有豐富的黃酮類(lèi)化合物、膳食纖維等，其中黃酮類(lèi)化合物具有降血壓、降血糖、降血脂等作用，是評(píng)價(jià)苦蕎產(chǎn)品的重要指標(biāo)[3-4]。

研究表明苦蕎麩皮中黃酮含量達(dá)到6%～7%，目前對(duì)苦蕎麩皮中黃酮提取工藝的研究正趨于成熟化[5]。本試驗(yàn)以水為提取溶劑，是對(duì)提取劑的一種創(chuàng)新。相比以往的提取方法，超聲水提工藝具有環(huán)保、成本低、原料易得以及操作簡(jiǎn)單等優(yōu)點(diǎn)，采用該方法不但可以有效提取苦蕎麩皮中黃酮類(lèi)化合物，而且充分迎合了國(guó)家倡導(dǎo)的科研工作需節(jié)能環(huán)保的理念。隨著人們對(duì)黃酮了解的加深，黃酮類(lèi)化合物已應(yīng)用到各領(lǐng)域。由于總黃酮成分無(wú)法得知，蘆丁與其結(jié)構(gòu)相似，一般用蘆丁來(lái)測(cè)定總黃酮量[6-8]。

本研究以苦蕎麩皮為原料，通過(guò)單因素試驗(yàn)研究超聲時(shí)間、pH對(duì)黃酮提取得率的影響，確定了最佳提取工藝，為苦蕎麩皮的實(shí)際生產(chǎn)應(yīng)用提供了有力依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

苦蕎麥麩皮（西昌航飛苦蕎科技發(fā)展有限公司提供）；蕓香葉苷標(biāo)準(zhǔn)品（成都市科龍化工試劑廠生產(chǎn)）。

甲醇（分析純）；甲醇（色譜純）；磷酸（色譜純）；95%乙醇（分析純）；2%磷酸（分析純）；2%氫氧化鈉（分析純）；混合磷酸鹽（分析純）；鄰苯二甲酸氫鉀（分析純）；四硼酸鈉（分析純）；超 純水。

1.2 儀器與設(shè)備

高效液相色譜儀（Thermo Scientific）；電子天平（沈陽(yáng)龍騰電子有限公司）；微孔濾膜0.45 μm；超聲水浴箱（昆山禾創(chuàng)超聲儀器有限公司）；PHS-3E pH計(jì)（上海儀電科學(xué)儀器股份有限公司）；高速離心機(jī)（上海盧湘儀離心機(jī)儀器有限公司）；UPT-1-20T優(yōu)普特實(shí)驗(yàn)室超純水器（成都超純科技有限公司）。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 高效液相色譜儀條件

流動(dòng)相：甲醇∶0.3%的磷酸溶液（V∶V）= 40∶60（黃酮為弱酸性，弱酸性流動(dòng)相可增加保留時(shí)間）；柱溫：40 ℃；波長(zhǎng)：360 nm；流速： 1 mL·min-1；進(jìn)樣量：20 μL；色譜柱：250 mm×4.6 mm，5 μm。

1.3.2 不同pH對(duì)測(cè)得黃酮得率的影響

稱(chēng)取約5.00 g苦蕎麥麩共12份（即設(shè)置12個(gè)水平），加入超純水70 mL，用2%磷酸、2%的氫氧化鈉調(diào)節(jié)溶液pH，鄰苯二甲酸氫鉀、混合磷酸鹽、四硼酸鈉分別作為在酸性、中性、堿性下的緩沖劑，將其pH分別調(diào)節(jié)至1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11和12，在超聲水浴箱內(nèi)分別超聲2.0 h后放入離心機(jī)內(nèi)離心，之后過(guò)濾，將澄清液轉(zhuǎn)移至100 mL容量瓶中，并用超純水洗滌后定容。最后檢測(cè)其峰面積，并計(jì)算出黃酮得率，比較不同超聲時(shí)間對(duì)苦蕎麩皮中黃酮得率的影響（重復(fù)3次），見(jiàn)表1。

表1 不同pH下苦蕎麩皮稱(chēng)樣量

1.3.3 不同超聲時(shí)間對(duì)測(cè)得黃酮得率的影響

稱(chēng)取約5.00 g苦蕎麥麩共7份（即設(shè)置7個(gè)水平），加入超純水70 mL，調(diào)節(jié)pH至11，在超聲水浴箱內(nèi)分別超聲0.5 h、1.0 h、1.5 h、2.0 h、2.5 h、3.0 h和 3.5 h后放入離心機(jī)內(nèi)離心，之后過(guò)濾，將澄清液轉(zhuǎn)移至100 mL容量瓶中，并用超純水洗滌后定容。最后檢測(cè)其峰面積，并計(jì)算出黃酮得率，比較不同超聲時(shí)間對(duì)苦蕎麩皮中黃酮得率的影響（重復(fù)3次），見(jiàn)表2。

1.3.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制方法

用移液槍移取1 000 μg·mL-1蘆丁標(biāo)準(zhǔn)液1 mL于100 mL容量瓶中，用甲醇定容并搖勻，配制成 10 μg·mL-1的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)中間液。分別吸取1 mL、 2 mL、4 mL、6 mL和8 mL的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)中間液至 10 mL容量瓶，用甲醇定容并搖勻，分別配制成 1 μg·mL-1、2 μg·mL-1、4 μg·mL-1、6 μg·mL-1和 8 μg·mL-1的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)使用液，用濾頭過(guò)濾后，放入高效液相色譜儀，以標(biāo)準(zhǔn)使用液濃度為橫坐標(biāo)x，峰面積值為縱坐標(biāo)y，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.3.5 黃酮得率的計(jì)算

黃酮得率按公式（1）計(jì)算。

式中：c為標(biāo)準(zhǔn)曲線上查的進(jìn)樣液中黃酮的含量，μg·mL-1；v為試樣稀釋液總體積，mL；m為試樣質(zhì) 量，g。

2 結(jié)果與分析

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線

如圖1所示，以標(biāo)準(zhǔn)使用液濃度為橫坐標(biāo)、峰面積為縱坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)曲線中蘆丁標(biāo)準(zhǔn)使用液濃度為 1 μg·mL-1、2 μg·mL-1、4 μg·mL-1、6 μg·mL-1和 8 μg·mL-1，其 對(duì) 應(yīng) 峰 面 積 分 別 為2 724.1 mAu、 5 400.6 mAu、10 458.7 mAu、15 860.9 mAu、 20 613.5 mAu，所繪制得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為y=2 566.8x+ 231.04，R2=0.999 6。

2.2 pH對(duì)苦蕎麩皮中黃酮提取效果的影響

由表3可以看出，pH值為11時(shí)，黃酮得率較高。可能是因?yàn)辄S酮類(lèi)化合物具有酚羥基顯酸性，所以在堿性條件下得率較高。

圖1 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)使用液濃度與峰面積標(biāo)準(zhǔn)曲線

表3 不同pH下對(duì)黃酮得率的測(cè)定結(jié)果

2.3 超聲時(shí)間對(duì)苦蕎麩皮中黃酮提取效果的影響

由表4可知，pH=11時(shí)，2 h以前，隨著超聲時(shí)間的增加，黃酮得率呈增加的趨勢(shì)；超聲時(shí)間為2 h時(shí)，黃酮得率的平均值達(dá)到最大，為0.814 0%；2 h以后，隨著超聲時(shí)間的增加，黃酮得率基本保持不變。因此，當(dāng)提取時(shí)間為2 h時(shí)，黃酮提取效果最佳。

表4 不同超聲時(shí)間下的黃酮得率

3 結(jié)論

本試驗(yàn)采用單因素試驗(yàn)的方法，探究了不同超聲時(shí)間對(duì)苦蕎麩皮中黃酮提取效果的影響。結(jié)果顯示，pH為11、超聲時(shí)間為2 h時(shí)，超聲水提苦蕎麩皮中黃酮得率平均值最高，因此確定超聲水提苦蕎麩皮中黃酮最優(yōu)工藝為pH11、超聲時(shí)間2 h。