孫心，李叔偉

（1.哈藥集團(tuán)生物疫苗有限公司 哈爾濱 150040；2.齊齊哈爾大學(xué) 黑龍江齊齊哈爾 161000）

從目前我國流行非洲豬瘟趨勢上來看，以后非洲豬瘟在我國會(huì)存在相當(dāng)長的一段時(shí)間，那么在非洲豬瘟長期存在的情況下，減少豬群疫苗免疫次數(shù)，減少疫苗接種后對豬群帶來的應(yīng)激是一個(gè)趨勢，對于豬群來說豬瘟疫苗和偽狂犬疫苗是最為基礎(chǔ)也是最為重要的疫苗。由于仔豬和母豬的豬瘟和偽狂犬疫苗的免疫程序相似（包括偽狂犬的1～3 日齡的滴鼻免疫和豬瘟的超前免疫），免疫次數(shù)大體一致，疫苗生產(chǎn)工藝和免疫效果評價(jià)都很成熟，基于以上原因，筆者建議豬瘟疫苗和偽狂犬疫苗進(jìn)行同時(shí)混合接種，這樣減少免疫次數(shù)的同時(shí)減少接種疫苗對豬群造成的應(yīng)激。

1 試驗(yàn)材料與方法

1.1 試驗(yàn)用品

豬瘟抗體檢測試劑盒、偽狂犬gB、偽狂犬gE 檢測試劑盒購自IDEXX 公司。

豬瘟疫苗20 頭份、偽狂犬疫苗20 頭份和稀釋液均為哈藥疫苗公司提供的高端藍(lán)瓶產(chǎn)品。

國內(nèi)某公司豬瘟疫苗20 頭份、國內(nèi)某公司偽狂犬疫苗20 頭份均在正規(guī)獸藥市場采購。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物

90 頭1 日齡仔豬，分為三組，每組30 頭，黑龍江某規(guī)?；i場。

1.3 試驗(yàn)分組與疫苗接種（表1）

試驗(yàn)分組與疫苗接種計(jì)劃設(shè)計(jì)見表1。

表1 試驗(yàn)分組與疫苗接種計(jì)劃設(shè)計(jì)

1.4 免疫劑量

豬瘟與偽狂犬各1 頭份，每頭份用1mL 專用稀釋液進(jìn)行稀釋，聯(lián)合免疫時(shí)，每頭豬接種2mL。

1.5 母源抗體檢測

檢測母豬豬瘟與偽狂犬抗體水平，挑選出仔豬豬瘟和偽狂犬母源抗體在同一水平線上的豬群進(jìn)行試驗(yàn)，這樣主要是為了避免母源抗體不整齊，影響試驗(yàn)效果。根據(jù)仔豬試驗(yàn)數(shù)量和母豬產(chǎn)子數(shù)量，對20 頭母豬進(jìn)行抗體檢測。

1.6 抗體檢測

三個(gè)試驗(yàn)組，每組在不同日齡分別檢測20 頭豬血清，分別在35、70、100、130、160 日齡進(jìn)行采血，每個(gè)組別分別采集20 頭豬血液，分離血清，檢測豬瘟和偽狂犬抗體滴度。豬瘟疫苗抗體和偽狂犬疫苗抗體的檢測應(yīng)用豬瘟抗體檢測試劑盒、偽狂犬gB、偽狂犬gE 檢測試劑盒參照IDEXX 公司的試劑盒說明書檢測豬瘟和偽狂犬抗體。

1.7 體溫測定

疫苗接種后分別在1、2、4、8、12、24h 對三個(gè)組別豬群進(jìn)行體溫測定。

1.8 應(yīng)激反應(yīng)觀察

三組豬群（每組20 頭）疫苗接種后，在2h 內(nèi)通過豬群的精神狀態(tài)、嘔吐、發(fā)熱、抽搐、死亡等癥狀觀察豬群的整體狀態(tài)，并記錄。

2 試驗(yàn)結(jié)果

1）母源抗體效價(jià)結(jié)果見表2。

表2 母源抗體效價(jià)結(jié)果

2）豬瘟抗體效價(jià)檢測結(jié)果（阻斷率%平均值）見表3 和圖1。

圖1 不同組別豬瘟抗體滴度消長規(guī)律

表3 豬瘟抗體效價(jià)檢測結(jié)果

在35 日齡和70 日齡兩次對豬群進(jìn)行豬瘟和偽狂犬疫苗聯(lián)合免疫后，70 日齡后豬瘟阻斷率在55%以上。A、B、C 三組之間并無明顯差異，保護(hù)期能維持160 日齡。

3）豬瘟抗體陽性率檢測結(jié)果（陽性率%平均值）見表4 和圖2。

表4 豬瘟抗體陽性率檢測結(jié)果

圖2 不同組別豬瘟陽性率消長規(guī)律

在35 日齡和70 日齡兩次對豬群進(jìn)行豬瘟和偽狂犬疫苗聯(lián)合免疫后，100 日齡后豬瘟陽性率在80%以上。A、B、C 三組之間并無明顯差異，說明聯(lián)合免疫疫苗對豬群豬瘟有很好的保護(hù)率。

4）偽狂犬gE 抗體效價(jià)檢測結(jié)果（S/N 值平均值）見表5 和圖3。

圖3 不同組別偽狂犬gE 抗體效價(jià)消長規(guī)律

表5 偽狂犬gE抗體效價(jià)檢測結(jié)果

在35 日齡和70 日齡兩次對豬群進(jìn)行豬瘟和偽狂犬疫苗聯(lián)合免疫后，70 日齡后偽狂犬gE 均為陰性，說明豬群沒有偽狂犬野毒感染。A、B、C 三組之間并無明顯差異，保護(hù)期能維持160 日齡。

5）偽狂犬gB 抗體效價(jià)檢測結(jié)果（S/N 值平均值）見表6 和圖4。

表6 偽狂犬gB抗體效價(jià)檢測結(jié)果

圖4 不同組別偽狂犬gB 抗體效價(jià)消長規(guī)律

在35 日齡和70 日齡兩次對豬群進(jìn)行豬瘟和偽狂犬疫苗聯(lián)合免疫后，70 日齡后偽狂犬gB 均為陰性，說明偽狂犬疫苗在豬群中產(chǎn)生較高的保護(hù)率。B 組要略好于A 組和C 組，A、B、C 三組之間并無明顯差異，保護(hù)期能維持160 日齡。

6）豬群免疫后體溫平均值測定結(jié)果（℃）見表7 和圖5。

表7 豬群免疫后體溫平均值測定結(jié)果

圖5 不同組別豬群體溫檢測結(jié)果

疫苗聯(lián)合使用后在疫苗接種后1、2、4、8、12、24h 監(jiān)測豬群體溫，A、B、C 三組豬群體溫正常。

7）豬群應(yīng)激反應(yīng)觀察。三組別接種疫苗后，通過豬群的精神狀態(tài)、嘔吐、發(fā)熱、抽搐、死亡等癥狀觀察2h，豬群整體狀況良好（表8）。

表8 豬群應(yīng)激反應(yīng)觀察

3 討論

3.1 母源抗體檢測

本試驗(yàn)在進(jìn)行聯(lián)合免疫前，對分娩母豬在產(chǎn)前進(jìn)行豬瘟和偽狂犬母源抗體測定，確定母源抗體水平，同時(shí)挑選出母源抗體水平相對一致的母豬，進(jìn)行后續(xù)仔豬聯(lián)合免疫試驗(yàn)，以確保本試驗(yàn)整體效果。本試驗(yàn)所選取的10 頭母豬的豬瘟抗體值和偽狂犬抗體值相近，豬瘟阻斷率是89.08%，偽狂犬（gE）為1.044，偽狂犬（gB）為0.1093，說明母豬的豬瘟和偽狂犬抗體水平都很好，相對仔豬也有較好的保護(hù)力。

3.2 日齡選擇

接種日齡是根據(jù)目前常規(guī)免疫程序制定，豬瘟和偽狂犬接種均為三次免疫。豬瘟1 日齡免疫屬于超前免疫，在免疫中可以不進(jìn)行接種，本試驗(yàn)主要是為了與豬瘟偽狂犬聯(lián)合疫苗進(jìn)行對比，由于在臨床上1 日齡接種豬瘟疫苗較少，本試驗(yàn)在1 日齡免疫程序中，不接種豬瘟疫苗。

3.3 免疫劑量選擇

本次試驗(yàn)豬瘟和偽狂犬疫苗都選擇最小接種劑量，豬瘟和偽狂犬聯(lián)合疫苗也選擇最小劑量，接種劑量相同，就可以在同等水平下對比免疫效果。在臨床上一般使用劑量會(huì)大一些，但是這并不影響本次試驗(yàn)的對比結(jié)果。

3.4 豬瘟抗體滴度分析

在仔豬35 日齡進(jìn)行豬瘟和偽狂犬聯(lián)合免疫，同時(shí)采血檢測抗體，由于母源抗體的保護(hù)，35 日齡A、B、C 三組豬瘟阻斷率為陽性，70 日齡再次接種豬瘟和偽狂犬疫苗聯(lián)合免疫，同時(shí)采血檢測抗體，A、B、C 三組豬瘟阻斷率為陽性，100、130、160 日齡進(jìn)行檢測，A、B、C 三組豬瘟阻斷率都升高，均為陽性。二免70 日齡后，豬瘟阻斷率都為陽性，而且三組阻斷率都在80%以上，A 組和B 組與對照組C 組之間無明顯差異，說明豬瘟和偽狂犬疫苗聯(lián)合免疫與單獨(dú)免疫豬瘟疫苗對豬群產(chǎn)生豬瘟抗體值無影響，對豬群都有較好的保護(hù)率。

3.5 偽狂犬抗體滴度分析

偽狂犬是在1 日齡進(jìn)行滴鼻免疫，35 日齡和70 日齡聯(lián)合免疫，從35 日齡、70 日齡、100 日齡、130 日齡的檢測結(jié)果說明，A、B、C 三組偽狂犬gE 均為陰性，偽狂犬gB 均為陽性，A 組和B 組與對照組C 組相比較偽狂犬gE 值無顯著差異。A 組和B 組與對照組C 組相比較偽狂犬gB 值無顯著差異，但相對比較B 組偽狂犬gB 值要略低于A 組和對照組C 組，說明B 組偽狂犬疫苗保護(hù)率要好于A 組和對照組C 組，但是無顯著差異。

3.6 豬群體溫測定結(jié)果分析

本試驗(yàn)豬瘟和偽狂犬聯(lián)合免疫主要從兩個(gè)方面說明本試驗(yàn)是否可以進(jìn)行，第一點(diǎn)是聯(lián)合免疫疫苗使用后對豬群的保護(hù)率情況，第二點(diǎn)是聯(lián)合免疫疫苗是否對豬群有應(yīng)激反應(yīng)。本試驗(yàn)在聯(lián)合疫苗接種后的1、2、4、8、12、24h 進(jìn)行體溫測定，同時(shí)觀察豬群精神狀態(tài)，A、B、C 三組豬群體溫正常，精神狀態(tài)正常，豬群并無應(yīng)激反應(yīng)癥狀。

4 結(jié)論

本試驗(yàn)通過豬瘟和偽狂犬疫苗聯(lián)合免疫，選取兩個(gè)廠家的疫苗進(jìn)行聯(lián)合免疫，對單獨(dú)豬瘟和偽狂犬疫苗免疫進(jìn)行對比，從檢測豬瘟阻斷率和偽狂犬gE 和gB 值判斷聯(lián)合免疫疫苗對豬群的保護(hù)率情況，從檢測結(jié)果看，A 組和B 組疫苗聯(lián)合免疫使用與C 組單獨(dú)疫苗免疫所產(chǎn)生的豬瘟抗體值和偽狂犬抗體值并無明顯差異，差異不顯著，而且對豬群都能產(chǎn)生較高的保護(hù)率，來預(yù)防豬群豬瘟和偽狂犬疫病的發(fā)生。

本試驗(yàn)通過疫苗接種后在不同時(shí)間點(diǎn)測定豬群體溫并且同時(shí)觀察豬群的精神狀態(tài)，以此判斷豬瘟和偽狂犬疫苗聯(lián)合使用是否對豬群產(chǎn)生應(yīng)激反應(yīng)，結(jié)果表明試驗(yàn)A 組、B 組和對照組C 組豬群體溫正常，精神狀態(tài)正常，三組豬群無不良反應(yīng)，說明豬瘟和偽狂犬疫苗聯(lián)合免疫對豬群無應(yīng)激反應(yīng)，安全。

綜上所述，豬瘟與偽狂犬疫苗聯(lián)合使用對豬群產(chǎn)生較好的豬瘟抗體滴度和偽狂犬抗體值，對豬群有較好的保護(hù)率，無相互干擾的問題，同時(shí)疫苗聯(lián)合免疫對豬群無明顯應(yīng)激反應(yīng)。在生產(chǎn)中可以推廣豬瘟與偽狂犬疫苗聯(lián)合使用方案，可以減少免疫次數(shù)節(jié)約成本，又可以減少多次免疫對豬群造成的應(yīng)激反應(yīng)。