陸天炎 黃瑩瑩 張佳娜

根治性手術(shù)是目前國內(nèi)外公認(rèn)的治療早期子宮頸癌最有效的手段，但部分患者病情進(jìn)展迅速，可能難以獲得理想的預(yù)后轉(zhuǎn)歸效果[1-2]。迄今為止，關(guān)于子宮頸癌的診斷往往依靠組織活檢、陰道鏡檢查以及HPV 檢測等，然而上述相關(guān)診斷方式存在一定的局限性。隨著相關(guān)研究的日益深入，不少學(xué)者發(fā)現(xiàn)分子標(biāo)志物可能在子宮頸癌早期診斷中具有極其重要的作用，但可用以判斷子宮頸癌進(jìn)展情況以及預(yù)后評(píng)估的分子標(biāo)志物較少[3]。細(xì)胞角蛋白（CK）是細(xì)胞骨架中間絲蛋白之一，往往存在于上皮組織細(xì)胞質(zhì)內(nèi)，且有相關(guān)研究報(bào)道證實(shí)，CK10 在惡性腫瘤組織中存在異常表達(dá)，可能和子宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展以及預(yù)后轉(zhuǎn)歸密切相關(guān)[4]。Ki-67 屬于DNA 結(jié)合蛋白之一，廣泛存在于增殖細(xì)胞內(nèi)，介導(dǎo)了驅(qū)動(dòng)細(xì)胞周期的調(diào)控過程，被廣泛用作鑒別正常生長細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞的增殖狀況，可能和子宮頸癌發(fā)展有關(guān)[5]。鑒于此，本文通過研究子宮頸癌患者組織中CK10、Ki-67 表達(dá)及臨床意義，旨在為臨床治療提供數(shù)據(jù)支持，現(xiàn)做以下報(bào)道。

1 資料與方法

1.1 一般資料 回顧性分析2017 年10 月-2020 年10 月于九江市婦幼保健院完成子宮頸癌切除術(shù)的60 例子宮頸癌患者臨床資料。入組標(biāo)準(zhǔn)：（1）所有受試者均經(jīng)手術(shù)病理檢查確診為子宮頸癌；（2）均為成年女性；（3）臨床病歷資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）入組前接受過放化療等抗腫瘤治療；（2）合并嚴(yán)重內(nèi)科和/或外科疾?。唬?）正處于妊娠期或哺乳期；（4）神志異?；虬橛芯窦膊。唬?）研究期間因故退出或失訪。患者年齡44～78 歲，平均（60.11±10.35）歲；體重指數(shù)（BMI）19～32 kg/m2，平均（23.16±2.35）kg/m2；受教育年限6～16 年，平均（10.35±1.36）年；病灶直徑2.3～7.7 cm，平均（4.56±1.20）cm；臨床國際婦產(chǎn)科聯(lián)盟（FIGO）分期：Ⅰ期56 例，Ⅱ期2 例，Ⅲ期2 例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移6 例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移54 例。該研究經(jīng)過醫(yī)院倫理委員會(huì)審批。

1.2 方法 分別采集所有患者的子宮頸癌組織以及癌旁正常組織，采用甲醛固定，并予以石蠟包埋。借助Leica RM 2235 全自動(dòng)輪轉(zhuǎn)式切片機(jī)完成連續(xù)切片，切片厚度以4 μm 為宜。取平切片完成DAB染色處理，之后遵循試劑盒說明書實(shí)施固定、血清封閉、洗滌以及DAB 染色處理。隨后采用免疫組織化學(xué)法檢測CK10、Ki-67 表達(dá)情況，取磷酸鹽緩沖液替代一抗為陰性對(duì)照。其中CK10 及Ki-67 鼠單克隆抗體試劑盒、DAB 染色液均選用上海杰浩生物技術(shù)有限公司產(chǎn)品。

1.3 觀察指標(biāo)及判定標(biāo)準(zhǔn) 比較不同子宮頸組織CK10、Ki-67 表達(dá)情況，分析上述兩項(xiàng)蛋白表達(dá)情況和子宮頸癌患者臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系。結(jié)果判定，CK10、Ki-67 相關(guān)染色結(jié)果均由醫(yī)院病理科2 名經(jīng)驗(yàn)豐富的醫(yī)師以雙盲法完成評(píng)估：隨機(jī)選擇5 個(gè)高倍鏡視野，每個(gè)視野細(xì)胞數(shù)為200 個(gè)，觀察陽性細(xì)胞占比情況。陽性細(xì)胞占比評(píng)分：其中陽性細(xì)胞占比≤5%為0 分，6%～25%為1 分，26%～50%為2 分，51%～75%為3 分，＞75%為4 分。細(xì)胞染色評(píng)分如下：無染色即0 分，淡黃色即1 分，棕黃色即2 分，棕褐色即3 分。以上述兩種評(píng)分乘積作為最終結(jié)果，0～3 分記為陰性，4～12 分記為陽性[6]。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 以SPSS 22.0 軟件實(shí)現(xiàn)對(duì)本研究數(shù)據(jù)的分析，計(jì)量數(shù)據(jù)通過（）表示，分析前予以正態(tài)性與方差齊性檢驗(yàn)，呈正態(tài)分布，即開展t 檢驗(yàn)。計(jì)數(shù)資料的表示以率（%）實(shí)現(xiàn)，進(jìn)行χ2檢驗(yàn)。以受試者工作特征（ROC）曲線分析明確CK10、Ki-67 評(píng)估子宮頸癌患者臨床分期以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的效能。P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同子宮頸組織CK10、Ki-67 表達(dá)對(duì)比 子宮頸癌組織CK10 陽性率為18.33%，低于癌旁正常組織的80.00%，而Ki-67 陽性率為88.33%，高于癌旁正常組織的11.67%，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表1。

表1 不同子宮頸組織CK10、Ki-67表達(dá)對(duì)比[例（%）]

2.2 CK10、Ki-67 表達(dá)情況和子宮頸癌患者臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系 臨床FIGO 分期Ⅱ、Ⅲ期患者CK10 陽性率均為0，均低于臨床FIGO 分期Ⅰ期患者，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者CK10 陽性率為0，低于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者的20.37%，但差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；臨床FIGO 分期Ⅱ、Ⅲ期患者Ki-67 陽性率均為100%，均高于臨床FIGO 分期Ⅰ期患者，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者Ki-67 陽性率為100%，高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者，但差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見表2、3。

表2 CK10表達(dá)情況和子宮頸癌患者臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系[例（%）]

2.3 CK10、Ki-67 表達(dá)評(píng)估子宮頸癌患者臨床分期Ⅱ、Ⅲ期效能的ROC 曲線分析 經(jīng)ROC 曲線分析可得，CK10 與Ki-67 聯(lián)合檢測評(píng)估子宮頸癌患者臨床分期的曲線下面積、敏感度及特異度均高于上述兩項(xiàng)指標(biāo)單獨(dú)檢測，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表4、圖1。

圖1 CK10、Ki-67表達(dá)評(píng)估子宮頸癌患者臨床分期效能的ROC曲線

表3 Ki-67表達(dá)情況和子宮頸癌患者臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系[例（%）]

表4 CK10、Ki-67表達(dá)評(píng)估子宮頸癌患者臨床分期Ⅱ、Ⅲ期效能的ROC曲線分析

2.4 CK10、Ki-67 表達(dá)評(píng)估子宮頸癌患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移效能的ROC 曲線分析 經(jīng)ROC 曲線分析可得，CK10 與Ki-67 聯(lián)合檢測評(píng)估子宮頸癌患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的曲線下面積、敏感度以及特異度均高于上述兩項(xiàng)指標(biāo)單獨(dú)檢測，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見圖2、表5。

圖2 CK10、Ki-67表達(dá)評(píng)估子宮頸癌患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移效能的ROC曲線

表5 CK10、Ki-67表達(dá)評(píng)估子宮頸癌患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移效能的ROC曲線分析

3 討論

伴隨子宮頸細(xì)胞學(xué)篩查的應(yīng)用，子宮頸癌早期檢出率以及遠(yuǎn)期生存率均有所提高，然而可用以評(píng)估早期子宮頸癌病變惡化的分子標(biāo)志物并不多見[7-9]。因此，尋求一種可早期評(píng)估子宮頸癌進(jìn)展的分子標(biāo)志物顯得尤為重要。CK 可通過細(xì)胞間的相關(guān)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路影響腫瘤發(fā)生、進(jìn)展，且CK 于差異性器官以及組織中的表達(dá)存在明顯差異，其表達(dá)情況可能和腫瘤細(xì)胞侵襲力有關(guān)，繼而為疾病的鑒別診斷提供參考依據(jù)[10]。Ki-67 則是DNA 結(jié)合蛋白之一，屬于增殖細(xì)胞有關(guān)核抗原[11]，目前已被證實(shí)在乳腺癌、食道癌及卵巢癌等多種惡性腫瘤細(xì)胞中均存在異常表達(dá)，且和腫瘤惡性程度有關(guān)。

本文結(jié)果發(fā)現(xiàn)，子宮頸癌組織CK10 陽性率低于癌旁正常組織，而Ki-67 陽性率高于癌旁正常組織。這提示了子宮頸癌患者組織中CK10 呈異常低表達(dá)，而Ki-67 呈異常高表達(dá)。原因在于正常子宮頸組織中，CK10 主要覆蓋于基底細(xì)胞上層，于基底層之上的顆粒細(xì)胞層與棘層間隙表達(dá)，伴隨著宮頸病變的加劇，其陽性表達(dá)逐漸下降，因此，該蛋白表達(dá)的缺失可能標(biāo)志著表皮細(xì)胞朝惡性方向轉(zhuǎn)化。另有研究報(bào)道證實(shí)，隨著宮頸鱗癌組織分化程度的增加，其CK10 陽性率越高，CK10 的表達(dá)水平與細(xì)胞角化、組織分化有關(guān)[12-14]。此外，Ki-67廣泛表達(dá)于細(xì)胞核，主要位于宮頸上皮內(nèi)瘤變基底層以及副基底層，在維持細(xì)胞增殖活性過程中扮演者至關(guān)重要的角色，其往往在細(xì)胞G1 期、S 期及M 期時(shí)高表達(dá)，而在GO 期時(shí)表達(dá)缺失。這在文獻(xiàn)[15-17]的研究報(bào)道中得以佐證，子宮頸癌組織中Ki-67 陽性率遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于癌旁正常組織。然而，上述研究并未對(duì)CK10 和子宮頸癌的關(guān)系進(jìn)行分析，這亦是本文的創(chuàng)新之處，可為臨床相關(guān)研究提供更為全面的依據(jù)。另外，不同F(xiàn)IGO 分期以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與否的子宮頸癌組織CK10、Ki-67 表達(dá)陽性率對(duì)比均不明顯，反映了上述兩項(xiàng)蛋白表達(dá)在評(píng)估子宮頸癌病情嚴(yán)重高程度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移方面可能無顯著價(jià)值。究其原因，可能和本研究納入對(duì)象嚴(yán)重不足有關(guān)，從而導(dǎo)致研究結(jié)果發(fā)生偏頗[18-20]。因此，在今后的相關(guān)研究中理應(yīng)增大樣本量，從而獲取更為真實(shí)、可靠的數(shù)據(jù)。本文結(jié)果還顯示了經(jīng)ROC曲線分析可得：CK10 與Ki-67 聯(lián)合檢測評(píng)估子宮頸癌患者FIGO 分期以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的效能優(yōu)于上述兩項(xiàng)指標(biāo)單獨(dú)檢測。分析原因，聯(lián)合檢測時(shí)可為臨床醫(yī)生評(píng)估病情提供更為充足、全面的依據(jù)[21-22]。

綜上所述，子宮頸癌患者組織中CK10 表達(dá)缺失，而Ki-67 表達(dá)升高，兩者聯(lián)合檢測可能有助于病情評(píng)估以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移預(yù)測。