蒲福龍，伍尚煒，鄭映玲，鄭玉意，侯雪丹

（廣東工業(yè)大學生物醫(yī)藥學院，廣東 廣州 510006）

廢棄木質纖維素生物質的高值化利用是實現(xiàn)國家“碳達峰”“碳中和”目標的途徑之一，其中生物質纖維素的高效水解則是生物質成功利用的關鍵，但是由于木質纖維素生物質的天然頑固性，使其直接利用較為困難，因此木質纖維素在酶解之前通常會進行預處理，打破其致密的結構、分離生物質組分以提高纖維素酶的可及性。常用的預處理技術通常有機械粉碎、稀酸預處理、堿預處理和水熱法等，不同的預處理方法有不同的優(yōu)缺點。除了尋找更優(yōu)化的預處理方法，關于木質纖維素生物質中關鍵組分對纖維素酶解影響的研究也必不可少。一般而言，生物質底物中的木質素是影響纖維素酶解的主要成分，主要通過兩個方面阻礙酶解：一方面，木質素在物理結構上阻礙酶與纖維素有效接觸而影響酶水解效率；另一方面，木質素能非特異性地吸附纖維素酶，并且降低酶的活性從而對纖維素酶水解產(chǎn)生負面影響。有研究發(fā)現(xiàn)，水溶性木質素對含木質素的底物酶解具有促進作用，主要是通過和木質素底物對酶的競爭性結合促進酶解，這表明，無論是水溶性還是非水溶性木質素都與酶進行了不同程度的吸附和結合，所以木質素的非特異性吸附對酶解是一個很重要的影響因素。眾多研究表明，木質素對纖維素酶的吸附程度與木質素的結構特性密切相關。而木質素的結構與性質則主要取決于生物質的預處理方法。不同的生物質預處理獲得的木質素內酚羥基、脂肪族羥基與羧基的含量存在差異。一般而言，木質素中的酚羥基會與酶形成氫鍵而影響纖維素酶活性，而羧基和脂肪族羥基則會使木質素的疏水性減弱，從而影響酶的催化效率。

深度共熔溶劑（deep eutectic solvents，DES）是一種由氫鍵供體和氫鍵受體組成的可設計溶劑，已被用于生物活性萃取、生物催化、金屬加工等各種領域。DES 對木質素優(yōu)良的解聚能力，使其在木質纖維素生物質預處理和提取木質素方面有很好的應用前景。DES 在預處理過程中提供了酸堿催化體系并主要通過破壞木質素中的—O—4醚鍵使木質素進行解聚，從而使生物質組分分離。各種類型的醇類、羧酸類DES對多種生物質原料展現(xiàn)出優(yōu)良的預處理效率，特別對木質素組分的脫除效果顯著。然而，現(xiàn)有研究對各類DES提取木質素組分的結構性質及其對纖維素酶水解效率影響規(guī)律的認識仍然不足，需要系統(tǒng)地研究以理解溶劑性質、木質素結構性質與多糖酶水解效率之間的關系。因此，本文以基于乳酸的DES提取水稻秸稈中的4種木質素為研究對象，通過研究木質素對纖維素酶的吸附特性，結合木質素的結構特性分析，闡明疏水性作用、氫鍵相互作用和靜電作用在木質素對纖維素酶的吸附和抑制方面的影響規(guī)律，揭示基于乳酸的DES提取木質素對纖維素酶水解效率的影響機理。

1 材料和方法

1.1 材料與試劑

水稻秸稈收集于本地農田，曬干后經(jīng)機械粉碎至250～400μm 的粒徑，于60℃烘箱過夜至恒重，密封袋收集并干燥保存；來源于酵母的復合纖維素酶（Celluclast 1.5L，酶蛋白濃度為37.17mg/mL，濾紙酶活為93.69FPU/mL，含5.63g/L 葡萄糖和1.13g/L木糖），諾維信（中國）生物技術有限公司天津分公司；氯化膽堿、乳酸、鹽酸胍、精氨酸、甜菜堿鹽酸鹽、微晶纖維素（Avicel）、檸檬酸、檸檬酸鈉，Aladdin 公司；硫酸、乙醇等試劑均為國產(chǎn)分析純。

1.2 實驗方法

1.2.1 DES的制備

將乳酸和各種氫鍵受體按9∶1 摩爾比均勻混合，裝入100mL磨口瓶中，置于一定溫度（乳酸-氯化膽堿、乳酸-鹽酸胍為80℃；乳酸-甜菜堿鹽酸鹽、乳酸-精氨酸為100℃）下攪拌均勻，待呈現(xiàn)均一、澄清、透明狀態(tài)的溶液后停止加熱，然后將獲得的DES[乳酸-氯化膽堿9∶1（LC）、乳酸-鹽酸胍9∶1（LGH）、乳酸-精氨酸9∶1（LArg）、乳酸-甜菜堿鹽酸鹽9∶1（LBH）]裝入帶螺旋口的西林瓶中干燥、密封保存以備用。

1.2.2 木質素的提取

將DES與水稻秸稈粉末以10%的固液比混合，于120℃下恒溫攪拌6h（200r/min），隨后加入適量無水乙醇，多次清洗離心分離混合物。收集離心后的醇洗上清液，旋蒸除去無水乙醇，加入3倍體積的水，置于4℃下沉淀48h。離心分離沉淀物，并用去離子水清洗木質素沉淀，冷凍干燥后即為DES提取木質素。4 種木質素樣品分別記為Lignin-LC（L-LC）、 Lignin-LGH （L-LGH）、 Lignin-LArg（L-LArg）、Lignin-LBH（L-LBH）。

1.2.3 木質素對微晶纖維素酶水解效率的影響

在含4.8mL 的50mmol/L 醋酸-醋酸鈉緩沖液（pH=4.8）的25mL具塞三角燒瓶中加入100mg微晶纖維素（Avicel），于50℃下預熱10min后分別加入20mg的L-LC、L-LGH、L-LArg、L-LBH，最后添加200μL 復合纖維素酶（93.69FPU/mL）啟動水解反應，恒溫振蕩（150r/min），定時取樣300μL，于100℃水浴5min滅活終止酶反應。以高效液相色譜（HPLC）測定葡萄糖濃度，以未加木質素的酶水解反應為對照。HPLC（安捷倫1260，配有Aminex HPX-87H 色譜柱和示差檢測器）測試條件：流動相為5mmol/L 硫酸水溶液，流速為0.5mL/min，柱溫、檢測器溫度分別為65℃和50℃。所有實驗重復3次，相對誤差小于5%。

1.2.4 木質素對纖維素酶的吸附特性

用50mmol/L 的醋酸-醋酸鈉緩沖液（pH=4.8）作為溶劑配制復合纖維素酶蛋白溶液（0.02～1.60mg/mL 濃度梯度），然后加入定量的木質素使其濃度為4g/L，放置于2mL離心管中并密封。將所有樣品置于4℃下孵育3h（150r/min）后取出，離心（4℃、10000r/min）取上清液，以Bradford 法測定蛋白濃度。根據(jù)初始溶液和離心所得上清液中游離酶含量的差異，計算木質素對酶蛋白的吸附量。結果符合Langmuir 吸附等溫線，計算公式如式(1)和式(2)所示。

式中，為木質素吸附酶蛋白的量，mg/g木質素；為木質素最大吸附酶蛋白的量，mg/g 木質素；為Langmuir 常數(shù)，mL/mg 酶；為溶液中游離酶的濃度，mg/mL；為結合強度。

1.2.5 木質素疏水性

通過測定木質素對疏水性染料孟加拉玫瑰紅的吸附，分析木質素表面疏水性。以50mmol/L 的醋酸-醋酸鈉緩沖液（pH=4.8） 為溶劑配制含40mg/L 的孟加拉玫瑰紅溶液，將其與不同質量的木質素混合，使木質素濃度梯度范圍在2～10g/L，于50℃下孵育2h（150r/min）。低溫離心（10000r/min、10min）后收集上清液，于543nm 處讀取吸光值以測定游離染料含量。通過孟加拉玫瑰紅的原始含量與游離含量的差異，得到木質素表面吸附染料的含量。分配系數(shù)（PQ）計算方法如式(3)。繪制木質素含量與PQ 值的回歸曲線，獲得木質素表面疏水性數(shù)據(jù)。

1.2.6 FTIR分析

采用研究型紅外光譜儀對水稻秸稈和4種木質素樣品進行紅外分析，所用設備為Thermo-Fisher Nicolet 6700，波長范圍為4000～400cm，通過32次掃描以0.48cm的分辨率記錄光譜。

1.2.7 核磁分析

以定量磷譜（P-NMR）測定木質素組分羥基含量。精確稱取40mg 木質素樣品，溶解于500μL氘代溶劑中（氘代氯仿∶氘代吡啶=1∶1.6，體積比），然后，向溶液中加入50μL乙酰丙酮鉻溶液（5.6mg/mL）和200μL內--羥基-5-降冰片烯-2,3-二甲酰亞胺（9.23mg/mL）。最后加入100μL磷化試劑（2-氯-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧磷烷溶液，TMDP）?；旌?5min 后以Bruker 600MHz（型號為AV600）核磁共振儀測定，采用TopSpin2.0軟件處理數(shù)據(jù)，通過積分面積計算樣品中酚羥基、醇羥基和羧基的含量。

以二維異核碳氫相關譜（2D HSQC NMR）分析木質素結構，參照本文作者課題組以前的測試條件并作部分修改。將120mg 木質素樣品溶解于1.2mL 的DMSO-d中后轉移至核磁管，采用Bruker 600MHz 核磁波譜儀進行測量，溶劑峰DMSO-d作為內標峰（C/H，39.5/2.49）進行校正。

2 結果與討論

2.1 木質素對微晶纖維素酶水解效率的影響

由于特殊的結構性質，木質素對纖維素酶的抑制作用普遍存在。遺憾的是，現(xiàn)有研究對DES 溶解木質素影響纖維素酶活性的規(guī)律仍認識不足。因而，本文首先以不添加木質素的纖維素酶水解微晶纖維素反應為對照，考察4 種木質素（L-LC、LLGH、L-LArg、L-LBH）的添加對微晶纖維素酶水解效率的影響，結果如圖1所示。木質素的添加降低了微晶纖維素的酶水解效率，在水解28h 后，木質素對酶水解的抑制作用大小順序為：L-LC＞L-LGH＞L-LArg＞L-LBH。具體而言，L-LC 組的木質素添加使葡萄糖的釋放量相對于對照組降低了14.7%，而L-LGH 使葡萄糖的釋放量降低較少（4.5%）?？梢?，不同的DES 提取的木質素對纖維素酶的抑制作用存在明顯的差異性。

圖1 微晶纖維素酶水解過程曲線

本文所用的4種基于乳酸的DES中，氯化膽堿作為氫鍵受體的研究最為普遍，已有研究表明其在溶解和提取木質素中表現(xiàn)出優(yōu)良的性能，并有報道指出氯化膽堿在作用過程中與氫鍵受體之間的協(xié)同作用機制，即Cl通過離子相互作用而破壞木質素結構中的—O—4醚鍵而提取木質素。而甜菜堿鹽酸鹽與氯化膽堿比較接近，但其結構中含有羧基，疏水性比氯化膽堿弱，提取疏水性的木質素的能力則相對稍弱。當鹽酸胍作為氫鍵受體時，其對生物質的作用能力也較強，原因是其強酸性和其與乳酸供體間的優(yōu)良協(xié)同效應?？梢?，木質素的結構性質對其抑制纖維素酶的作用效力影響較大，木質素對纖維素酶的吸附作用主要源于疏水作用、靜電作用和氫鍵作用的綜合情況。因而，需要進一步探究這4種DES提取的木質素對纖維素酶吸附能力，以分析其對纖維素酶抑制強弱的原因。

2.2 木質素對纖維素酶的吸附性

眾多研究表明，纖維素底物中木質素可通過對纖維素酶的非特異性吸附而影響酶催化效率，為了研究DES 所提取出的木質素對纖維素酶的吸附能力和吸附量，繪制了纖維素酶在L-LC、L-LGH、L-LArg和L-LBH上的Langmuir吸附等溫線，如圖2所示。根據(jù)吸附等溫線，分別計算了纖維素酶的最大吸附量、Langmuir 親和吸附常數(shù)和結合強度（表1）。結果顯示纖維素酶在4種木質素上的吸附特性符合Langmuir 等溫線模型，纖維素酶在木質素上的最大吸附量具有明顯的差異，如LC提取的木質素對纖維素酶的最大吸附量最大，為46.35mg/g；吸附量最小的為LArg，僅4.52mg/g。而LGH 和LBH 提取的木質素對纖維素酶的最大吸附量比較接近，前者稍高。

圖2 木質素對纖維素酶蛋白的Langmuir吸附作用

表1 Langmuir吸附等溫線參數(shù)

結合強度代表了木質素對纖維素酶的總體吸附強度，其強弱規(guī)律與最大吸附量基本一致，除了L-LGH的結合強度比L-LC相對稍高。而吸附平衡常數(shù)代表結合親和力的大小，除了L-LArg外，3種木質素顯示的規(guī)律性與最大吸附量和吸附強度趨勢基本一致，且這3種木質素對纖維素酶的吸附能力與微晶纖維素酶水解效率呈負線性相關性（圖3），即吸附能力越強、吸附量越大，微晶纖維素的酶解效率越低，也說明木質素對酶的吸附能力越大，其對酶的抑制作用越明顯。Wang 等也發(fā)現(xiàn)類似的現(xiàn)象：乙酸提取楊木木質素比球磨木質素對纖維素酶的吸附量大，前者比后者對酶水解的抑制作用則更強。在Yao等關于木質素對纖維素酶作用機制研究中，也證實了木質素對纖維素酶水解的抑制作用與其對纖維素酶吸附能力正相關，并提出非特異性吸附是影響纖維素酶水解效率的主要因素。

圖3 最大酶吸附量與微晶纖維素酶水解效率的關系

因此，就本文而言，3種木質素對纖維素酶的抑制程度大小為L-LC＞L-LGH＞L-LBH，與其對纖維素的吸附能力大小規(guī)律基本相同。相比之下LLArg 組比較特殊，不符合這一規(guī)律。為進一步解釋該現(xiàn)象，測定了各DES 提取木質素的組成成分，發(fā)現(xiàn)其他3 種木質素的純度均為85%以上，而LLArg 提取的木質素含量僅55%（含11%的纖維素）。所以L-LArg對纖維素酶的吸附強度和最大吸附量較低的原因可能是是粗木質素樣品中纖維素含量較高。同時，因為其中含有大量的纖維素組分，纖維素酶的底物結合域則與其天然底物纖維素組分有較強的親和力，因而L-LArg 顯示了最強的酶結合親和力。由于天然的結合趨勢對微晶纖維素的酶水解作用起促進作用，導致L-LArg 對酶解效率的抑制作用相對較弱。

2.3 木質素的疏水性對纖維素酶吸附作用的影響

從吸附性研究結果可知，木質素對纖維素酶的吸附很大程度上是抑制微晶纖維素酶水解的主要原因。如前文所述，木質素對纖維素酶的吸附作用包括疏水作用、靜電作用和氫鍵作用。其中，疏水相互作用被認為是影響纖維素酶吸附非常重要的因素，如Sakkos 等研究結果證明，疏水性越強的底物對纖維素酶的吸附親和性越強。本研究中討論的4種DES提取的木質素疏水性大小順序為：LLArg＞L-LC＞L-LHG＞L-LBH（表2）。除L-LArg外，其余3種DES提取的木質素的疏水性大小與其最大纖維素酶吸附規(guī)律一致。由于纖維素酶具有疏水性，因此木質素疏水性越大，相應的吸附纖維素酶的量越多，對纖維素酶水解效率的抑制程度也越大。因而木質素疏水性與最大酶蛋白吸附量呈現(xiàn)明顯的正線性相關性，且相關性較高（圖4）。在利用對甲苯磺酸提取的甘蔗渣木質素對纖維素酶吸附性研究中，同樣發(fā)現(xiàn)木質素疏水性與纖維素酶的吸附性的正相關性。Song等研究DES（LC）提取柳樹、玉米稈木質素對纖維素酶的抑制作用時，也發(fā)現(xiàn)類似的現(xiàn)象。L-LArg 木質素的疏水性大的原因可能是大量的結晶纖維素組分殘留，纖維素內部較為緊密牢固的氫鍵網(wǎng)絡使其疏水性較大。這種疏水性區(qū)域是纖維素酶的天然底物，即使其與纖維素酶結合，也不會體現(xiàn)較強的抑制作用。因此，即使L-LArg 疏水作用最大，其對纖維素酶的最大吸附量最小，因而對纖維素酶的抑制作用也最小。

表2 木質素疏水性數(shù)據(jù)

圖4 木質素對酶蛋白的最大吸附量與木質素疏水性的關系

2.4 氫鍵作用對纖維素酶抑制效應的影響

為了進一步探究DES 提取木質素對纖維素酶的抑制作用機制，本文通過解析木質素的結構性質（紅外光譜、P-NMR、HSQC）以深入探究木質素結構性質，尤其是氫鍵、靜電相互作用對纖維素酶的抑制效應的影響。首先，紅外光譜（圖5）顯示木質素的特征峰在1605cm、1423cm和1514cm處，為芳環(huán)骨架碳碳鍵的拉伸振動峰，所有木質素樣品均在此處出現(xiàn)譜帶，但L-LArg 的譜帶明顯弱于其他三個，說明4種DES提取木質素已具備基本骨架結構，但L-LArg 中木質素純度較其他3 種相對較低。3360cm處峰為木質素分子中的羥基伸縮振動，說明木質素中含有豐富的酚羥基基團。而L-LC和L-LGH表現(xiàn)出更強的譜帶，說明這兩種木質素中含有更多的羥基基團。推測在較為強烈的DES預處理條件下（L-LC、L-LGH實驗組），木質素中更多的酚亞結構被釋放出來，因而更易與纖維素酶形成氫鍵相互作用。2930cm和2860cm處為脂肪鏈和O—CH基團中的CH—伸縮振動峰，LLArg 在2860cm處表現(xiàn)出明顯較弱的譜帶，說明L-LArg 在DES 提取過程中損失的甲氧基較多，而另外3 種木質素的甲氧基保留相對較多。在2930cm處，4 種木質素均顯示較強譜帶，證明脂肪鏈發(fā)生的斷裂較少。所有木質素均在1740cm和1220cm處有明顯的譜帶，證明木質素中有羧基存在。據(jù)報道，羧基通過削弱疏水相互作用而阻礙酶在木質素上的吸附，同時由于許多纖維素酶組分因其等電點而表現(xiàn)出的總負電荷而加強靜電斥力。然而，添加木質素仍然會導致纖維素酶的非生產(chǎn)性吸附，這證實靜電斥力不足以對抗纖維素酶和木質素組分之間的疏水作用而形成的氫鍵。

圖5 木質素的紅外光譜

2D HSQC NMR譜圖（圖6）顯示了4種木質素的基本骨架結構，在側鏈區(qū)[圖6(a)]可以觀察到較強的甲氧基信號峰。很明顯，L-LArg 的所有峰信號均弱于其他3種木質素，這說明LArg的預處理強度最弱，對木質素的提取能力最弱，這與L-LArg最低的木質素得率（3.7%）所反映的規(guī)律一致。—O—4 和—對應的信號峰（A 和C）雖然都能檢出，但是峰強度均較弱，這說明了4種DES在實驗的木質素提取環(huán)境下對—O—4 和—的破壞程度都較高，4種木質素中L-LBH的—O—4和—保留最多。對于-5 的峰信號（B），僅在L-LC 和L-LBH的譜圖中檢出，而L-LGH和L-LArg中的-5均被破壞。另外，除了L-LArg外，其他3種木質素中阿拉伯糖單元（Ara）的信號均被檢測到，說明LC、LGH、LBH在提取木質素的同時也提取了一定量的阿拉伯糖。L-LGH 和L-LBH 譜圖中的少量木糖單元信號峰說明LGH和LBH對木糖有輕微的提取作用。芳香區(qū)譜圖的規(guī)律與側鏈區(qū)基本一致，S、G和H結構均能被很好地檢測到，說明4種木質素中均含有S、G、H結構。而且峰強度大小排序為LLC＞L-LGH＞L-LBH＞L-LArg，這基本印證了前面所提到的木質素對酶抑制程度大小排序的大致規(guī)律。

圖6 木質素的HSQC圖譜

P-NMR 結果表明（圖7）4 種DES 木質素酚羥基含量和總羥基含量與其對纖維素酶的吸附能力之間有明顯的線性相關性，兩者含量越高，其對酶蛋白的吸附量越大。例如，L-LC 的酚羥基含量最大，為3.37mmol/g，所以也最大，為46.35mg/g；L-LArg的酚羥基含量最小，為0.966mmol/g，也最低（4.52mg/g）；L-LGH 與L-LBH 的酚羥基含量接近，所以值也接近。此外，除了L-LArg 外，羥基含量與微晶纖維素酶水解效率線性負相關，即羥基含量越高、酶水解效率越低。L-LC 含有的脂肪族羥基、酚羥基和總羥基含量明顯高于其他3種木質素，說明L-LC 更易與纖維素酶形成氫鍵結構，從而影響纖維素酶的水解活性。對于脂肪族羥基，含量的多少與纖維素酶的吸附量規(guī)律一致，該規(guī)律與纖維素酶水解的抑制程度大小相同（LLArg除外），即脂肪族羥基含量越高，越易促進木質素與纖維素酶相互作用，對酶的抑制作用則越強。酚羥基的含量，與脂肪族羥基規(guī)律存在差異（羥基含量L-LC＞L-LBH＞L-LGH＞L-LArg）。由于LBH提取的木質素中纖維素含量（1.44%）低于LLGH 提取的木質素（4.03%），因而，其對木質素與碳水化合物連接鍵的破壞程度相對較多，酚羥基含量更高?？偭u基含量是脂肪族羥基和酚羥基之和，4種木質素的總酚羥基含量基本上反應了DES的木質素提取作用程度，即L-LC＞L-LBH＞L-LGH＞L-LArg，這體現(xiàn)了4種木質素與纖維素酶之間的氫鍵作用強弱規(guī)律?？傮w來說，木質素對纖維素酶的吸附作用大小，氫鍵作用僅是影響因素之一。

圖7 羥基含量與酶解效率、酶蛋白最大吸附量的關聯(lián)圖

2.5 靜電作用對纖維素酶抑制作用的影響

除了氫鍵相互作用，木質素與纖維素酶之間的靜電相互作用也是影響兩者之間吸附能力以及酶水解抑制程度的一項因素。有報道指出分離木質素中的羧基含量隨著預處理程度的增加而增加，部分原因是木質素-碳水化合物復合物中酯鍵的斷裂，從而釋放了羧基官能團。本研究中，4 種木質素的羧基含量與酶蛋白吸附量、纖維素酶水解效率之間并無明顯相關性（圖8）。羧基含量最高的為L-LC，L-LBH 次之，L-LGH 最低，這3 種木質素羧基含量與總酚羥基含量大小一致，基本上符合預處理強度越大形成的羧基含量越多的規(guī)律。此外，羧基易在酶反應體系解離，從而使木質素帶負電荷。文獻表明，纖維素酶也帶有負電荷，帶負電的木質素易與纖維素酶形成靜電斥力，從而降低木質素對纖維素酶的吸附量。然而本文中的幾種木質素的羧基總體含量不高，羧基產(chǎn)生的靜電斥力不足以消除更強的疏水相互作用和氫鍵相互作用力。所以，疏水相互作用和氫鍵相互作用主要決定了木質素對纖維素酶的吸附力及抑制作用大小，該結論與Song 等在研究對苯甲磺酸提取的木質素對纖維素酶吸附作用時的結果一致。

圖8 羧基含量對酶解效率、木質素疏水性和木質素對酶蛋白的最大吸附量的影響

3 結論

（1）由木質素對纖維素酶的吸附性研究結果可知，4 種DES 提取木質素的吸附特性曲線符合Langmuir等溫曲線模型，且木質素對酶蛋白的吸附性越強，其對酶的抑制效應也越大。

（2）木質素疏水性與酶蛋白的吸附性能也有高度的線性正相關性，即疏水性越大，其對酶蛋白吸附能力越強，纖維酶水解效率則越低。

（3）木質素的基本結構性質分析表明DES 提取強度越大，木質素產(chǎn)生的（脂肪、酚）羥基含量和羧基含量越高，與酶蛋白的氫鍵作用則越強，因而對纖維素酶水解效率的抑制程度越大。

（4）羧基的靜電斥力效應雖可削弱吸附作用，但對總體的酶蛋白吸附和活性抑制程度影響較小。

（5）4種DES對木質素的提取能力和結構破壞作用能力最強的是LC，LGH 和LBH 基本相當，LArg 最弱，說明氯化膽堿作為氫鍵受體易于與乳酸氫鍵供體協(xié)同作用，以更好地破壞木質素和碳水化合之間的連接鍵、木質素的—O—4鍵，而關于這4種DES的氫鍵受體在木質素提取過程中作用機制的差異性有待進一步深入探究。