趙瑞榮,白艷榮,蔣亞蓮

(1.昆明市金殿名勝區(qū),云南昆明 650224;2.昆明學(xué)院,云南昆明 650213;3.云南農(nóng)業(yè)科學(xué)院花卉研究所,云南昆明 650201)

洋桔梗[(Raf) Shinners]為多年生草本植物,屬洋桔梗屬龍膽科,原產(chǎn)于美國(guó)科羅拉多州、內(nèi)布拉斯加州、得克薩斯州和新墨西哥一帶。從20世紀(jì)70年代開始,洋桔梗作為切花生產(chǎn)開始在日本和朝鮮等地流行。洋桔梗具有很高觀賞價(jià)值,不僅能用作插花藝術(shù),還可用作園林綠化。洋桔梗的盆栽用于裝飾居室,點(diǎn)綴陽(yáng)臺(tái),顯示出高雅溫馨的情調(diào)。洋桔梗采用種子繁殖,對(duì)發(fā)芽溫度和水分的要求比較嚴(yán)格,發(fā)芽適宜溫度在22～25 ℃,且生長(zhǎng)周期長(zhǎng),繁殖速度慢,出苗率低,國(guó)內(nèi)需求量大,難以滿足市場(chǎng)供應(yīng),不利于市場(chǎng)開拓。綜合上述問題,筆者借鑒相關(guān)研究，選用不同6-BA、NAA、IBA濃度組合對(duì)外植體洋桔梗進(jìn)行增殖培養(yǎng)、生根培養(yǎng),探討最佳誘導(dǎo)培養(yǎng)條件,建立洋桔梗組培快繁體系,為洋桔梗的種苗快繁、規(guī)?；a(chǎn)及工廠化育苗提供技術(shù)參考。

1 材料與方法

供試材料：盆栽洋桔梗小花托。試驗(yàn)地點(diǎn)：昆明學(xué)院農(nóng)學(xué)樓組培室。MS培養(yǎng)基：母液 Ⅰ(大量元素)包括NHNO、KNO、CaCl·2HO、MgSO·7HO、KHPO；母液 Ⅱ(微量元素)包括KI、HBO、MnSO·4HO、ZnSO·7HO、NaMoO·2HO、CuSO·5HO、CoCl·6HO；母液Ⅲ(鐵鹽)包括FeSO·7HO、Na-EDTA·2HO。生長(zhǎng)素NAA、IBA、細(xì)胞分裂素6-BA。試劑及儀器：高壓滅菌鍋、鑷子、解剖刀、酒精燈、三角瓶、無(wú)菌水、70%乙醇、 95%乙醇、2%～5%次氯酸鈉、分析天平、pH計(jì)、電子天平、玻璃儀器(容量瓶、燒杯、錐形瓶、玻璃棒、量筒等)、移液槍、剪刀、高溫滅菌器、烘烤箱等。

以云南省昆明市斗南花卉盆景苗木批發(fā)市場(chǎng)的盆栽洋桔梗植株作為試驗(yàn)材料,利用MS為基礎(chǔ)培養(yǎng)基,然后向MS培養(yǎng)基中加入不同種類和配比的激素。不同激素的濃度梯度：6-BA mg/L為0.1、0.3、0.6、1.0 mg/L,IBA為0.1、0.2、0.5 mg/L,NAA為0.01、0.10、0.20、0.30、0.50、0.60、1.00 mg/L。設(shè)16個(gè)處理,每處理接種10瓶,其中設(shè)置1個(gè)以MS不加任何激素的培養(yǎng)基為空白對(duì)照。具體配方如下：

(1)繼代培養(yǎng)。對(duì)照(CK)：MS；處理①:MS+6-BA 0.1 mg/L+NAA 0.10 mg/L;處理②:MS+6-BA 0.3 mg/L+NAA 0.10 mg/L；處理③:MS+6-BA 0.6 mg/L+NAA 0.20 mg/L；處理④:MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.20 mg/L；處理⑤：MS+6-BA 0.1 mg/L+IBA 0.1 mg/L；處理⑥：MS+6-BA 0.3 mg/L+IBA 0.1 mg/L；處理⑦：MS+6-BA 0.6 mg/L+IBA 0.2 mg/L；處理⑧：MS+6-BA 1.0 mg/L+IBA 0.2 mg/L。

每處理重復(fù)3次,每處理配置10瓶培養(yǎng)基,在無(wú)菌操作臺(tái)上進(jìn)行接種,然后移入培養(yǎng)室內(nèi),與CK進(jìn)行比較,在相同溫度、相對(duì)濕度、光照時(shí)間等條件下,通過分析15種不同激素配比組合和CK的影響,選擇最佳激素類型和組合。

培養(yǎng)基配置。初代培養(yǎng)基配方為MS+NAA 0.10 mg/L+6-BA 0.5 mg/L+蔗糖30 g/L+瓊脂6.2 g/L,則繼代培養(yǎng)和生根培養(yǎng)中加入上述不同種類和濃度的激素配比,pH調(diào)至5.8。

培養(yǎng)基的滅菌與消毒。將配置好的培養(yǎng)基迅速裝入玻璃瓶中,然后把裝好的培養(yǎng)基放入高壓蒸汽滅菌鍋的架子上,推入滅菌鍋中,在121 ℃條件下,高溫滅菌30 min。取出后放置冷卻,待培養(yǎng)基凝固后,進(jìn)行接種。

洋桔梗花托的處理。先選取盆栽洋桔梗中生長(zhǎng)健壯的植株,然后選擇生長(zhǎng)茁壯的小花托，用剪刀剪下未開放的小花托。

接種。在無(wú)菌條件下,每個(gè)培養(yǎng)瓶中接入2個(gè)花托。

將接種后的洋桔梗移入相應(yīng)的培養(yǎng)室進(jìn)行培養(yǎng),培養(yǎng)室要求干凈整潔,經(jīng)常消毒,以防環(huán)境污染。培養(yǎng)條件為光照強(qiáng)度2 000～2 500 lx,培養(yǎng)溫度為22～25 ℃,光照12 h/d。

每7 d觀察1次組培苗植株的生長(zhǎng)情況及污染情況,35 d后統(tǒng)計(jì)每個(gè)處理的增殖率、生根率、根長(zhǎng)、根粗、植株長(zhǎng)勢(shì)。

2 結(jié)果與分析

從圖1可見，洋桔梗叢生芽的增殖率與6-BA、NAA、IBA激素種類和濃度有關(guān),CK與處理③、⑥差異顯著；處理③、⑥的增殖率遠(yuǎn)高于其他處理。處理⑥與處理③間差異顯著,CK與處理①、②、④、⑦間差異不顯著。由此可知,洋桔梗增殖率的最佳激素濃度配比為MS+6-BA 0.6 mg/L+NAA 0.20 mg/L和MS+6-BA 0.3 mg/L+IBA 0.1 mg/L。

注：不同小寫字母表示處理間差異顯著(P<0.05) Note:Different lowercase letters indicate significant differences between treatments(P<0.05)圖1 不同激素配比對(duì)洋桔梗增殖率的影響Fig.1 Effects of different hormones on the proliferation rate of Eustoma grandiflorum

注：不同小寫字母表示處理間差異顯著(P<0.05) Note:Different lowercase letters indicate significant differences between treatments(P<0.05)圖2 不同激素配比對(duì)洋桔梗生根率的影響Fig.2 Effect of different hormone on the rooting rate of Eustoma grandiflorum

表1 不同激素組合對(duì)洋桔梗根長(zhǎng)的影響

注：不同小寫字母表示處理間差異顯著(P<0.05) Note:Different lowercase letters indicate significant differences between treatments(P<0.05)圖3 不同激素配比對(duì)洋桔梗根粗的影響Fig.3 Effects of different concentrations of hormones on root coarseness of Eustoma grandiflorum

3 討論

該研究選擇一個(gè)空白對(duì)照組,以MS為基礎(chǔ)培養(yǎng)基,加入不同濃度的植物激素配比,對(duì)洋桔梗進(jìn)行繼代培養(yǎng)和生根培養(yǎng),因?yàn)椴煌参镉衅溥m宜的細(xì)胞分裂素和生長(zhǎng)素種類,合適的細(xì)胞分裂素和生長(zhǎng)素濃度在洋桔梗繼代培養(yǎng)和生根培養(yǎng)過程中起著不同的作用,同一種激素種類與不同的激素種類搭配影響效果也不同,同一濃度的激素種類配比在不同培養(yǎng)基中對(duì)其影響效果不同。對(duì)洋桔梗的增殖培養(yǎng)研究結(jié)果表明,因洋桔梗品種、采用的外植體不同,初代培養(yǎng)基和繼代培養(yǎng)基中 6-BA、IBA和 NAA適宜的濃度及比例有較大差異。對(duì)洋桔梗增殖率的影響效果中,MS+6-BA 0.6 mg/L+NAA 0.20 mg/L和MS+6-BA 0.3 mg/L+IBA 0.1 mg/L的增殖率較好,適合洋桔梗的生根培養(yǎng)基為1/2MS+NAA 0.60 mg/L+IBA 0.1 mg/L、1/2MS+NAA 0.50 mg/L、1/2MS+NAA 0.01 mg/L。

4 結(jié)論

該研究結(jié)果表明，洋桔梗繼代培養(yǎng)和生根培養(yǎng)過程中,適合洋桔梗增殖率的最佳激素配比為MS+6-BA 0.6 mg/L+NAA 0.20 mg/L、MS+6-BA 0.3 mg/L+IBA 0.1 mg/L,在這2個(gè)濃度激素的處理下,洋桔梗的增殖率較好,其中NAA濃度為0.2 mg/L,6-BA濃度為0.3和0.6 mg/L,IBA濃度為0.1 mg/L,洋桔梗的增殖率達(dá)到較好效果,當(dāng)6-BA濃度超過0.6時(shí),影響叢生芽的增殖率,增殖率降低。在洋桔梗生根培養(yǎng)中,適合洋桔梗生根率最佳的激素濃度配比：1/2MS+NAA 0.60 mg/L+IBA 0.1 mg/L、1/2MS+NAA 0.50 mg/L、1/2MS+NAA 0.01 mg/L,在這3個(gè)激素組合處理下洋桔梗生根率達(dá)到較好效果,當(dāng)NAA濃度超過0.60 mg/L時(shí),種苗出現(xiàn)黃化現(xiàn)象,因此適合洋桔梗生根的NAA濃度為0.01、0.50、0.60 mg/L,IBA濃度為0.1 mg/L。