劉昆言，禹雙雙，閔子揚，段 慧，路 遙，彭長城，豐金玉，李宇翔，鄭 煥

(1.岳陽市農業(yè)科學研究院/農業(yè)農村部植物新品種測試岳陽分中心，湖南岳陽 414000；2.湖南省蔬菜研究所，湖南長沙 410000；3.常德市農林科學研究院，湖南常德 415000)

植物新品種保護也稱“植物育種者權利”，是我國知識產(chǎn)權保護七大戰(zhàn)略專項任務之一，同專利、商標、著作權一樣，是知識產(chǎn)權保護的一種形式。隨著我國對知識產(chǎn)權保護力度不斷加大，新品種保護的重要性逐步提升。習近平主席在2013年中央農村工作會議上的講話中提到，“要下決心把民族種業(yè)搞上去，抓緊培育具有自主知識產(chǎn)權的優(yōu)良品種，從源頭上保障國家糧食安全”，而新品種保護是培育自主知識產(chǎn)權品種的重要抓手，是發(fā)展現(xiàn)代種業(yè)、建設種業(yè)強國的重要支撐。植物新品種特異性( Distinctness)、一致性( Uni-formity) 和穩(wěn)定性( Stability) 測試(以下簡稱DUS測試)是植物新品種權授權的前提條件，提升DUS測試能力水平是保證植物新品種權授權質量的關鍵技術手段。

南瓜屬在植物分類學上屬于葫蘆科，約30個種，廣泛分布于熱帶、亞熱帶及溫帶地區(qū)，目前主要栽培種有4個，分別為中國南瓜(Duch)、美洲南瓜(Linn，又名西葫蘆)、印度南瓜(Duch，又名筍瓜)、黑籽南瓜()。南瓜在2016年列入農業(yè)農村部發(fā)布的第十批新品種保護名錄中，該種特指中國南瓜。中國南瓜為一年生蔓生草本，全株各部位都有廣泛用途，南瓜果實可作菜，也可替代糧食，是我國人民日常蔬菜之一；南瓜種子是重要生活副食品，其富含氨基酸，有除濕驅蟲的功效；此外，南瓜藤和南瓜蒂都有明顯藥用價值。

中國南瓜測試已開展4年多，針對此前測試存在的問題， DUS測試體系正逐步完善，但目前中國南瓜測試中還存在部分問題需要改進。此外，2020年5月底農業(yè)農村部印發(fā)《2020年自主開展農業(yè)植物新品種特異性一致性穩(wěn)定性測試管理工作方案》(農種品函〔2020〕6號)，育種者可自行開展中國南瓜DUS測試，育種者進行自主測試時參照DUS測試指南操作，而測試指南中田間試驗部分介紹相對簡單，無具體田間測試規(guī)范，筆者依據(jù)植物新品種DUS測試審查及性狀統(tǒng)一描述總則等系列文件TGP/1，2002；TGP/7，2014；TGP/8, 2014;TGP/9,2008；TGP/10,2008；TGP/11,2011)規(guī)定，參照中國南瓜DUS測試指南，通過4年南瓜田間測試的經(jīng)驗，逐步完善了中國南瓜測試栽培技術，供南瓜育種家DUS自主測試參考。

1 中國南瓜測試現(xiàn)狀

中國南瓜當年測試量為中國南瓜上一年度最晚提交種子日期后提交申請品種到本年度最晚提交種子日期前提交品種的數(shù)量。中國南瓜2016年列入保護名錄，當年接受中國南瓜測試申請，但并未開展田間測試。由圖1可知，實際田間測試開始于2017年，2017年中國南瓜測試品種數(shù)為10個，2018年新增中國南瓜田間測試品種23個，2019年新增中國南瓜田間測試品種24個，2020年新增中國南瓜田間測試品種26個，總體而言，中國南瓜新增田間測試量呈上升趨勢，反映該領域育種者對新品種保護越發(fā)重視。

圖1 2016—2020年中國南瓜新增田間測試量Fig.1 Number of Cucurbita moschata Duch from 2016 to 2020

DUS測試品種一般來源于3個渠道，即育種者申請品種保護官方渠道、社會委托測試中心渠道及社會直接委托分中心渠道，目前中國南瓜DUS測試主要來源于育種者申請品種保護官方渠道及社會直接委托分中心，其中育種者通過申請品種保護官方渠道數(shù)量占測試品種的絕大多數(shù)，以2020年新增26個測試品種為例，其中25個來自育種者申請品種保護官方渠道，1個來自社會直接委托分中心，側面反映育種者對申請官方渠道的積極性與信任。

測試品種種子發(fā)芽率低。2017年植物新品種權暫停收費以來，中國南瓜測試品種因種子發(fā)芽率低問題淘汰數(shù)量明顯增加，2020年新增測試品種中，因發(fā)芽率非常低淘汰品種3個，占當年新增測試品種數(shù)的11.5%，此外部分品種與測試指南要求發(fā)芽率>95%有較大差距，但健康株數(shù)量基本滿足測試而未被淘汰,測試員分析主要原因是測試品種在冷庫保存時間較久，種子發(fā)芽率嚴重下降，或育種者提交種子時未經(jīng)重新繁種，這可能導致育種者選育的品種直接被淘汰，同時也增加了測試體系負擔。

種子一致性及性狀穩(wěn)定性差。近2年來，中國南瓜DUS測試申請品種種性不過關問題逐年嚴重，部分測試品種種子大小、形態(tài)差異大，未能嚴格按標準寄送種子；這些品種育苗時，苗株長勢差異大，勢必影響苗株后續(xù)一致性，大幅增加被淘汰概率，影響相關育種者品種權利的獲得。

南瓜屬種關系認識不清。西葫蘆在2005年被列入第六批保護名錄中，中國南瓜是2016年列入第十批保護名錄中，但每年都有西葫蘆育種者錯將其品種按中國南瓜種申報品種權，導致測試性狀觀測標準不同，中國南瓜測試員需向測試中心請示將該品種測試轉移至負責西葫蘆集中測試分中心開展測試，從而使該品種授權至少延期1年。

非保護名錄南瓜種申報。目前，印度南瓜育種者申報品種權意愿強烈，但印度南瓜暫未列入新品種保護名錄中，很多育種者誤將自己培育的品種按中國南瓜種申請品種權；2018年該情況占新增田間測試品種的21.7%，2019年，該情況占新增田間測試品種的29.2%，測試員遇到該情況僅能遺憾將這些品種淘汰，同時辨別過程需在果實瓜形態(tài)發(fā)育完全后進行，這勢必造成巨大的人力、物力浪費，影響DUS體系健康發(fā)展。

測試地點集中化。2020年前，數(shù)量不多的中國南瓜DUS測試品種在上海和岳陽2家DUS測試分中心開展測試；經(jīng)過幾年田間測試后發(fā)現(xiàn)不同分中心對較少中國南瓜測試品種難以保證測試評價標準的一致性及標準品種、測試品種在不同測試地點性狀表達的同一性，基于這些問題，從2020年開始中國南瓜測試集中于岳陽分中心測試，以保證測試評價的準確及一致性。

印度南瓜種測試指南研制中。針對目前中國南瓜DUS測試中，印度南瓜品種占比較大的情況，測試中心于2019年底開始聯(lián)合相關科研院校共同研制該測試指南，未來2年印度南瓜育種者將會有途徑進行品種保護，維護自身育種權益。

相關操作手冊及拍攝技術規(guī)程制定中。中國南瓜測試開始時間不長，在過去幾年DUS測試中都沒有相應的操作手冊及拍攝技術規(guī)程指導測試地域生態(tài)區(qū)田間測試，中國南瓜測試性狀判斷的高準確性及可操作性難以保障；基于此，DUS測試岳陽分中心目前已開始制定中國南瓜DUS操作手冊及拍攝技術規(guī)程等相關工作，努力提升中國南瓜DUS測試水平。

2 中國南瓜DUS測試栽培技術

選擇顆粒相對飽滿、規(guī)格均一的待測試品種種子作為南瓜測試用種。測試用地應符合無公害蔬菜用地環(huán)境條件相關要求，宜選擇土層深厚、排灌便利的砂壤土、壤土且不能連續(xù)2年種植南瓜的旱地，或可水旱輪作連續(xù)種植。測試用地土壤pH為5.5～6.8。

播種要求。為統(tǒng)一測試評價標準，播種期定于3月下旬至4月上旬，采用50孔穴盤育苗，選用蔬菜育苗專用基質，根據(jù)測試要求，一個測試品種需2次重復，每重復小區(qū)植株數(shù)不少于30株。播種育苗時為保證成苗率，每品種育2穴盤苗，穴盤每孔播1粒種，共100株苗。

種子處理。先選晴天曬種3～4 h，后用清水洗凈種子。然后將種子放入55 ℃恒溫熱水中浸種15～20 min，再用30 ℃清水浸種3～4 h，用稀釋石灰水洗凈種皮上黏液后，置于30 ℃左右恒溫環(huán)境下催芽，直到80%種子露白即可播種。

播種。播種前1 d澆透穴盤，將催芽露白的種子點播于各穴中，注意將種子平放于穴中，播后在種子上輕撒一層細土，白膜覆蓋。

苗期管理。出苗前溫度控制在25～35 ℃，待70%的種子破土出苗后，及時撤除覆蓋物，苗期溫度控制主要依靠白膜及遮陽網(wǎng)，高溫時采用遮陽網(wǎng)覆蓋降溫，低溫依靠白膜小拱棚保溫。種子出土前至子葉微展保持土壤濕潤，微展后控制土壤濕度，基質土表層露白時適量補水。待南瓜苗兩葉一心時定植，定植前3 d，控制水分，保持適當干燥，同時在其兩葉一心時按要求及時觀測子葉的性狀。

大田準備。中國南瓜官方DUS測試通過盲測方式開展測試任務，所有品種測試任務實行統(tǒng)一測試標準，按照測試指南要求申請品種和近似品種相鄰栽種，采用露地爬蔓方式種植、單蔓整枝，測試栽培重點在于保證單株間不相互影響。根據(jù)土壤肥力確定施基肥總量，翻耕土壤，按6.0 m寬開溝作畦，整平畦面，畦兩邊各整一條寬0.8 m的廂，在廂面撒施復合肥，平均750 kg/hm左右，覆蓋銀灰色地膜。自主測試人員可按照自己測試品種田間表現(xiàn)合理調整田間畦面布局。

定植時間。南瓜苗兩葉一心時期，一般苗齡15 d左右。定植選擇在傍晚或陰天進行。

定植方法。移栽前1～2 d用50%多菌靈500倍液或53%金雷多米爾分散劑500倍液噴霧保護幼苗。定植采用雙行對爬種植，株距80 cm，單畦兩廂按相向插空原則種植。每穴定植1株，定植后及時澆定根水，用細土將定植孔周圍地膜覆蓋。

查苗補苗。定植后，注意查苗補苗，保全壯苗數(shù)量，保證每品種2次重復小區(qū)，每重復小區(qū)至少30株瓜苗供測試觀測。

設施除草。瓜苗開始甩蔓前，及時在畦面未鋪地膜中間區(qū)域噴灑金都爾封閉除草劑，再在此區(qū)域鋪蓋較密目數(shù)遮陽網(wǎng)，可有效防止生長期內雜草及保護南瓜，同時保證畦面整潔美觀性，對采集測試品種高質量圖像具有重要作用。

肥水管理。瓜苗定植后7 d左右，追施一次發(fā)棵肥，一般采用稀薄肥水。在植株坐穩(wěn)第一個幼瓜時，一般追施225 kg/hm左右的三元復合肥。追肥應做到均勻施肥，結合澆水均勻沖施為宜，力爭將追肥對品種果實一致性的差異影響降至最低。南瓜不耐澇，陰雨天氣應及時清溝排水，防止田間積水。

植株管理

整枝。中國南瓜測試指南規(guī)定南瓜田間種植采用單蔓整枝管理，在南瓜苗定植后至南瓜第一個瓜坐穩(wěn)前應及時摘除側蔓，僅保留1根主蔓。

壓蔓。當主蔓長至7～9節(jié)時，兩廂南瓜苗相向平行引蔓壓蔓一次，相鄰2株南瓜苗生長不相互影響，保證測試個體正常獨立生長。

人工授粉。測試中，除開花期連續(xù)陰雨天外，一般不對測試品種采用人工授粉方式。

留瓜。每株主蔓第一個瓜開花前及時摘除，測試觀測果實一般選擇主蔓第2～3個瓜。按照測試指南要求，觀測時期分a、b、c 3個時期，南瓜測試必測性狀共35個，其中a時期涉及7個必測性狀，主要涉及觀測葉片性狀，通常在植株第一個果實發(fā)育完全時，選取植株中部最大完整葉片為觀測對象。

從觀測時期b開始需觀測南瓜果實相關必測性狀，其中b時期為南瓜發(fā)育完全但還未生理成熟時期，c時期為南瓜完全生理成熟時期。b時期涉及16個必測性狀，測試選擇離蔓基部第2～3個果實為標準瓜觀測對象，南瓜形態(tài)發(fā)育完全時觀測相關性狀，觀測可不采摘直接在地頭進行，如種植南瓜測試樣本數(shù)量足夠，可采回觀測。觀測時期c涉及11個必測性狀，需采摘完全成熟的標準瓜，c時期各性狀觀測20個樣本，一般留3～5 cm瓜蒂，輕摘輕放，以免機械損傷。此外，在b、c觀測時期采摘典型標準瓜用于果實轉色前后圖像采集。

采收后未及時觀測的南瓜品種應選擇貯藏于通風、干燥及陰涼的室內，分品種單層碼放，防止潮濕。

觀測南瓜c時期種子性狀時，將南瓜切開取種，用衛(wèi)生紙將南瓜籽外黏液擦干并放入網(wǎng)絲袋中，置于室外曬干至含水量低于13%后，觀測種子性狀及圖像采集。

防治對象。測試中主要防治病害為猝倒病、立枯病、白粉病、疫病、霜霉病、炭疫病、病毒病、鐮孢果實病等。

測試中主要防治蟲害為蚜蟲、薊馬、紅葉螨、地老虎、黃條跳甲、美洲斑潛蠅等。

防治方法。

農業(yè)防治。實行田間輪作制度，與非瓜類作物輪作，有條件地區(qū)實行水旱輪作。加強田間管理，嚴防積水，中耕松土。嚴格進行種子消毒管理，減少種子帶菌傳病?？茖W施肥，增施有機肥，減少化肥用量，平衡施肥。

物理防治。進行避雨、遮陽、防蟲設施栽培。采用銀灰地膜驅蚜或懸掛黃板誘殺蚜蟲；設置頻振式殺蟲燈殺滅害蟲。

化學防治。防治方法參照有關方法，嚴格控制農藥使用濃度及安全間隔期。