李燕平 詹海杰 曹 亮 黨文慶 樊愛芳 上官明軍 任克良

(山西農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科學(xué)學(xué)院，太原030032)

仔兔在哺乳期時雖然消化免疫系統(tǒng)尚未發(fā)育完全，但是由于受母乳中中鏈脂肪酸等物質(zhì)的保護，能夠免受致病菌的侵襲，但隨著仔兔的生長，為了建立正常的腸道營養(yǎng)菌群結(jié)構(gòu)，需要及時斷奶以及補飼。在斷奶后，由于外界因素的改變，仔兔極易出現(xiàn)腹瀉的癥狀，嚴重的甚至導(dǎo)致死亡[1]。為了預(yù)防此類情況，抗生素是此前常用的主要添加劑以及促生長劑，我國已于2020年全面禁止飼糧中抗生素的使用，所以為了維護公共衛(wèi)生與動物食品的安全，綠色抗生素替代品的研究便顯得尤為重要。酶制劑是由氨基酸組成的蛋白質(zhì)，在畜禽飼糧中添加酶制劑具有增強動物保健、增強內(nèi)源酶活性、抗氧化以及抑菌殺菌等功能，其中一些功能與抗生素的作用接近或相同[2]。酸化劑能夠改善畜禽飼糧的適口性，降低其消化道的pH，促進蛋白質(zhì)和礦物質(zhì)的吸收，常用的酸化劑包括乳酸、檸檬酸和甲酸等，并且一般情況下，復(fù)合酸化劑的腐蝕強度更弱，使用效果更佳[3-4]。近年來的研究表明，在飼糧中單獨添加酶制劑或酸化劑對其生長有促進作用[5-8]，但目前飼糧中混合添加酶制劑+檸檬酸+二甲酸鉀作為綠色添加劑對于肉兔生長發(fā)育影響的研究較少，由于3種物質(zhì)不同濃度梯度組合排列較多，研究起來較為復(fù)雜，在前期研究[6,9-10]的基礎(chǔ)上，本研究固定復(fù)合酶制劑的添加量，設(shè)定了不同梯度的檸檬酸和二甲酸鉀的添加量，旨在研究斷奶肉兔飼糧中添加復(fù)合酶制劑、檸檬酸和二甲酸鉀對其生長性能、養(yǎng)分表觀消化率、屠宰性能以及免疫指標等方面的影響，為兩者在家兔實際的生產(chǎn)應(yīng)用提供科學(xué)參考。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

試驗中使用的復(fù)合酶制劑(酶活性：木聚糖酶≥12 000 U/g，堿性蛋白酶≥10 000 U/g，葡萄糖淀粉酶≥10 000 U/g，中性蛋白酶≥5 000 U/g以及酸性蛋白酶≥5 000 U/g)購自山東某酶制劑有限公司。一水檸檬酸(食品級)購自濰坊某實業(yè)有限公司。二甲酸鉀購自日照某農(nóng)牧發(fā)展有限公司(純度97.0%)。

1.2 試驗設(shè)計

試驗挑選240只健康的伊拉商品斷奶兔(公母各占1/2)，根據(jù)性別、體重將其隨機分成4組，每組60個重復(fù)，每個重復(fù)1只兔。對照組飼喂基礎(chǔ)飼糧，試驗組在基礎(chǔ)飼糧+0.15%復(fù)合酶制劑的基礎(chǔ)上，分別添加0.70%檸檬酸+0.30%二甲酸鉀(Ⅰ組)、0.50%檸檬酸+0.50%二甲酸鉀(Ⅱ組)、0.30%檸檬酸+0.70%二甲酸鉀(Ⅲ組)。預(yù)試期5 d，正試期35 d。

1.3 基礎(chǔ)飼糧

對飼料原料測定常規(guī)養(yǎng)分后，參考任克良[11]推薦的肉兔飼養(yǎng)標準，使用玉米、豆粕、豆秸桿粉、花生秧以及麩皮等原料混合配制基礎(chǔ)飼糧，其組成及營養(yǎng)水平見表1。試驗飼糧是由基礎(chǔ)飼糧以及3種不同組合的添加劑分別混合制成。飼糧均為顆粒飼料，直徑約4 mm。

1.4 飼養(yǎng)管理

試驗選在某肉兔養(yǎng)殖場進行，在試驗開始前對兔舍環(huán)境實施全面清潔消毒，兔舍每日強制通風。試驗兔采用單籠飼養(yǎng)方式，每日的早、晚各飼喂1次。

表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平(風干基礎(chǔ))

1.5 檢測指標及測定方法

1.5.1 生長性能

從試驗開始到結(jié)束，持續(xù)統(tǒng)計飼喂量，并固定每周測定1次空腹體重，分別計算得到平均日增重、平均日采食量以及料重比。

記錄每日試驗兔的腹瀉和死亡情況，計算腹瀉率、死亡率，公式如下：

腹瀉率(%)==[腹瀉只日數(shù)/(試驗只數(shù)×
試驗天數(shù))]×100；
死亡率(%)=(死亡只數(shù)/試驗只數(shù))×100。

1.5.2 屠宰性能、免疫器官指數(shù)

試驗結(jié)束時，從各試驗組中挑選出8只(公母各占1/2)平均體重相近的試驗兔進行屠宰，稱量并記錄宰前、胴體、頭、各臟器、后腿肌肉以及背腰最長肌的重量。進而計算得到免疫器官指數(shù)、半凈膛率、全凈膛率、后腿率以及背腰最長肌率。

1.5.3 血清免疫指標

試驗結(jié)束前2 d，從各試驗組分別挑選8只(公母各占1/2)試驗兔進行耳部靜脈采血，血液靜置后離心，采集血清隨后裝入EP管，測定血清免疫指標。該指標的測定采用上海酶聯(lián)生物科技有限公司的試劑盒，其標準品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)(R2)≥0.99。

1.5.4 養(yǎng)分表觀消化率

從各組分別選取8只(公母各占1/2)平均體重相近的68日齡試驗兔，置于消化代謝籠內(nèi)，單籠飼養(yǎng)，采用全收糞法進行消化代謝試驗。記錄5 d的排糞量與采食量。糞便進行烘干、粉碎處理后，參考《飼料分析及飼料質(zhì)量檢測技術(shù)》[12]中的建議方法，測定采集的飼糧樣品及糞樣中的常規(guī)養(yǎng)分含量，計算養(yǎng)分表觀消化率。

1.6 數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計分析

使用Excel 2010軟件對試驗數(shù)據(jù)進行初步整理，采用統(tǒng)計分析軟件SPSS 26.0進行單因素方差分析(one-way ANOVA)，用Duncan氏法進行多重比較。腹瀉率和死亡率采用卡方檢驗。除腹瀉率、死亡率外，試驗結(jié)果用平均值±標準差表示。P<0.01為差異極顯著的判決依據(jù)，P<0.05為差異顯著的判決依據(jù)。

2 結(jié)果與分析

2.1 復(fù)合酶制劑、檸檬酸、二甲酸鉀組合對肉兔生長性能的影響

由表2可知，飼糧中添加復(fù)合酶制劑和檸檬酸、二甲酸鉀對肉兔的末重、平均日采食量和腹瀉率均無顯著影響(P>0.05)；Ⅲ組、Ⅰ組、Ⅱ組的平均日增重分別比對照組提高了7.91%(P<0.05)、5.38%(P>0.05)和2.76%(P>0.05)。Ⅲ組死亡率顯著低于對照組(P<0.05)。

表2 復(fù)合酶制劑、檸檬酸和二甲酸鉀組合對肉兔生長性能的影響

2.2 復(fù)合酶制劑、檸檬酸、二甲酸鉀組合對肉兔屠宰性能的影響

由表3可知，飼糧中添加復(fù)合酶制劑、檸檬酸和二甲酸鉀對肉兔的全凈膛率、半凈膛率、后腿率以及背腰最長肌率均沒有顯著影響(P>0.05)。

2.3 復(fù)合酶制劑、檸檬酸、二甲酸鉀組合對肉兔養(yǎng)分表觀消化率的影響

由表4可知，Ⅰ組和Ⅲ組的粗脂肪表觀消化率均高于對照組，但差異不顯著(P>0.05)，Ⅱ組的粗脂肪表觀消化率最高，與對照組差異顯著(P<0.05)。Ⅲ組的干物質(zhì)、粗蛋白質(zhì)、粗灰分、中性洗滌纖維以及酸性洗滌纖維表觀消化率均比對照組高，但差異不顯著(P>0.05)。

2.4 復(fù)合酶制劑、檸檬酸、二甲酸鉀組合對肉兔免疫器官指數(shù)的影響

由表5可知，Ⅲ組的圓小囊指數(shù)顯著高于對照組(P<0.05)；各試驗組的胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)與對照組相比均無顯著差異(P>0.05)。

表3 復(fù)合酶制劑、檸檬酸和二甲酸鉀組合對肉兔屠宰性能的影響

表4 復(fù)合酶制劑、檸檬酸和二甲酸鉀組合對肉兔養(yǎng)分表觀消化率的影響

表5 復(fù)合酶制劑、檸檬酸和二甲酸鉀組合對肉兔免疫器官指數(shù)的影響

2.5 復(fù)合酶制劑、檸檬酸、二甲酸鉀組合對肉兔血清免疫因子含量的影響

由表6可知，Ⅲ組血清免疫球蛋白A(IgA)含量極顯著高于對照組(P<0.01),同時顯著高于Ⅰ組(P<0.05)；各試驗組血清分泌型免疫球蛋白A(sIgA)含量分別極顯著(P<0.01)和顯著(P<0.05)高于對照組；Ⅲ組血清免疫球蛋白G(IgG)含量顯著高于Ⅰ組(P<0.05)，同時極顯著高于Ⅱ組(P<0.01)；所有試驗組血清免疫球蛋白M(IgM)含量均極顯著高于對照組(P<0.01)；在血清白細胞介素-10(IL-10)含量方面，Ⅱ組和Ⅲ組極顯著高于對照組(P<0.01)。

3 討 論

3.1 復(fù)合酶制劑、檸檬酸、二甲酸鉀組合對肉兔生長性能的影響

復(fù)合酶制劑具有降解飼糧中的非淀粉多糖的能力，降低其黏性，減少養(yǎng)分在腸道的淤積，減少養(yǎng)分的流失，還能讓腸道與養(yǎng)分更多的接觸，有利于消化[13]。閆先峰等[5]在飼糧中添加0.5%的復(fù)合酶制劑，顯著提高了斷奶仔豬平均日增重，降低了其料重比。邱嘉輝等[14]研究發(fā)現(xiàn)，5種類型的酶制劑均能提高肉雞料重比及增重等指標。李長喜等[15]研究發(fā)現(xiàn)，在育肥豬的飼糧中添加復(fù)合酶制劑能夠顯著降低料重比，增加屠宰后的背膘量。檸檬酸是畜牧業(yè)中使用最多的有機酸化劑之一[16]；二甲酸鉀具有良好的生物降解性，且更容易被加工[17]。它們能夠增加胃蛋白酶的活性、降低腸道內(nèi)容物的pH、提高腸道與胰腺中消化酶的活性[18]。鄭建婷等[6]在斷奶肉兔飼糧中分別添加了0.5%、1.0%和1.5%的檸檬酸，提高了肉兔的平均日增重，降低了料重比。費洪標等[19]在斷奶獺兔的飼糧中分別添加0.05%、0.10%與0.15%的酸化劑，試驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)0.10%的添加量對于增加平均日增重與降低料重比效果最佳。Ragaa等[7]發(fā)現(xiàn)在飼糧中添加0.45%二甲酸鉀可以提高艾維茵肉雞的生長性能。本研究將復(fù)合酶制劑和檸檬酸、二甲酸鉀混合添加到斷奶肉兔的飼糧中，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在復(fù)合酶制劑添加量0.15%的基礎(chǔ)上，添加不同比例的檸檬酸和二甲酸鉀，均可提高肉兔的平均日增重并降低料重比，當檸檬酸和二甲酸鉀的添加量為0.30%和0.70%時，能夠顯著提升斷奶肉兔的生長性能。

表6 復(fù)合酶制劑、檸檬酸和二甲酸鉀組合對肉兔血清免疫因子含量的影響

幼兔由于其消化系統(tǒng)與免疫系統(tǒng)尚未完全發(fā)育成熟，很容易因病原菌的感染而出現(xiàn)腸道菌群失衡，從而導(dǎo)致腹瀉?？股啬軌蝾A(yù)防并治療腹瀉，但是它的使用可能會擾亂肉兔的菌群平衡，而酸化劑與酶制劑作為綠色抗生素替代品，前者能夠維持肉兔消化道的酸性環(huán)境，為正常菌群提供適宜環(huán)境，后者又能夠彌補幼兔不能分泌足夠內(nèi)源酶的問題，刺激有益菌群的生長，均有預(yù)防腹瀉的功能[1,20]。閆先鋒[5]等在仔豬的基礎(chǔ)飼糧中添加0.5%的復(fù)合酶制劑，發(fā)現(xiàn)相比于對照組，試驗組的腹瀉率能夠下降61.90%之多。鄭建婷等[6]認為，斷奶肉兔飼糧中添加1.0%與1.5%檸檬酸能夠降低腹瀉率及死亡率。李兆勇等[21]研究發(fā)現(xiàn)，添加0.6%、1.0%、1.4%的二甲酸鉀到斷奶仔豬的飼糧中均能顯著緩解斷奶仔豬腹瀉的發(fā)生。在本試驗中，飼糧中組合添加復(fù)合酶制劑+檸檬酸+二甲酸鉀，具有降低斷奶肉兔的腹瀉率與死亡率的功效，當添加復(fù)合酶制劑0.15%+檸檬酸0.30%+二甲酸鉀0.70%時，降低死亡率的效果最明顯。

3.2 復(fù)合酶制劑、檸檬酸、二甲酸鉀組合對肉兔屠宰性能的影響

屠宰性能包括全凈膛率、半凈膛率以及胴體重等主要指標，能夠衡量肉畜及肉禽的產(chǎn)肉性能。鄭建婷等[22]添加復(fù)合酶制劑到肉兔飼糧中，結(jié)果試驗組與對照組在上述3個屠宰性能指標上均無顯著差異。周傳鳳等[23]研究發(fā)現(xiàn)，小麥-雜粕型飼糧中添加復(fù)合酶制劑對肉雞的各屠宰性能指標均無顯著影響。陳賽娟等[24]將不同含量的單寧酸添加到獺兔的飼糧中，發(fā)現(xiàn)其對獺兔的胴體重和屠宰率等指標均無顯著影響。王淑琴等[25]在肉仔雞飼糧中添加0.75%的檸檬酸后，顯著提高了21日齡肉雞的全凈膛率和腿肌率，但是幾乎沒有影響42日齡肉雞的屠宰性能。本試驗中混合加入的復(fù)合酶制劑和酸化劑對肉兔的全凈膛率、半凈膛率、后腿率以及背腰最長肌率等屠宰性能指標無不良影響。

3.3 復(fù)合酶制劑、檸檬酸、二甲酸鉀組合對肉兔養(yǎng)分表觀消化率的影響

通常認為，酸化劑能夠提高消化酶的活性，降低腸道pH，改善堿性環(huán)境下某些礦物質(zhì)元素難以吸收的問題，促進機體對養(yǎng)分的吸收。而酶制劑能夠破壞食物中的細胞結(jié)構(gòu)，增加其與消化酶的接觸面積，同時降低食糜的黏稠度，促進食物的消化與吸收[26]。楊飛來等[27]添加了2種復(fù)合酶制劑到育肥豬的基礎(chǔ)飼糧中，發(fā)現(xiàn)酶制劑組的飼糧粗蛋白質(zhì)和粗纖維表觀消化率顯著提高。詹海杰等[9]在肉兔飼糧中添加酸化劑，顯著提高幼兔對各養(yǎng)分表觀消化率。陳焱等[28]將二甲酸鉀添加到幼齡肉雞的基礎(chǔ)飼糧中，發(fā)現(xiàn)添加0.6%的二甲酸鉀能夠顯著提高鈣、磷及粗蛋白質(zhì)表觀消化率。上述結(jié)果表明，酶制劑及復(fù)合酸化劑均有提高畜禽養(yǎng)分表觀消化率的趨勢，在本試驗中，飼糧中添加復(fù)合酶制劑+檸檬酸+二甲酸鉀，提高了粗脂肪表觀消化率，當添加水平為復(fù)合酶制劑0.15%+檸檬酸0.30%+二甲酸鉀0.70%時，干物質(zhì)、粗蛋白質(zhì)、粗灰分、中性洗滌纖維以及酸性洗滌纖維表觀消化率均比對照組有所提高。

3.4 復(fù)合酶制劑、檸檬酸、二甲酸鉀組合對肉兔免疫指標的影響

胸腺是幼兔T細胞發(fā)育的場所，是重要的淋巴器官與免疫器官；脾臟是機體最大的外周免疫器官；而圓小囊是兔特有的一種免疫結(jié)構(gòu)，可以作為屏障抵御烈性抗原的入侵[29]。一般來講，免疫器官指數(shù)與免疫功能呈正向關(guān)系。孟亦蒙[30]將復(fù)合酶制劑添加到肉兔飼糧中，發(fā)現(xiàn)酶制劑沒有顯著影響胸腺、脾臟圓小囊指數(shù)。劉干[8]的試驗表明，復(fù)合酶制劑在一定程度上提高了肉雞的免疫器官指數(shù)。馮國亮等[10]將不同濃度的復(fù)合酸化劑添加到斷奶幼兔的飼糧中，發(fā)現(xiàn)酸化劑并沒有顯著影響幼兔脾臟、胸腺與圓小囊的生長，但是隨著酸化劑添加量的上升，胸腺指數(shù)有下降趨勢。本試驗結(jié)果表明，在基礎(chǔ)飼糧中組合添加復(fù)合酶制劑和檸檬酸、二甲酸鉀，當檸檬酸添加比例較高時，胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)最大；當檸檬酸添加比例較低時，脾臟指數(shù)比對照組減小。Valchevg[31]將酶制劑與酸化劑的混合物添加到飼糧中降低了肉雞的脾臟指數(shù)，亦反映了這一結(jié)果。

血清中的三大類免疫球蛋白IgG、IgA與IgM，能夠與抗原發(fā)生免疫反應(yīng)，從而阻斷病原體對機體的危害。IgG在自然被動免疫中起重要作用；IgA能夠以非炎癥行為消滅多數(shù)抗原，具有重要的維護機體穩(wěn)定的免疫功能；IgM作為一種免疫球蛋白，是免疫應(yīng)答中抗原最早產(chǎn)生的，是一種高效能的抗生物抗體，機體的早期防御與其息息相關(guān)[29]。sIgA能抑制附著在黏膜上的病原體，可以看作機體抵抗入侵的第1道防線。白細胞介素屬于淋巴因子，能夠參與機體的免疫應(yīng)答，與血細胞生長因子共同協(xié)調(diào)，具有傳遞信息、激活細胞的作用；白細胞介素-6(IL-6)具有刺激T細胞以及B細胞的功效，在抗感染免疫中起重要作用，IL-10能夠促進抗體的產(chǎn)生，還能抑制某些細胞的免疫應(yīng)答[32]。郭驥[33]發(fā)現(xiàn)在母豬的飼糧中添加0.2%的普肥特酸化劑，對血清中的IgA、IgG含量無顯著影響。陳丹蝶等[34]在玉米-豆粕的基礎(chǔ)飼糧中添加復(fù)合酶菌制劑，發(fā)現(xiàn)能顯著提高肉雞血清中IL-6的含量，但對IgA、IgG、IgM以及IL-10的含量影響不大。翟振亞等[35]的試驗結(jié)果表明，基礎(chǔ)飼糧中添加的1%的二甲酸鉀能夠顯著提高斷奶仔豬血清IgM的含量。趙莉等[36]將酶聯(lián)制劑與酸化劑添加到42日齡肉雞飼糧中，發(fā)現(xiàn)血清中3種免疫球蛋白的含量能夠提高30%以上。本試驗中，添加復(fù)合酶制劑、檸檬酸和二甲酸鉀的試驗組跟對照組相比，提高了血清中的免疫球蛋白和細胞因子的含量。Ⅰ組、Ⅱ組、Ⅲ組間相比，Ⅲ組(即復(fù)合酶制劑、檸檬酸、二甲酸鉀的添加水平為0.15%、0.30%、0.70%)極顯著提高血清中IgA、IgG以及IL-10的含量，血清IgM含量也呈升高趨勢，因此，Ⅲ組提高機體的免疫反應(yīng)效果最好。

4 結(jié) 論

綜合分析生長性能、屠宰性能、免疫指標以及養(yǎng)分表觀消化率等方面的結(jié)果可以得出，肉兔飼糧中組合添加復(fù)合酶制劑、檸檬酸、二甲酸鉀，能夠提高其生長性能、降低死亡率、提高免疫力，對肉兔屠宰性能與養(yǎng)分表觀消化率無不良影響。本試驗條件下，肉兔飼糧中復(fù)合酶制劑和酸化劑的適宜組合添加水平為：復(fù)合酶制劑0.15%+檸檬酸0.30%+二甲酸鉀0.70%。