齊夢迪 李 鐵 張克英 王建萍 白世平 曾秋鳳 彭煥偉 呂繼蓉 黃亞明 丁雪梅*

(1.四川農(nóng)業(yè)大學動物營養(yǎng)研究所，教育部動物抗病營養(yǎng)重點實驗室，動物抗病營養(yǎng)與飼料農(nóng)業(yè)農(nóng)村部重點實驗室，動物抗病營養(yǎng)四川省重點實驗室，成都611130；2.成都大帝漢克生物科技有限公司，成都611130)

抗生素可以改善動物的健康和生產(chǎn)性能，但也會導致耐藥微生物的發(fā)展，從而將耐藥性傳遞給人類。歐盟禁止在家禽業(yè)中使用抗生素作為生長促進劑，許多國家正在禁止使用抗生素作為生長促進劑。因此，尋找其他的生長促進劑來改善家禽生產(chǎn)是至關重要的。研究表明，在白羽肉雞飼糧中添加苯甲酸能提高肉雞的生長性能，改善腸道健康[1-2]。香芹酚和百里香酚均具有抗氧化、抑菌和促進動物生長等作用[3]。目前，植物精油因無抗藥性、無殘留、無副作用、可以促進動物生長等優(yōu)點而受到廣泛關注，但植物精油的推廣還存在一定的問題[4-8]。首先，植物精油的質(zhì)量是影響其發(fā)揮作用的關鍵因素，目前尚沒有關于植物精油的質(zhì)量標準，市場上該類產(chǎn)品良莠不齊；其次，植物精油的添加量及添加方式會影響其作用效果[8]，因此針對不同產(chǎn)品摸索出一套行之有效的使用方案是植物精油發(fā)揮作用的關鍵；再次，不同植物精油的氣味和口味可能存在一定的差異，根據(jù)動物適口性適當調(diào)整植物精油的品種，可能會改善其作用效果，把植物精油與其他添加劑配合使用可能會提升植物精油的效果。酸化劑可以改善飼糧的適口性，促進消化酶活性，它還可以通過調(diào)節(jié)腸道微生物區(qū)系提高養(yǎng)分消化率和能量滯留率，改善動物的生長性能。本試驗旨在研究植物精油、復合有機酸在飼糧中單獨或聯(lián)合應用對肉雞生長性能、血清生化指標、腸道形態(tài)與消化酶活性的影響，為進一步開發(fā)禁抗產(chǎn)品提供有力支持。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

試驗用復合有機酸主要成分含量：甲酸10%、苯甲酸18%、乳酸15%、其他酸及發(fā)酵產(chǎn)物47%、水分10%。植物精油主要成分含量：肉桂醛19%、香芹酚8%、百里香酚4%。

1.2 試驗設計

選用健康的1日齡愛拔益加(AA)白羽肉公雞416只，隨機分為4組，每組8個重復，每個重復13只雞。對照組，飼喂基礎飼糧；植物精油組(EO組)，飼喂基礎飼糧+植物精油(150 g/t)；復合有機酸組(COA組)，飼喂基礎飼糧+復合有機酸(1.5 kg/t)；植物精油與復合有機酸合用組(EO×COA組)，飼喂基礎飼糧+植物精油(150 g/t)+復合有機酸(1.5 kg/t)。試驗期42 d，分為1～21日齡和22～42日齡2個階段。

1.3 基礎飼糧

試驗采用玉米-豆粕型-雜粕型基礎飼糧，參照NRC(1994)和NY/T 33—2004肉仔雞營養(yǎng)需要并結(jié)合生產(chǎn)實踐配制。飼糧形態(tài)為顆粒飼料，前期顆粒直徑2.0 mm，后期顆粒直徑3.0 mm。基礎飼糧組成及營養(yǎng)水平見表1。

表1 基礎飼糧組成及營養(yǎng)水平(風干基礎)

1 Items1～21 1 to 21 days of age22～42 22 to 42 days of age Soybean oil2.293.28 CaCO31.141.10 CaH2PO41.110.85 NaCl0.250.25L- L-Lys·HCl0.470.50DL- DL-Met0.240.13L- L-Thr0.120.07 Choline chloride (50%)0.120.12 Multi-vitamins1)0.030.03 Mineral premix2)0.170.17 Total100.00100.00 Nutrient levels3) ME/(MJ/kg)12.3412.76 CP21.5020.00 Ca0.900.80 AP0.450.40 Lys1.351.18+ Met+Cys0.980.86

1.4 飼養(yǎng)管理

飼養(yǎng)試驗在四川農(nóng)業(yè)大學動物營養(yǎng)研究所肉雞舍進行，采用籠養(yǎng)的方式。入雛前24 h將雞舍升溫至33～35 ℃，此后溫度每周降低2～3 ℃，直至保持在22～24 ℃。采用自由采食和飲水，少喂勤添、連續(xù)光照、自然通風的飼養(yǎng)管理方式。定期打掃圈舍衛(wèi)生，每周消毒和常規(guī)免疫。

1.5 測定指標及方法

1.5.1 生長性能

分別于22和43日齡提前12 h斷料，以重復為單位稱量肉雞的體重和余料重，計算1～21日齡、22～42日齡、1～42日齡時平均日增重(ADG)、平均采食量(ADFI)和料重比(F/G)。

平均日增重(g)=(末重-初重)/天數(shù)；
平均日采食量(g)=耗料重量/天數(shù)；
料重比=耗料重量/(末重-初重)。

1.5.2 血清生化指標

在試驗第22天和第43天，每個重復選擇1只接近平均體重的肉雞，頸靜脈采血10 mL,于3 500 r/min離心10 min，分離血清于0.5 mL離心管中，置-20 ℃冷凍保存，待測。采用全自動生化分析儀測定血清中總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)活性與堿性磷酸酶(ALP)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)活性。

1.5.3 空腸消化酶活性

將采血后的32只肉雞屠宰，分離空腸，取空腸食糜于EP管，液氮速凍，-80 ℃保存，待測。采用南京建成生物有限公司的試劑盒測定空腸消化酶活性，其中胰蛋白酶活性的測定采用紫外比色法，淀粉酶活性的測定采用碘-淀粉比色法，脂肪酶活性的測定采用微板法，具體測定步驟根據(jù)試劑盒說明書進行。

1.5.4 腸道形態(tài)

分離十二指腸和空腸，取腸段中部約1.5 cm固定于10%的福爾馬林溶液，將固定好的腸段用乙醇脫水，二甲苯透明，石蠟包埋進行切片，然后用蘇木精-伊紅(HE)染色，光學顯微鏡下觀察，測量腸段絨毛高度(VH)、隱窩深度(CD)，計算絨毛高度/隱窩深度比值(絨隱比，VH/CD)。

1.5.5 盲腸食糜揮發(fā)性脂肪酸含量

分離盲腸，取盲腸食糜于EP管中，液氮速凍，-80 ℃保存，待測。樣品解凍后混勻，均勻取約0.7 g樣品(準確記錄質(zhì)量)于2 mL離心管，加1.5 mL超純水混勻靜置30 min，15 000 r/min離心15 min；取1 mL上清加入0.2 mL 25%(m/v)偏磷酸溶液、23.3 μL 210 mmol/L巴豆酸溶液，混勻后4 ℃放置孵育30 min，15 000 r/min離心10 min；離心后取0.3 mL上清加入0.9 mL色譜甲醇混勻(1∶3稀釋)，10 000 r/min離心5 min，取上清用0.22 μm濾膜過濾至1.5 mL EP管，用氣相色譜儀(Varian，GC CP3800)進行乙酸、丙酸、異丁酸、丁酸、異戊酸、戊酸含量的測定。

1.6 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計

試驗數(shù)據(jù)先用Excel 2019進行初步統(tǒng)計，再采用SAS 9.4統(tǒng)計軟件中GLM程序進行2×2雙因素方差分析(two-way ANOVA)，統(tǒng)計模型為是否添加植物精油、是否添加復合有機酸及二者的交互作用。試驗數(shù)據(jù)用平均值和均值標準誤(SEM)表示，P<0.05表示差異顯著，P>0.05表示差異不顯著，0.05≤P<0.10表示有顯著趨勢。

2 結(jié) 果

2.1 植物精油和復合有機酸對肉雞生長性能的影響

由表2可知，飼糧中添加植物精油對肉雞各階段的平均體重、ADG、ADFI、F/G均無顯著影響(P>0.05)，飼糧中添加復合有機酸對肉雞各階段的平均體重、ADG、ADFI、F/G亦無顯著影響(P>0.05)，且飼糧中添加植物精油和復合有機酸對肉雞的生長性能無顯著交互作用(P>0.05)。

2.2 植物精油和復合有機酸對肉雞血清生化指標的影響

由表3可知，飼糧中添加植物精油顯著提高了21日齡時肉雞血清中TP和ALB的含量(P<0.05)，并顯著提高了42日齡時肉雞血清中ALB的含量(P<0.05)。飼糧中添加復合有機酸顯著提高了21日齡時肉雞血清中AKP的活性(P<0.05)，顯著降低了42日齡時肉雞血清中AKP的活性(P<0.05)，有提高42日齡時肉雞血清中白蛋白的含量的趨勢(P=0.095)。飼糧中添加植物精油和復合有機酸對42日齡時肉雞血清中ALB含量有顯著的交互作用(P<0.05)。

2.3 植物精油和復合有機酸對肉雞腸道形態(tài)的影響

由表4可以看出，飼糧中添加植物精油顯著提高了21日齡時肉雞空腸VH和VH/CD以及42日齡時肉雞空腸VH/CD(P<0.05)，顯著降低了42時肉雞空腸CD(P<0.05)。飼糧中添加復合有機酸顯著提高了21日齡時肉雞空腸VH/CD(P<0.05)，有提高21日齡時肉雞十二指腸VH的趨勢(P=0.083)。飼糧中添加植物精油和復合有機酸對21日齡時肉雞十二指腸CD和42日齡時肉雞十二指腸VH/CD有顯著的交互作用(P<0.05)，表現(xiàn)為飼糧中添加植物精油和復合有機酸可以降低21日齡時肉雞十二指腸的CD，提高42日齡時肉雞十二指腸的VH/CD。

2.4 植物精油和復合有機酸對肉雞空腸消化酶活性的影響

由表5可知，飼糧中添加植物精油顯著提高21日齡時肉雞空腸脂肪酶和胰蛋白酶的活性(P<0.05)，顯著提高了42日齡時肉雞空腸淀粉酶的活性(P<0.05)。飼糧中添加復合有機酸顯著提高了21日齡時肉雞空腸脂肪酶和胰蛋白酶的活性(P<0.05)，顯著提高了42日齡時肉雞空腸淀粉酶和脂肪酶的活性(P<0.05)。飼糧中添加植物精油和復合有機酸對空腸淀粉酶、脂肪酶和胰蛋白酶的活性均無顯著的交互作用(P>0.05)。

2.5 植物精油和復合有機酸對肉雞盲腸食糜揮發(fā)性脂肪酸含量的影響

由表6可知，飼糧中添加植物精油顯著提高了21日齡時肉雞盲腸食糜異丁酸含量(P<0.05)。飼糧中添加復合有機酸顯著提高了21日齡時肉雞盲腸食糜乙酸和總揮發(fā)性脂肪酸含量(P<0.05)，并有提高丙酸和異戊酸含量的趨勢(P=0.063、P=0.076)；顯著提高了42日齡時肉雞盲腸食糜丁酸和總揮發(fā)性脂肪酸含量(P<0.05)，有提高乙酸和丙酸含量的趨勢(P=0.077、P=0.090)，有降低異丁酸含量的趨勢(P=0.063)。飼糧中添加植物精油和復合有機酸對21日齡時肉雞盲腸食糜丙酸和異戊酸含量以及42日齡時肉雞盲腸食糜乙酸、丙酸、丁酸和總揮發(fā)性脂肪酸含量有顯著的交互作用(P<0.05)，表現(xiàn)為提高了21日齡時肉雞盲腸食糜丙酸和異戊酸的含量。

表2 植物精油和復合有機酸對肉雞生長性能的影響

表4 植物精油和復合有機酸對肉雞腸道形態(tài)的影響

表5 植物精油和酸化劑對肉雞空腸消化酶活性的影響

5EO COAAmylase Lipase Protease ++60.68991.94a4 453.42aSEM8.0196.26406.09 EO-51.20483.72b2 994.40b+63.41739.06a4 212.97a COA-59.98423.47b3 103.44b+54.63799.31a4 103.94aP P-value EO0.1540.0210.005 COA0.5170.0020.014× EO×COA0.9890.2020.40142 42 days of age--71.85576.901 348.04b+-140.30570.671 856.11ab-+139.99649.351 846.14ab++217.80753.422 216.01aSEM24.0752.69259.53 EO-105.92b613.131 597.09+179.05a662.052 036.06 COA-106.08573.79b1 602.08+178.89701.39a2 031.08P P-value EO0.0100.3720.117 COA0.0110.0320.124× EO×COA0.8490.3160.794

表6 植物精油和復合有機酸對肉雞盲腸食糜揮發(fā)性脂肪酸含量的影響

6EO COA Aceticacid Propionic acid Isobutyric acid Butyric acid Isovaleric acid Valeric acid Total VFA COA-41.00b5.370.819.770.780.5793.81b+58.53a7.291.2212.021.030.65130.41aP P-value EO0.2850.2200.0320.4100.2980.3140.167 COA0.0070.0630.1910.2080.0760.5840.005× EO×COA0.4150.0030.7700.5430.0410.6750.18042 42 days of age--41.24b3.38b0.95ab4.60b1.06b0.9152.14b+-48.34b7.20a1.73a8.04ab1.53a1.0167.86b-+68.77a7.11a0.68b11.11a0.95b1.0091.41a++45.04b6.55ab0.64b7.76ab0.96b0.9061.85bSEM6.400.850.341.090.200.157.33 EO-55.005.250.817.861.010.9572.52+46.696.881.187.901.240.9664.85 COA-44.795.291.346.32b1.290.9660.00b+56.906.830.669.44a0.950.9577.37aP P-value EO0.2130.0730.2920.9660.2670.9700.314 COA0.0770.0900.0630.0120.1150.9360.032× EO×COA0.0290.0200.2470.0070.2840.5020.006

3 討 論

3.1 植物精油和復合有機酸對肉雞生長性能的影響

陳立華等[9]研究表明，飼糧中添加高劑量牛至油的肉雞日增重最高。陳權(quán)軍等[10]在1日齡雛鴨飼糧中分別添加30 mg/kg哇乙醇、30 mg/kg哇烯酮和15 mg/kg牛至油，發(fā)現(xiàn)牛至油添加組雛鴨日增重分別比哇乙醇添加組和對照組提高了11.3%和7.1%。朱曉磊等[11]研究發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加百里香精油可以顯著提高肉雞的生長性能。本研究中，飼糧中添加植物精油對肉雞的生長性能無顯著影響，這與前人的研究結(jié)果不一致，可能與添加的植物精油的種類和劑量不同有關。家禽飼糧中添加有機酸可降低飼糧的pH和酸結(jié)合力，改善適口性，促進腸道對營養(yǎng)物質(zhì)的吸收，從而提高家禽的采食量、體增重。Abdel-Fattah等[12]研究表明，肉雞飼糧中添加1.5%的乙酸、3.0%的檸檬酸可以有效改善日增重和料重比。李軍[13]研究表明，乳酸復合酸化劑在大雞階段顯著提高了日增重，最大提高了7.8%。宋凡春[14]研究表明，添加500或250 mg/kg包被苯甲酸對白羽肉雞后期生長性能的作用效果不顯著。本試驗與前人的結(jié)果相似，說明酸化劑的劑量不同會對肉雞的生長性能產(chǎn)生較大差異。研究表明，飼糧同時添加苯甲酸和植物精油后，肉雞的ADG有提高的趨勢[15]，F(xiàn)/G降低[16]。與單獨添加植物精油和酸化劑相比，不同植物精油與有機酸組合添加對提高白羽肉雞生長性能作用更佳[17]。在本研究中，同時添加植物精油和復合有機酸對肉雞生長性能無顯著影響，與前人的研究結(jié)果存在差異，其原因可能與植物精油和有機酸聯(lián)用效果及其使用劑量、植物精油自身構(gòu)成比例、植物精油與有機酸之間的配比協(xié)同作用以及肉雞品種和飼養(yǎng)環(huán)境有關。

3.2 植物精油和復合有機酸對肉雞血清生化指標的影響

血清中TP含量是體現(xiàn)肝臟功能及營養(yǎng)狀況的重要指標，反映了蛋白質(zhì)合成、吸收和代謝的情況。TP包括球蛋白(GLB)和白蛋白(ALB)，GLB可增強機體免疫力，ALB可修復受損組織，故血清TP含量能反映出機體的蛋白質(zhì)消化能力和免疫機能[18]。飼糧中添加抗生素和植物精油都可以顯著提高斷奶仔豬血清中TP和ALB含量，表明植物精油和抗生素效果相同，可以有效改善仔豬蛋白質(zhì)代謝水平[19]。本研究中，飼糧中添加植物精油顯著提高了21日齡時肉雞血清中TP和ALB的含量以及42日齡時肉雞血清中ALB的含量，與前人研究結(jié)果一致。已有研究顯示，飲水中添加復合酸化劑可以顯著提高肉雞血清中TP和ALB的含量[20]；飼糧中添加復合酸化劑顯著提高肉雞血清中ALB含量[21]。本研究中，飼糧中添加復合有機酸有提高42日齡時肉雞血清中ALB含量的趨勢，這與前人的研究結(jié)果不完全一致，推測可能與酸化劑的添加量或飼喂方式不同有關。本研究表明，同時添加植物精油和復合有機酸可以提高肉雞血清ALB的含量，這與王盼盼等[22]的研究結(jié)果一致。有研究顯示，在肉雞飼糧中添加有機酸和復合微囊包被物可以提高血清TP含量[23]，表明復合有機酸與植物精油聯(lián)合使用有一定的協(xié)同作用。

3.3 植物精油和復合有機酸對肉雞腸道形態(tài)的影響

腸道絨毛作為腸道的重要組成部分，其形態(tài)結(jié)構(gòu)的變化直接影響著機體對營養(yǎng)物質(zhì)的消化和吸收[24]。而腸道VH、CD、VH/CD是評價腸道消化吸收能力的重要指標[25]。在本研究中，飼糧中添加植物精油顯著提高了21日齡時肉雞空腸VH和VH/CD，這與前人的研究結(jié)果[26-27]一致。Paul等[28]研究發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加有機酸可以顯著增加肉雞空腸的VH。但是Gunal等[29]研究表明，復合酸化劑對肉雞腸道形態(tài)并無顯著影響。本試驗結(jié)果表明，飼糧中添加復合有機酸能提高21日齡時肉雞空腸的VH/CD?？傮w來說，飼糧中添加酸化劑對腸道形態(tài)的影響效果并不統(tǒng)一，可能與雞的品種、飼養(yǎng)環(huán)境、酸化劑的種類及劑量不同有關。研究表明，肉雞飼糧添加“精油+有機酸”微囊包被制劑對其十二指腸VH的增高、CD變淺及VH/CD增高均具有一定作用[23]。本研究表明，同時添加植物精油和復合有機酸顯著降低了21日齡時肉雞十二指腸的CD，顯著提高了42日齡時肉雞十二指腸的VH/CD。本試驗結(jié)果與前人的報道一致，表明植物精油和酸化劑在改善肉雞腸道形態(tài)時有一定的協(xié)同作用。

3.4 植物精油和復合有機酸對肉雞空腸消化酶活性和盲腸食糜揮發(fā)性脂肪酸含量的影響

研究表明，雞腸道中的大部分淀粉酶、胰蛋白酶和脂肪酶均分布在十二指腸和空腸[30-31]，因此，空腸消化酶活性可以作為衡量腸道消化能力的重要指標[31]。植物精油具有一定的黏性，可以使飼料黏附在腸壁上，刺激腸道分泌消化酶對其進行消化[32]。研究發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加適宜水平的百里香酚和肉桂醛提高了肉雞腸道胰蛋白酶和淀粉酶活性[33-34]。李曉東等報道，植物精油可以顯著提高肉仔雞腸道蛋白酶活性和淀粉酶活性[35]。在本研究中，飼糧中添加植物精油提高肉雞空腸淀粉酶、脂肪酶和胰蛋白酶的活性，這與前人的研究結(jié)果一致。研究發(fā)現(xiàn)，在飼糧中添加復合酸化劑顯著提高了肉雞小腸淀粉酶活性[36]；顯著提高了仔豬十二指腸蛋白酶和淀粉酶活性，但對脂肪酶活性的影響不顯著[37]；顯著提高了仔豬十二指腸胰蛋白酶活性[38]。本試驗結(jié)果表明，飼糧中添加復合有機酸提高了肉雞空腸淀粉酶、脂肪酶和胰蛋白酶的活性，這與前人的結(jié)果基本一致。研究顯示，肉雞飼糧添加“精油+有機酸”微囊包被制劑顯著提高了其小腸α-淀粉酶及糜蛋白酶活性[23]。本試驗得到的結(jié)果與上述報道相似，即在飼糧中同時添加植物精油和酸化劑提高了42日齡時肉雞空腸胰蛋白酶活性，推測可能是飼糧中添加的植物精油和有機酸能夠降低腸道內(nèi)環(huán)境pH，從而刺激腸壁消化腺的代謝分泌活動，促進消化酶分泌，提高消化酶活性[39]。

短鏈脂肪酸可以調(diào)節(jié)腸道中微生物結(jié)構(gòu)，給宿主提供能量，在機體營養(yǎng)代謝過程中起重要作用。Tiihonen等[40]的研究發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加百里香酚和肉桂醛能夠增加肉雞盲腸丁酸的相對含量。在本研究中，飼糧中添加植物精油顯著提高了21日齡時肉雞盲腸食糜異丁酸含量，并有提高42日齡時肉雞盲腸食糜丙酸含量的趨勢。郭傳珍等[41]研究顯示，在飼糧中添加不同劑量的丁酸鈉均可增加肉仔雞腸道揮發(fā)性脂肪酸含量。在本研究中，飼糧中添加復合有機酸顯著提高了21日齡時肉雞盲腸食糜乙酸含量，并有提高丙酸和異戊酸含量的趨勢，表明復合有機酸具有調(diào)節(jié)肉雞盲腸食糜揮發(fā)性脂肪酸含量的作用。Yang等[42]研究表明山梨酸、富馬酸和百里酚混合物(EOA)可以減少有害菌數(shù)量，提高揮發(fā)性脂肪酸含量來促進飼料轉(zhuǎn)化率。Yang等[43]報道，有機酸和植物精油聯(lián)用顯著提高了肉雞空腸丁酸和回腸總揮發(fā)性脂肪酸含量。本研究中，飼糧中同時添加植物精油和復合有機酸提高了21日齡時肉雞盲腸食糜丙酸和異戊酸的含量以及42日齡時肉雞盲腸食糜乙酸、丙酸、丁酸和總短鏈脂肪酸的含量，與上述研究結(jié)果一致，說明植物精油與酸化劑可以協(xié)同提高肉雞盲腸揮發(fā)性脂肪酸的含量。

4 結(jié) 論

飼糧中添加植物精油(150 g/t)和復合有機酸(1.5 kg/t)對肉雞生長性能沒有顯著影響，但可以改善血清生化指標和腸道形態(tài)結(jié)構(gòu)，提高空腸消化酶活性，增加盲腸食糜總揮發(fā)性脂肪酸含量。綜合各項指標，兩者合用更有利于肉雞的腸道健康。