段紅艷，楊 帆，陳開(kāi)義

（三金集團(tuán)湖南三金制藥有限責(zé)任公司，湖南 常德 415000）

0 引言

肝腎補(bǔ)顆粒是由三七、熟地黃、制何首烏、黨參、枸杞子、白芍、當(dāng)歸、炙甘草、茯苓、黃芪、木香十一味藥材組成的復(fù)方制劑，收載于國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)WS-5889-（B-0889）-2014Z 中，功能主治益氣養(yǎng)血，滋補(bǔ)肝腎。用于氣血兩虛，肝腎不足見(jiàn)有面色蒼白，神疲乏力，頭暈?zāi)垦?，心悸，健忘失眠，腰膝酸軟。原?biāo)準(zhǔn)中收載了三七、甘草、黃芪的薄層色譜鑒別，制何首烏中大黃素的高效液相含量測(cè)定，制何首烏中大黃素含量測(cè)定方法前處理復(fù)雜，采用了回流、多次蒸干等煩瑣步驟，對(duì)大黃素結(jié)果準(zhǔn)確度有一定影響，故本文在既往研究的基礎(chǔ)上采用高效液相色譜法對(duì)方中白芍（以芍藥苷計(jì)）進(jìn)行了含量測(cè)定，此方法更為簡(jiǎn)便，為更好的控制肝腎補(bǔ)顆粒的質(zhì)量提供依據(jù)。

1 薄層鑒別方法學(xué)研究及驗(yàn)證

供試品處理方法：取2 袋，研細(xì)，加硫酸溶液（2mol/L）50mL，加乙醚用分液漏斗振搖提取2 次，每次30mL，分取乙醚液，蒸干，殘?jiān)蛹状?mL 使溶解，作為供試品溶液。

對(duì)照藥材處理方法：取制何首烏藥材1g，加硫酸溶液（2mol/L）20mL，置水浴鍋中使其微沸回流1h，冷卻，同法制成對(duì)照藥材溶液。

展開(kāi)劑：甲酸-乙酸乙酯-甲苯（1∶2∶15）。

吸附劑：硅膠G。

顯色：氨氣。

樣品批號(hào)：210502。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果：在與藥材薄層色譜及對(duì)照品相應(yīng)的位置上顯同一顏色的熒光斑點(diǎn)，置氨氣熏后，日光下檢視，顯相同的紅色斑點(diǎn)，圖1 為制何首烏薄層鑒別。

圖1 制何首烏薄層鑒別

為驗(yàn)證以上方法的專(zhuān)屬性，制備缺制何首烏藥材陰性樣，與肝腎補(bǔ)顆粒樣按上述實(shí)驗(yàn)方法同法操作，在同一薄層板上分別點(diǎn)上缺制何首烏陰性樣、肝腎補(bǔ)顆粒樣和何首烏對(duì)照藥材樣，結(jié)果陰性樣在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上沒(méi)有顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性樣其他位置上斑點(diǎn)與肝腎補(bǔ)顆粒樣基本一致；而肝腎補(bǔ)顆粒樣則在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上顯相同顏色的斑點(diǎn)。說(shuō)明該試驗(yàn)方法陰性樣無(wú)干擾，專(zhuān)屬性強(qiáng)，能對(duì)肝腎補(bǔ)顆粒中的制何首烏進(jìn)行定性鑒別。

圖2 制何首烏專(zhuān)屬性薄層鑒別

2 含量檢測(cè)方法學(xué)研究及驗(yàn)證

2.1 儀器與試劑

儀器：島津LC-16、LC-15C 高效液相色譜儀，SPD-16、SPD-15C 紫外檢測(cè)器，Labsolutions 色譜工作站。

試劑：甲醇（色譜醇湖北弗頓科學(xué)技術(shù)有限公司）、純化水。

芍藥苷對(duì)照品（批號(hào)：110736-201640，中國(guó)食品藥品檢定研究院）。

樣品：肝腎補(bǔ)顆粒。

2.2 色譜條件

色譜柱：C18（250mm×4.6mm，5μm），填充劑為十八烷基硅烷鍵合硅膠。

流動(dòng)相：甲醇☆水（25☆75），檢測(cè)波長(zhǎng)為230nm。

流速：1.0mL/min，進(jìn)樣量為10μL，理論板數(shù)按芍藥苷峰計(jì)算不低于3000。

2.3 供試品制備

精密稱(chēng)定本品粉末2g，先加水15mL 溶解完全。再用水飽和的正丁醇溶液用分液漏斗振搖提取4 次，每次15mL，合并正丁醇提取液，水浴蒸干，殘?jiān)酉∫掖歼m量使溶解。轉(zhuǎn)移至5mL 容量瓶中，加稀乙醇至刻度，搖勻即得。

2.4 對(duì)照品溶液的制備

精密稱(chēng)定芍藥苷對(duì)照品適量，加分析甲醇配制成每1mL 中含50μg 的溶液，即得。

2.5 樣品測(cè)定

取樣品三批，分別為160901、160902、161001 批，照上述色譜條件和上述方法測(cè)定芍藥苷的含量，測(cè)定結(jié)果如表1 所示。

表1 肝腎補(bǔ)顆粒中芍藥苷的含量測(cè)定結(jié)果

以上結(jié)果表明，肝腎補(bǔ)顆粒中芍藥苷均能被有效檢出。

2.6 方法學(xué)驗(yàn)證

2.6.1 專(zhuān)屬性

按本處方比例，取除白芍的其他藥材，按生產(chǎn)工藝制備得陰性樣品，并依“供試品溶液制備”項(xiàng)下，同法處理后制得陰性樣品，按上述色譜條件，分別取缺白芍陰性樣，對(duì)照品溶液、供試品溶液各10μL，注入高效液相色譜儀，在上述色譜條件下進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果顯示，在陰性樣色譜圖中，芍藥苷出峰位置無(wú)其他峰干擾，如圖3～圖5 所示。

圖3 對(duì)照品溶液圖譜

圖4 樣品溶液圖譜

圖5 缺白芍陰性樣品溶液

2.6.2 精密度?

精密吸取同一對(duì)照品溶液連續(xù)進(jìn)樣6 針，每次10μL，按上述色譜條件測(cè)定，結(jié)果如表2 所示。

表2 精密度試驗(yàn)結(jié)果

以上結(jié)果表明本品的精密度良好。

2.6.3 線性

精密稱(chēng)取芍藥苷（批號(hào)：110736-201640，以95.2%計(jì)）對(duì)照品0.0083g，置50ml 容量瓶中，加分析甲醇先溶解再稀釋到刻度，搖勻，作為對(duì)照品貯備液（Cr=158μg/mL），分別精密吸取上述貯備液1mL、3mL、5mL、7mL、10mL，分別置10mL 量瓶中，分別加甲醇稀釋至刻度，搖勻，分別精密吸取10uL 注入液相色譜儀，照上述色譜條件，測(cè)定各濃度的色譜峰面積。以芍藥苷峰面積為圖表橫坐標(biāo)（x），濃度為圖表縱坐標(biāo)（y），制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，并進(jìn)行線性回歸，結(jié)果如表3、圖6 所示。

表3 線性試驗(yàn)結(jié)果

圖6 芍藥苷線性試驗(yàn)結(jié)果

上述結(jié)果表明，芍藥苷在15.8～158ug/mL 范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系。

2.6.4 準(zhǔn)確度

精密稱(chēng)取肝腎補(bǔ)顆粒樣品（已測(cè)定含量；批號(hào)：160901）6 份，分別精密加入芍藥苷對(duì)照品溶液，照含量測(cè)定項(xiàng)下方法制備供試品溶液，加稀乙醇稀釋至刻度，搖勻，得6 份供試品溶液，分別精密吸取10μL 注入液相色譜儀，按上述色譜條件，依法測(cè)定，結(jié)果如表4 所示。

表4 準(zhǔn)確度試驗(yàn)結(jié)果

以上結(jié)果表明本品的準(zhǔn)確度良好。

2.6.5 方法耐用性試驗(yàn)

按含量測(cè)定方法，分別對(duì)160901 批肝腎補(bǔ)顆粒采用不同牌號(hào)的色譜柱，不同型號(hào)的高效液相色譜儀分別測(cè)定芍藥苷的含量，計(jì)算，測(cè)定結(jié)果如表5、表6 所示。

表5 方法耐用性試驗(yàn)結(jié)果（一）

表6 方法耐用性試驗(yàn)結(jié)果（二）

以上結(jié)果表明方法耐用性試驗(yàn)良好。

3 結(jié)語(yǔ)

以上試驗(yàn)研究結(jié)果表明，肝腎補(bǔ)顆粒樣品中的芍藥苷能被有效檢出，且方法學(xué)驗(yàn)證表明該含量測(cè)定方法可行。選取了湖南三金制藥有限責(zé)任公司歷年生產(chǎn)的肝腎補(bǔ)顆粒按此方法進(jìn)行含量測(cè)定，均能有效檢出。此方法可納入企業(yè)內(nèi)控標(biāo)準(zhǔn)，便于更好更便利的控制產(chǎn)品質(zhì)量。