胡婷婷，王翌翀，余斯炅，陳良雷，王 峰，閆俊亮，郭凱軍*

（1.北京農(nóng)學(xué)院動(dòng)物科技學(xué)院，北京 102206；2.河南康星藥業(yè)有限公司，河南鄭州 450000）

目前奶牛場(chǎng)普遍使用同期發(fā)情提高奶牛發(fā)情配種效率，即對(duì)奶牛注射某些激素人為調(diào)整發(fā)情周期，使之在預(yù)定時(shí)間集中發(fā)情，以便有計(jì)劃地組織配種，集中進(jìn)行輸精，減少發(fā)情鑒定工作。為提高奶牛受胎率，很多牧場(chǎng)在產(chǎn)后50～60 d 開(kāi)展同期發(fā)情，以期縮短空懷天數(shù)。但由于同期發(fā)情頻繁使用，許多牧場(chǎng)奶牛對(duì)同期發(fā)情處理的敏感性降低，牧場(chǎng)空懷天數(shù)仍較高，有的甚至超過(guò)120 d，實(shí)踐中同期發(fā)情的效率有待提高。

中草藥催情散是中獸藥典的經(jīng)典驗(yàn)方，對(duì)促進(jìn)奶牛發(fā)情具有很好的效果。催情散使血漿中促卵泡素（Follicle Stimulating Hormone，F(xiàn)SH）增高，誘導(dǎo)奶牛發(fā)情。研究表明，催情散對(duì)治療各種家畜的不孕癥具有良好療效，催情散可以調(diào)節(jié)促炎和抗炎因子，達(dá)到治療持久性黃體的作用，還可使血液FSH、促黃體素（Luteinizing Hormone，LH）等激素顯著升高，催情散對(duì)不發(fā)情奶牛具有很好的催情效果。

超微粉技術(shù)是對(duì)中藥材進(jìn)行微粉化，將超微粉碎技術(shù)與中藥理論結(jié)合能夠在低劑量下取得較好的中藥效果。目前超微粉催情散對(duì)奶牛促發(fā)情效果及同期發(fā)情的影響未見(jiàn)報(bào)道。本文通過(guò)監(jiān)測(cè)試驗(yàn)前期奶牛服用催情散后的發(fā)情、受胎率、血清中FSH、LH、孕酮（Progesterone，P）、雌二醇（Estradiol，E）4 種激素水平的變化及試驗(yàn)后期對(duì)不發(fā)情牛只進(jìn)行牧場(chǎng)同期發(fā)情后的受孕效果，研究催情散超微粉對(duì)產(chǎn)后奶牛發(fā)情受胎效果的影響，以期解決長(zhǎng)期使用同期發(fā)情處理導(dǎo)致奶牛同期發(fā)情效果低下的問(wèn)題。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)藥品 實(shí)驗(yàn)藥品主要包括催情散（河南康星藥業(yè)有限公司，主要含淫羊藿、羊紅膻、陽(yáng)起石、黃芪、黨參、巴戟天、肉蓯蓉等）、促性腺激素釋放激素（Gonadotropin Releasing Hormone，GHRH，素仕生物科技有限公司）、前列腺激素（Prostaglandin，PG，素仕生物科技有限公司）。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 隨機(jī)選取60 頭產(chǎn)后50 d 未發(fā)情的健康奶牛（直腸檢查無(wú)子宮炎癥，牛無(wú)其他疾病等），按照胎次（2 胎和3 胎牛各30 頭）、體況評(píng)分（2.75±0.25）相近的原則，隨機(jī)分為3 組，分別為催情散低劑量組（250 g/次）、高劑量組（500 g/次）和對(duì)照組（PG），每組2 胎和3 胎牛各10 頭。

1.3 試驗(yàn)時(shí)間、地點(diǎn) 2020 年10 月—2020 年11 月在寧夏回族自治區(qū)銀川市賀蘭縣洪廣鎮(zhèn)新榮村奶牛養(yǎng)殖基地，最高氣溫（14.4±2.3）℃，最低氣溫（1.3±2.1）℃。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法 實(shí)驗(yàn)分前期（試驗(yàn)開(kāi)始1～18 d）和后期（試驗(yàn)開(kāi)始后18～63 d）2 個(gè)階段。在試驗(yàn)前期，低劑量組和高劑量組在產(chǎn)犢后50 d 時(shí)選擇沒(méi)有發(fā)情的牛只分別灌服催情散250 g/ 次和500 g/ 次，1 d 1 次，連續(xù)灌服3 d，對(duì)照組（20 頭）在試驗(yàn)開(kāi)始時(shí)注射一針PG。試驗(yàn)后期：試驗(yàn)第18 天，對(duì)照組和試驗(yàn)組不發(fā)情牛只實(shí)施牧場(chǎng)同期發(fā)情處理，同期發(fā)情后第10 天人工授精，人工授精后35 d 后進(jìn)行妊娠檢查。

PG 同期發(fā)情技術(shù)：采用前列腺素及其類(lèi)似物處理母牛，主要是誘導(dǎo)黃體溶解，黃體期縮短，導(dǎo)致新的卵泡期出現(xiàn)，達(dá)到同期發(fā)情的效果。主要方法：第1針注射GHRH，第2 針和第3 針注射PG，第4 針注射GHRH，每次注射劑量均為0.4 mg/頭，注射時(shí)間分別為0、7、8、9 d，最后在第10 天定時(shí)輸精。

本次實(shí)驗(yàn)的奶牛均采用相同的營(yíng)養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)即牛只管理制度、飼喂程序、飼喂環(huán)境均相同，并按常規(guī)進(jìn)行預(yù)防消毒工作。飼料、飼養(yǎng)用具及其他用品均由養(yǎng)牛場(chǎng)提供。同時(shí)，給予奶牛充足的運(yùn)動(dòng)空間。

1.4.1 發(fā)情判定和人工授精 試驗(yàn)前期：從用藥開(kāi)始到用藥后的第18 天以?xún)?nèi)利用計(jì)步器和尾根涂蠟法共同進(jìn)行判定奶牛發(fā)情。對(duì)發(fā)情母牛適時(shí)進(jìn)行人工授精，計(jì)算發(fā)情率和配種率。

1.4.2 檢測(cè)受胎率 配種后35 d 用高清獸用B 超機(jī)（V20，恒錦萊科技有限公司）檢查確定試驗(yàn)牛只是否妊娠，計(jì)算受胎率。

1.4.3 采集血樣 在第1 次用藥之前（記為第0 天）以及在用藥后第3、6、9、12、15 天進(jìn)行尾靜脈采血。采血后，將收集于采血管里的全血室溫放置2 h，然后3000 r/min 離心20 min，取上清即可，將上清置于-20℃保存，避免反復(fù)凍融。檢測(cè)指標(biāo)包括FSH、LH、P和E。檢測(cè)方法：通過(guò)放免儀（北京北方生物技術(shù)研究所有限公司，XH6080）進(jìn)行放射免疫檢測(cè)（利用同位素標(biāo)記的與未標(biāo)記的抗原同抗體發(fā)生競(jìng)爭(zhēng)性抑制反應(yīng)的放射性同位素體外微量分析方法）。

1.5 統(tǒng)計(jì)分析 試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS21 軟件對(duì)發(fā)情率和受胎率進(jìn)行卡方檢驗(yàn)。對(duì)血液激素含量進(jìn)行ANOVA 方差分析，采用Duncan′s 方法對(duì)各組間平均數(shù)進(jìn)行多重比較，血液激素結(jié)果用平均值± 標(biāo)準(zhǔn)差表示。＜0.05表示差異顯著，＞0.05 表示差異不顯著。

2 結(jié)果

2.1 試驗(yàn)前期催情散對(duì)奶牛發(fā)情受胎效果觀察 試驗(yàn)前期，低劑量組奶牛的發(fā)情率顯著低于對(duì)照組，2 個(gè)劑量組間以及高劑量組和對(duì)照組間差異不顯著，對(duì)照組受胎率顯著高于低劑量組和高劑量組（表1）。

表1 試驗(yàn)前期發(fā)情受胎效果

在試驗(yàn)后期，同期發(fā)情后高劑量組受胎率顯著高于低劑量組和對(duì)照組，對(duì)照組和低劑量組之間差異不顯著（表2）。

表2 試驗(yàn)后期同期發(fā)情受胎效果

綜合考慮試驗(yàn)前期和后期，高劑量組的受胎率顯著高于低劑量組、對(duì)照組（表3）。

表3 試驗(yàn)全期發(fā)情和受胎效果比較

2.2 服用催情散前后奶牛血液生殖激素的變化 由表4 可知，試驗(yàn)前期，3 組奶牛血清中FSH、LH 含量無(wú)顯著差異。試驗(yàn)前期，在第3～6 天試驗(yàn)組奶牛血清中P含量顯著或趨于顯著高于對(duì)照組（＜0.05 或0.05＜＜0.1），第12 天低劑量組奶牛血清中P含量顯著低于對(duì)照組，第15 天2 個(gè)試驗(yàn)組均趨于顯著高于對(duì)照組（0.05＜＜0.1）。試驗(yàn)第12 天，高劑量組E含量顯著高于低劑量組，其余各組在任何時(shí)間內(nèi)均不顯著。

表4 試驗(yàn)前期奶牛血清中生殖激素含量變化

3 討 論

3.1 催情散對(duì)奶牛發(fā)情受胎率的影響 劉立山等研究表明牧場(chǎng)奶牛的同期發(fā)情受胎率為60%～80%，然而，隨著同期發(fā)情處理普遍應(yīng)用，部分牧場(chǎng)同期發(fā)情受胎率較為低下。梁小軍等研究表明，部分牧場(chǎng)奶牛產(chǎn)犢間隔為400～410 d，配準(zhǔn)天數(shù)為120～130 d。一般牧場(chǎng)在產(chǎn)后60 d 開(kāi)始同期發(fā)情，照此推算，牧場(chǎng)同期發(fā)情受胎率僅有30%～40%，影響奶牛的繁殖性能和牧場(chǎng)經(jīng)濟(jì)效益。中草藥催情散是中獸藥典的經(jīng)典驗(yàn)方，近年來(lái)，在家畜養(yǎng)殖生產(chǎn)中應(yīng)用比較廣泛，尤其是對(duì)促進(jìn)奶牛發(fā)情具有顯著效果。唐斯嘎等研究表明催情散具有解決母畜乏情、卵巢機(jī)能疾病的作用，用量適宜時(shí)不會(huì)對(duì)家畜造成毒副作用，但用時(shí)較長(zhǎng)，起效慢。

本實(shí)驗(yàn)所用的超微粉催情散在試驗(yàn)前期的效果不如PG 組，但在試驗(yàn)后期高劑量組能顯著提高奶牛的發(fā)情受胎率，結(jié)果與張建各的試驗(yàn)結(jié)果相似。張建各對(duì)比了催情散和激素類(lèi)藥物（PG）作用于奶牛后的發(fā)情效果，結(jié)果顯示催情散組作用于奶牛發(fā)情的時(shí)間明顯長(zhǎng)于PG，但是奶牛的發(fā)情受胎率高于PG（89.6% VS 53.8%）。

3.2 催情散對(duì)奶牛血液激素的影響 動(dòng)物生殖功能是通過(guò)生殖激素的調(diào)控實(shí)現(xiàn)的，在奶牛發(fā)情過(guò)程中生殖活動(dòng)的調(diào)節(jié)主要受FSH、LH、P、E等激素控制。對(duì)正常奶牛來(lái)講，當(dāng)機(jī)體P濃度較低時(shí)高濃度的E可對(duì)下丘腦起正反饋的調(diào)節(jié)，導(dǎo)致下丘腦釋放促性腺激素釋放激素（GnRH），通過(guò)下丘腦-垂體系統(tǒng)作用到垂體，刺激垂體分泌 FSH 和 LH，隨著 LH 濃度的增加產(chǎn)生 LH峰，并在少量 P協(xié)同下使奶牛發(fā)情，促使卵泡排卵。

催情散是傳統(tǒng)的促進(jìn)發(fā)情的中藥方劑，其中肉蓯蓉具有補(bǔ)腎陽(yáng)、益精血作用，具有較強(qiáng)的雌激素作用，促進(jìn)FSH 分泌；方劑中菟絲子、淫羊藿等聯(lián)合應(yīng)用促進(jìn)LH 的分泌，淫羊藿的主要有效成分是淫羊藿苷，常用于治療陽(yáng)痿遺精、偏風(fēng)不遂、小兒雀目等癥；中藥巴戟天具有補(bǔ)腎壯陽(yáng)的作用，被譽(yù)為“補(bǔ)腎壯陽(yáng)之要藥”；《藥性歌訣》中記載：“黃芪入藥，為強(qiáng)壯劑，對(duì)血虛萎黃、浮腫等疾病療效顯著”。藥物聯(lián)合使用能夠使垂體釋放LH 的脈沖頻率和濃度升高，與FSH共同促進(jìn)卵泡分泌雌激素，這也是誘發(fā)排卵的基礎(chǔ)；雌二醇E的增加主要由于方劑中淫羊藿具有小劑量外源雌激素的作用；P下降主要是總黃酮具有外源雌激素的作用，可增加子宮肌對(duì)催產(chǎn)素的敏感性，促進(jìn)子宮收縮，促使前列腺素F2的分泌，起到溶解黃體降低P水平的作用。

劉偉等報(bào)道對(duì)奶牛使用催情散后，奶牛血液激素E、FSH、LH 含量與PG 組相比顯著增加，P含量顯著降低。本研究在試驗(yàn)后期均采用相同的同期發(fā)情處理，沒(méi)有研究生殖激素的變化，試驗(yàn)前期各組牛只血液FSH、LH、P和E含量有增加或降低的趨勢(shì)，個(gè)別時(shí)間點(diǎn)差異顯著，但總體上沒(méi)有取得顯著效果。造成該結(jié)果的原因可能有兩個(gè)方面，一是催情散作為中草藥方，其作用主要在于調(diào)理，功效見(jiàn)效較慢，而本試驗(yàn)?zāi)康氖茄芯看咔樯?duì)同期發(fā)情的調(diào)節(jié)作用，沒(méi)有給催情撒發(fā)揮作用留有足夠的時(shí)間；二是由于采用了超微粉工藝，使用劑量與祁生旺相比劑量較低，因此對(duì)生殖激素的影響沒(méi)有達(dá)到顯著水平。

3.3 超微粉催情散對(duì)奶牛發(fā)情的影響 祁生旺等對(duì)奶牛使用催情散觀察奶牛發(fā)情情況，所用試驗(yàn)劑量630 g 和950 g，對(duì)奶牛發(fā)情效果良好。本實(shí)驗(yàn)所用的催情散使用超微粉工藝，該工藝對(duì)所選用的中藥材進(jìn)行微粉化，從而大大提高中草藥的溶出率和利用率。李德成等研究表明中草藥經(jīng)超微粉碎后，減少劑量仍可獲得原處方的效果，一般可節(jié)省30%～70%的藥材。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，當(dāng)超微粉催情散劑量為500 g 時(shí)對(duì)奶牛同期發(fā)情受胎率的效果顯著高于對(duì)照組，但是對(duì)奶牛生殖激素的影響與對(duì)照組相比無(wú)顯著差異，具體原因有待進(jìn)一步研究。

4 結(jié) 論

本研究結(jié)果表明，試驗(yàn)前期兩劑量組的發(fā)情率與對(duì)照組無(wú)顯著差異，后期高劑量組奶牛同期發(fā)情受胎率顯著提高，說(shuō)明超微粉催情散促進(jìn)發(fā)情效果與PG 相似，但能夠顯著改善奶牛對(duì)同期發(fā)情處理的敏感性，從而提高奶牛的同期發(fā)情受胎率，這在實(shí)踐中具有一定的意義，一方面可以減少化學(xué)激素的用量，另一方面對(duì)恢復(fù)奶牛繁殖機(jī)能有積極的作用。