管潔，戴北飛，何丹，唐磊，姚苗苗

(1.湖南航天醫(yī)院，湖南 長沙 410006；2.邵陽市中醫(yī)醫(yī)院，湖南 邵陽 422000)

乳腺癌發(fā)病率、病死率在女性惡性腫瘤中占第一位，且每年以3%～4%速度不斷增加，對(duì)女性生命健康造成嚴(yán)重威脅。細(xì)胞過度增殖與乳腺癌發(fā)生、進(jìn)展關(guān)系密切，細(xì)胞增殖需大量耗氧，可致細(xì)胞缺氧而產(chǎn)生相關(guān)蛋白，促使細(xì)胞適應(yīng)低氧環(huán)境[1-2]。葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白-1(GLUT-1)屬于內(nèi)源性乏氧標(biāo)記物，其高表達(dá)可使惡性細(xì)胞在乏氧環(huán)境下獲取能量，以快速生長、增殖、轉(zhuǎn)移、侵襲[3]。p53蛋白是重要的腫瘤基因編碼蛋白，可影響細(xì)胞的低分化，參與細(xì)胞錯(cuò)配修復(fù)機(jī)制的形成，在腫瘤的發(fā)生、進(jìn)展中起重要作用[4]。本研究分析了乳腺癌中p53蛋白、GLUT-1表達(dá)水平與臨床病理特征及預(yù)后的關(guān)系，為臨床診治提供新的思路。報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2017年1月—2020年9月行手術(shù)治療的64 例乳腺癌患者的乳腺癌組織標(biāo)本作為乳癌組，取距離癌組織3 cm的癌旁正常組織為癌旁組?；颊吣挲g(57.32±2.46) 歲；病程(3.15±0.21) 年；黏液性囊腺癌2 例，單純癌35 例，硬癌3 例，侵襲性導(dǎo)管癌15 例，髓樣癌2 例，侵襲性小葉癌1 例，乳頭狀癌3 例，腺癌2 例，導(dǎo)管內(nèi)癌1 例。納入標(biāo)準(zhǔn)：經(jīng)病理組織檢查確診為乳腺癌；病歷資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：嚴(yán)重免疫力低下；精神異常；存在血液系統(tǒng)疾??；術(shù)前接受化療、放療或生物免疫治療；合并其他惡性腫瘤。

1.2 方法

連續(xù)切片，每例組織蠟塊均切成4 μm厚度切片(4 塊)，用甲醛溶液固定，石蠟包埋、高溫滅菌、載玻片泡酸、多聚賴氨酸涂片等處理，DAB顯色劑(試劑盒購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司)顯色，復(fù)染(蘇木精)，脫水(乙醇)，透明(二甲苯)，封固(中性樹膠)，用免疫組化法檢測。p53蛋白、GLUT兔多克隆抗體購自美國Epitomics公司。

陽性判斷標(biāo)準(zhǔn)：用上海比目儀器廠的光學(xué)顯微鏡(BMD-300E型)觀察，GLUT-1定位于細(xì)胞膜上，陽性細(xì)胞呈棕黃色顆粒狀，高倍鏡下每個(gè)切片選擇5 個(gè)視野，每個(gè)視野內(nèi)細(xì)胞>200 個(gè)，陽性細(xì)胞≥10%為陽性，反之為陰性。p53蛋白定位于細(xì)胞核上，陽性細(xì)胞呈棕黃色顆粒狀。細(xì)胞著色程度：無色為0 分，黃色為1 分，棕黃色為2 分，棕褐色為3 分。陽性細(xì)胞百分比：陰性為0 分，陽性細(xì)胞<25%為1 分，25%～50%為2 分，>50%～75%為3分，>75%為4分。細(xì)胞著色評(píng)分與陽性細(xì)胞百分比評(píng)分乘積≥3 分即為陽性，反之為陰性。

1.3 觀察指標(biāo)

比較兩組p53蛋白、GLUT-1陽性表達(dá)率；分析p53蛋白、GLUT-1陽性表達(dá)與臨床病理特征、預(yù)后(術(shù)后1 年生存率)關(guān)系，臨床病理特征包含年齡、腫瘤部位、月經(jīng)初潮年紀(jì)、腫瘤直徑、腫瘤-淋巴結(jié)-轉(zhuǎn)移(TNM)分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS21.0系統(tǒng)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。計(jì)數(shù)資料以百分率(%)表示，采用 χ2檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 兩組p53蛋白和GLUT-1陽性表達(dá)率比較

乳癌組p53蛋白、GLUT-1陽性表達(dá)率高于癌旁組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)(見表1)。p53蛋白、GLUT-1在乳腺癌組織和癌旁組織中表達(dá)情況見圖1-4。

表1 p53蛋白和GLUT-1陽性表達(dá)率比較單位：例(%)

圖1 乳腺癌組織p53蛋白陽性表達(dá)(SP×500)

圖2 癌旁組織p53蛋白陰性表達(dá)(SP×500)

圖3 乳腺癌組織GLUT-1陽性表達(dá)(SP×500)

圖4 癌旁組織GLUT-1陰性表達(dá)(SP×500)

2.2 p53蛋白和GLUT-1的表達(dá)與乳腺癌患者臨床病理特征關(guān)系

p53蛋白、GLUT-1陽性表達(dá)與乳腺癌TNM分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；p53蛋白、GLUT-1陽性表達(dá)與乳腺癌年齡、月經(jīng)初潮年紀(jì)、腫瘤直徑、腫瘤部位無關(guān)，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)(見表2)。

表2 p53蛋白和GLUT-1陽性表達(dá)與乳腺癌患者臨床病理特征關(guān)系

2.3 p53蛋白和GLUT-1陽性表達(dá)與乳腺癌預(yù)后的關(guān)系

乳腺癌患者術(shù)后1 年生存率為79.69%(51/64)。p53蛋白陽性表達(dá)者術(shù)后1年生存率為70.00%(28/40)，低于陰性表達(dá)者的95.83%(23/24)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=4.691，P=0.030)；GLUT-1陽性表達(dá)者術(shù)后1年生存率為70.73%(29/41)，低于陰性表達(dá)者的95.65%(22/23)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=4.218，P=0.040)。

3 討 論

乳腺癌的發(fā)生、進(jìn)展與抑癌基因、原癌基因的缺失、失活、突變等基因變化關(guān)系密切，基因水平異常是惡性腫瘤發(fā)生、進(jìn)展的核心因素，基因表達(dá)調(diào)控異?；蚧蛲蛔儠?huì)增加癌細(xì)胞過度擴(kuò)增風(fēng)險(xiǎn)，促使癌細(xì)胞進(jìn)展[5-6]。

GLUT-1是人體葡萄糖跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)的主要載體，主要在胎盤、細(xì)胞膜、血腦屏障中分布，當(dāng)機(jī)體發(fā)生惡性腫瘤時(shí)，無糖酵解增加，細(xì)胞內(nèi)GLUT-1代謝增強(qiáng)，使GLUT-1呈高表達(dá)[7]。p53屬于抑癌基因，其中野生型p53基因能調(diào)控細(xì)胞凋亡、生長，發(fā)揮抑癌作用，當(dāng)轉(zhuǎn)變?yōu)橥蛔冃蚿53后，會(huì)改變原先抑癌作用，誘導(dǎo)異常基因表達(dá)，促使腫瘤發(fā)生、進(jìn)展[8]。本研究結(jié)果顯示，乳癌組p53蛋白、GLUT-1陽性表達(dá)率較癌旁組高；p53蛋白、GLUT-1陽性表達(dá)與乳腺癌TNM分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，且p53蛋白、GLUT-1陽性表達(dá)者術(shù)后1 年生存率均低于陰性表達(dá)者。提示乳腺癌中p53蛋白、GLUT-1呈高表達(dá)，其表達(dá)水平與腫瘤TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和預(yù)后密切相關(guān)。無限增殖是惡性腫瘤的重要特點(diǎn)，DNA復(fù)制期細(xì)胞數(shù)目明顯增加，造成局部微環(huán)境處于嚴(yán)重缺氧狀態(tài)，并可經(jīng)兩條不同途徑共同促使GLUT-1過量表達(dá)。其中一條途徑是氧濃度降低，激活細(xì)胞內(nèi)缺氧誘導(dǎo)因子-1α(HIF-1α)，可結(jié)合GLUT-1增強(qiáng)子上HIF-lα的DNA結(jié)合位點(diǎn)，引起GLUT-1 5′端的增強(qiáng)子序列活化，造成GLUT-1的mRNA過度表達(dá)，并促使其產(chǎn)物大量合成。另一條途徑是缺氧對(duì)線粒體氧化磷酸化形成抑制，可致GLUT-1內(nèi)在活性改變，還可刺激其由細(xì)胞內(nèi)囊泡內(nèi)轉(zhuǎn)移至細(xì)胞膜，增加GLUT-1 mRNA的穩(wěn)定性和刺激GLUT-1基因轉(zhuǎn)錄[9]。p53是GLUT-1的上游調(diào)控因子，能夠通過組織特異性對(duì)GLUT-1基因轉(zhuǎn)錄形成抑制，降低GLUT-1表達(dá)，但當(dāng)p53蛋白出現(xiàn)突變，上述作用則會(huì)喪失。乳腺癌發(fā)生后機(jī)體多伴有p53 DNA結(jié)合區(qū)突變，影響p53抑制GLUT-1基因引物轉(zhuǎn)錄活性，加快葡萄糖代謝，為細(xì)胞腫瘤生長提供能量，促使腫瘤進(jìn)展[10]。

綜上所述，乳腺癌中p53蛋白、GLUT-1呈高表達(dá)，其表達(dá)水平與腫瘤嚴(yán)重程度和預(yù)后密切相關(guān)。