陳江平，徐東婷，李玲，王瑜婷，黎桃敏，張志鵬

廣東一方制藥有限公司，廣東省中藥配方顆粒企業(yè)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣東 佛山 528244

桃核承氣湯出自漢·張仲景的《傷寒論》辨太陽(yáng)病脈證并治太陽(yáng)病證篇，原處方為：桃仁五十個(gè)（去皮尖），大黃四兩，桂枝二兩（去皮），甘草二兩（炙）,芒硝二兩。是2018 年4 月國(guó)家中醫(yī)藥管理局發(fā)布的《古代經(jīng)典名方目錄（第一批）》中100 首經(jīng)典方劑的第一首［1］。該方為臨床常用經(jīng)方之一，具有活血化瘀，通下祛熱的功效，主治瘀熱互結(jié)證，癥見(jiàn)癲狂，腹痛，大便秘結(jié)，神志不清，煩躁失眠，痛經(jīng)等?，F(xiàn)代藥理臨床研究表明，該方在急性盆腔炎、胎盤滯留、附件炎、腸梗阻、子宮內(nèi)膜異位癥、急性腦出血等方面具有良好的治療效果［2］。

目前，有關(guān)桃核承氣湯的研究主要集中在藥理藥效和臨床應(yīng)用報(bào)道，制劑工藝方面的研究較少。由于古今制劑方式的更迭變化和現(xiàn)代市場(chǎng)應(yīng)用的需要，傳統(tǒng)湯劑在服用方式和保存方面存在諸多不便，顆粒劑因其攜帶方便、便于服用的特點(diǎn)而備受消費(fèi)者喜歡。干燥工藝是顆粒劑制備的重要工序，其干燥方式的種類、干燥工藝的溫度、時(shí)間等參數(shù)均會(huì)對(duì)中藥浸膏粉的粉體學(xué)性質(zhì)造成一定程度的影響［3-4］。本研究以浸膏粉的物理指紋圖譜和指標(biāo)成分含量為評(píng)價(jià)指標(biāo)，考察四種干燥方式對(duì)桃核承氣湯浸膏粉質(zhì)量的影響，以期為桃核承氣湯浸膏粉干燥方式的選擇及后續(xù)制劑工藝研究提供參考。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Waters Arc 型高效液相色譜儀（美國(guó)Waters 公司），LYO-0.5 型冷凍干燥機(jī)（上海東富龍科技股份有限公司），B-290 型噴霧干燥儀（瑞士Buchi有限公司），YOD-230 型冷凍干燥箱（美國(guó)Thermo Vanquish 公司），DHG-9146A 型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱，DZF-6050 型真空干燥箱（上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司），Milli-Q Direct 型超純水系統(tǒng)（德國(guó)Merck 公司），ME204E 型萬(wàn)分之一天平、XP26 型百萬(wàn)分之一天平（瑞士METTLER TOLEDO 公司），JZ-7 型粉體振實(shí)密度儀（成都精新粉體測(cè)試設(shè)備有限公司），JL-A3 型粉體特性測(cè)試儀（丹東百特儀器有限公司），SHH-250SD 型穩(wěn)定性試驗(yàn)箱（重慶市永生實(shí)驗(yàn)儀器廠），KQ-500DE 型數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。

1.2 試藥

苦杏仁苷（批號(hào)：110820-201808，純度88.2%），蘆薈大黃素（批號(hào)：110795-202011，純度97.5%），大黃酸（批號(hào)：110757-201607，純度99.3%），大黃素（批號(hào)：110756-201913，純度96.0%），大黃酚（批號(hào)：110796-201922，純度99.4%），大黃素甲醚（批號(hào)：110758-201817，純度99.2%）、肉桂酸（批號(hào)：110786-201604，純度98.8%），甘草酸（批號(hào)：110731-202021，純度96.2%），上述對(duì)照品均購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院。實(shí)驗(yàn)用藥材經(jīng)廣東一方制藥有限公司魏梅主任藥師鑒定為正品，均符合2020年版《中國(guó)藥典》一部的各品種項(xiàng)下要求。

2 方法與結(jié)果

2.1 桃核承氣湯浸膏粉的制備

經(jīng)文獻(xiàn)考證［5］，確定桃核承氣湯的處方劑量為燀桃仁15.0 g、大黃55.2 g、肉桂27.6 g、炙甘草27.6 g、芒硝27.6 g，浸膏的制備方法為：上述5 味，取除芒硝的其余4 味，加水1 400 mL，煎煮至500 mL，除去藥渣，加入芒硝，加熱至沸，再用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓低溫濃縮至相對(duì)密度為1.08～1.12 的浸膏。將桃核承氣湯浸膏均分為4 份，每份約300 g，分別進(jìn)行噴霧干燥（干燥時(shí)間0.5 h）、鼓風(fēng)干燥（干燥時(shí)間24.5 h）、真空干燥（干燥時(shí)間42.5 h）、冷凍干燥（干燥時(shí)間76.0 h），干燥后在相對(duì)濕度為40%以下的環(huán)境中進(jìn)行粉碎，將干浸膏進(jìn)行相同時(shí)間的粉碎并過(guò)80 目篩，得桃核承氣湯浸膏粉。

2.2 桃核承氣湯浸膏粉的物理指紋圖譜研究

根據(jù)桃核承氣湯浸膏粉的粉體學(xué)特性，將其物理指紋圖譜的一級(jí)指標(biāo)劃分為均一性、堆積性、流動(dòng)性、可壓性和穩(wěn)定性5 個(gè)方面，二級(jí)指標(biāo)的測(cè)定首選法定標(biāo)準(zhǔn)收載的方法［6］。

2.2.1 物理指紋圖譜的指標(biāo)轉(zhuǎn)化采用松密度（Da）、振實(shí)密度（Dc）、含水量（HR）、吸濕率（H）、豪斯納比（IH）、休止角（α）、顆粒間孔隙率（Ie）、卡爾指數(shù)（IC）、相對(duì)均齊度指數(shù)（Iθ）共9 個(gè)測(cè)量值作為桃核承氣湯浸膏粉物理指紋圖譜的二級(jí)指標(biāo)，并對(duì)其進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化處理。各物理屬性指標(biāo)的標(biāo)準(zhǔn)轉(zhuǎn)化方法及可能數(shù)值范圍參考相關(guān)文獻(xiàn)［6-9］，見(jiàn)表1。

表1 桃核承氣湯浸膏粉的物理指紋圖譜研究二級(jí)指標(biāo)數(shù)值范圍及標(biāo)準(zhǔn)化轉(zhuǎn)換公式

2.2.2 物理指紋圖譜的構(gòu)建取四種桃核承氣湯浸膏粉適量，測(cè)定并轉(zhuǎn)化浸膏粉的二級(jí)指標(biāo)參數(shù)，結(jié)果見(jiàn)表2。以四種浸膏粉的9 個(gè)標(biāo)準(zhǔn)化參數(shù)值為半徑，采用Origin 9 軟件，繪制四種桃核承氣湯浸膏粉雷達(dá)圖，如圖1。

表2 桃核承氣湯浸膏粉物理指紋圖譜相關(guān)指標(biāo)值

圖1 四種桃核承氣湯浸膏粉物理指紋圖譜雷達(dá)圖

2.2.3 相似度分析以對(duì)照物理指紋圖譜為參照，采用SPSS 20.0 軟件的Pearson 相關(guān)系數(shù)法，分別比較四種桃核承氣湯浸膏粉物理指紋圖譜的相似度。結(jié)果表明，冷凍干燥粉、噴霧干燥粉、鼓風(fēng)干燥粉、真空干燥粉的物理指紋圖譜相似度分別為0.872、0.878、0.806、0.795，冷凍干燥粉和噴霧干燥粉的物理指紋圖譜相似度接近，表明其粉體學(xué)性質(zhì)較為一致；而鼓風(fēng)干燥粉和真空干燥粉的相似度低于0.85，表明鼓風(fēng)干燥和真空干燥對(duì)桃核承氣湯浸膏粉粉體性質(zhì)影響較大，其粉體學(xué)性質(zhì)存在較大的差異。

2.2.4 聚類分析采用SPSS 20.0 軟件，以四種桃核承氣湯浸膏粉物理指紋圖譜的表征指標(biāo)（9 個(gè)二級(jí)指標(biāo)轉(zhuǎn)化值）為變量，對(duì)其進(jìn)行分類和判別，樹狀圖如圖2。結(jié)果表明，噴霧干燥粉與冷凍干燥粉聚為I 類，真空干燥粉與鼓風(fēng)干燥粉聚為Ⅱ類，與相似度結(jié)果一致。

圖2 四種干燥法制作的桃核承氣湯浸膏粉物理指紋圖譜聚類分析（CA）樹狀圖

2.2.5 主成分分析采用SPSS 20.0 軟件對(duì)四種桃核承氣湯浸膏粉物理指紋圖譜的9 個(gè)二級(jí)指標(biāo)轉(zhuǎn)化值進(jìn)行因子分析，主成分分析特征值與貢獻(xiàn)率結(jié)果見(jiàn)表3，主成分因子載荷矩陣如圖3。由表3 可知，前2 個(gè)主成分累計(jì)貢獻(xiàn)率為93.745%，所提取的2 個(gè)主成分基本反映全部指標(biāo)的信息。由圖3 可知，主成分1 中載荷較高的為Da、Dc、HR、H、α，歸納為綜合參數(shù)，主成分2 中載荷較高的為Iθ、IC、IH、Ie，歸納為形態(tài)參數(shù)。

表3 四種桃核承氣湯浸膏粉物理指紋圖譜的PCA特征值與貢獻(xiàn)率

圖3 四種桃核承氣湯浸膏粉物理指紋圖譜的主成分因子載荷矩陣圖

2.2.6 壓縮成型性分析根據(jù)四種桃核承氣湯浸膏粉物理指紋圖譜的9 個(gè)二級(jí)指標(biāo)和5 個(gè)一級(jí)指標(biāo)參數(shù)，求算出參數(shù)輪廓指數(shù)（index of parametric profile，IPP），參數(shù)指數(shù)（index of parameter，IP）和良好可壓性指數(shù)（index of good compression，IGC），評(píng)價(jià)粉末的可壓縮性并判斷其是否適合直接壓片［10］，結(jié)果見(jiàn)表4。由表4 可知，四種浸膏粉的堆積性、穩(wěn)定性、可壓性和均一性差異較大，流動(dòng)性差異較小。當(dāng)一級(jí)指標(biāo)＞5 時(shí)，可認(rèn)為具有良好的該性能。噴霧干燥粉具有良好的可壓性和均一性，真空干燥粉和鼓風(fēng)干燥粉有優(yōu)越的堆積性。當(dāng)IP＞0.5，IPP和IGC ≥5 時(shí)，粉體具有較好的壓縮成型性；當(dāng)IP＜0.5，IPP 和IGC 在3～5 時(shí)，粉體壓縮成型性較差［11］。結(jié)果表明，四種浸膏粉的壓縮成型性存在差異，冷凍干燥粉和真空干燥粉的IP＜0.5，IPP 和IGC 均＜5，鼓風(fēng)干燥粉的IP＜0.5，壓縮成型性較差；噴霧干燥粉的IP＞0.5，IPP 和IGC 均大于5，具有良好的壓縮成型性，可用于直接壓縮。

表4 四種桃核承氣湯浸膏粉可壓縮成型性分析結(jié)果

2.3 桃核承氣湯浸膏粉的指標(biāo)成分含量測(cè)定

2.3.1 色譜條件［12］色譜柱：ZORBAX SB-C18 柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：乙腈（A）-0.1%磷酸溶液（B），梯度洗脫（0～15 min，10% A；15～30 min，10%～20% A；30～55 min，20%～50%A；55～70 min，50% A；70～85 min，50%～80% A；85～90 min，80%～100%A；90～95 min，100% A）；檢測(cè)波長(zhǎng)：210 nm（0～30 min，苦杏仁苷），290 nm（30.01～50 min，肉桂酸），250 nm（50.01～95 min，甘草酸、蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚）；柱溫：30 ℃；流速：1.0 mL/min；進(jìn)樣量：10 μL。

2.3.2 對(duì)照品溶液的制備分別取苦杏仁苷、肉桂酸、甘草酸、蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚對(duì)照品適量，精密稱定，置25 mL 量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，制成混合對(duì)照品溶液，備用。

2.3.3 供試品溶液的制備取桃核承氣湯浸膏粉約0.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25 mL，稱定重量，超聲處理（功率300 W，頻率50 kHz）30 min，取出，放冷，稱重，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.3.4 專屬性試驗(yàn)分別精密吸取空白溶劑、混合對(duì)照品溶液及供試品溶液適量，按“2.3.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖，如圖4。供試品溶液色譜圖分離度良好，與混合對(duì)照品溶液色譜圖相比，在相應(yīng)保留時(shí)間處有相應(yīng)色譜峰，且空白溶劑無(wú)干擾，表明該方法專屬性良好。

圖4 專屬性試驗(yàn)HPLC色譜圖：A.空白溶劑；B.混合對(duì)照品溶液；C.供試品溶液

2.3.5 線性關(guān)系試驗(yàn)分別精密吸取“2.3.2”項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液，加甲醇稀釋制成系列濃度的混合對(duì)照品溶液，按“2.3.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定。以進(jìn)樣濃度（X）為橫坐標(biāo)，以峰面積（Y）為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，計(jì)算回歸方程和相關(guān)系數(shù)，結(jié)果表明各成分在一定范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，見(jiàn)表5。

表5 線性關(guān)系試驗(yàn)結(jié)果 μg/mL

2.3.6 精密度試驗(yàn)精密吸取“2.3.2”項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液適量，按“2.3.1”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6 次，記錄色譜圖，計(jì)算各色譜峰峰面積的RSD。結(jié)果各色譜峰峰面積的RSD 均小于3%，表明儀器精密度良好。

2.3.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)取桃核承氣湯噴霧干燥粉適量，按“2.3.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，分別于制備后0、2、4、6、8、12、24 h，按“2.3.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖，計(jì)算各色譜峰峰面積的RSD。結(jié)果各色譜峰峰面積的RSD 均小于3%，表明供試品溶液在24 h 內(nèi)穩(wěn)定性較好。

2.3.8 重復(fù)性試驗(yàn)取桃核承氣湯噴霧干燥粉適量，按“2.3.3”項(xiàng)下方法平行制備6 份供試品溶液，按“2.3.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖，計(jì)算各指標(biāo)成分含量的RSD，結(jié)果各色譜峰峰面積的RSD 均小于3%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.3.9 加樣回收率試驗(yàn)取已知含量的桃核承氣湯噴霧干燥粉適量，精密稱取9 份，每份約0.25 g，分為3 組，每組分別加入低、中、高3 個(gè)濃度的混合對(duì)照品溶液，按“2.3.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.3.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算得到各色譜峰的平均加樣回收率分別為102.07%、98.47%、102.79%、98.70%、99.65%、98.83%、100.75%、101.11%，RSD 均小于3%，表明該方法準(zhǔn)確性良好。

2.3.10 浸膏粉樣品含量測(cè)定分別取四種桃核承氣湯浸膏粉樣品適量，按“2.3.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.3.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，各指標(biāo)成分的含量測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表6。結(jié)果表明，各指標(biāo)成分含量的RSD 均小于4.0%，說(shuō)明四種桃核承氣湯浸膏粉的指標(biāo)成分含量差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，不同干燥方式對(duì)桃核承氣湯浸膏粉指標(biāo)成分含量無(wú)顯著影響。

表6 四種桃核承氣湯浸膏粉的指標(biāo)成分含量測(cè)定結(jié)果（n=3）

3 討論

桃核承氣湯由5 味中藥組成，根據(jù)中藥君、臣、佐、使的配伍原則，優(yōu)先選擇方中君藥（燀桃仁、大黃），臣藥（肉桂），佐藥（炙甘草）的指標(biāo)成分作為工藝評(píng)價(jià)指標(biāo)［13］。本研究以2020 年版《中國(guó)藥典》一部各品種項(xiàng)下的含量測(cè)定指標(biāo)為依據(jù)，首選含量高、性質(zhì)穩(wěn)定且易于檢測(cè)的物質(zhì)作為定量成分，同時(shí)兼顧各檢測(cè)波長(zhǎng)下的色譜峰形狀及保留時(shí)間，確定合適的定量物質(zhì)?，F(xiàn)代研究表明，苦杏仁苷來(lái)源于燀桃仁，具有抗動(dòng)脈粥樣硬化、抗肺纖維化、抗腫瘤、免疫調(diào)節(jié)等廣泛的藥理作用［14］。蒽醌類成分來(lái)源于大黃，具有抗炎、抗腫瘤、保護(hù)心血管等生物活性，是桃核承氣湯發(fā)揮瀉下作用的主要成分［15］。甘草酸類成分來(lái)源于甘草，具有抗腫瘤、抗癌、免疫調(diào)節(jié)等作用［16］。肉桂酸來(lái)源于肉桂，具有抑制人肝癌細(xì)胞的增殖，并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的作用［17］。因此，選擇苦杏仁苷、蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚、甘草酸、肉桂酸含量作為桃核承氣湯浸膏粉的質(zhì)量評(píng)價(jià)指標(biāo)。

本研究通過(guò)測(cè)定桃核承氣湯浸膏粉的物理指紋圖譜和指標(biāo)成分含量，可以對(duì)浸膏粉的質(zhì)量屬性進(jìn)行綜合表征，從而加深對(duì)制劑過(guò)程的理解。噴霧干燥粉及冷凍干燥粉的流動(dòng)性、可壓性明顯優(yōu)于其余兩種干燥方式，可有效提高干法制粒或壓片過(guò)程的效率。噴霧干燥具有較好的壓縮成型性，與其粉末顆粒均一性較好密切相關(guān)。四種浸膏粉的指標(biāo)成分含量差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說(shuō)明浸膏粉的主要化學(xué)成分基本一致。綜合考慮桃核承氣湯浸膏粉的質(zhì)量和生產(chǎn)效率，認(rèn)為噴霧干燥更適用于桃核承氣湯浸膏粉的產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)。

古代經(jīng)典名方是歷代醫(yī)家在大量臨床實(shí)踐中形成的中醫(yī)藥精華，國(guó)家近年來(lái)高度重視并出臺(tái)了系列政策法規(guī)指導(dǎo)研發(fā)，其研發(fā)是目前中醫(yī)藥行業(yè)的熱點(diǎn)，也是中藥產(chǎn)業(yè)發(fā)展的新機(jī)遇。本研究比較了四種干燥方式對(duì)桃核承氣湯浸膏粉質(zhì)量的影響，對(duì)桃核承氣湯的制劑開(kāi)發(fā)具有指導(dǎo)意義，也可為其他復(fù)方制劑干燥工藝的評(píng)價(jià)及選擇提供了參考。