王 強，羅涵云，徐述雄，王曉東，王元林

膀胱癌是惡性腫瘤，發(fā)病率、轉(zhuǎn)移率及復發(fā)率均較高，其發(fā)病率與環(huán)境和遺傳因素有關，近年來呈增長趨勢[1-4]。惡性腫瘤可分為淺表性與浸潤性2種[5]。浸潤性膀胱癌患者會出現(xiàn)血尿、尿頻、尿急、尿痛及排尿困難癥狀，出現(xiàn)此類情況提示腫瘤沿肌層生長，惡性程度較高[6]。有關資料顯示，脂肪型脂肪酸結(jié)合蛋白(A-FABP)作為細胞內(nèi)低分子量蛋白質(zhì)，存在于各種正常組織和細胞中，在脂肪酸代謝中起重要作用[7]；尿核基質(zhì)蛋白22(NMP22)為膀胱腫瘤標志物，是存在于尿液中的大分子核基質(zhì)蛋白[8-9]；在調(diào)節(jié)機體免疫及細胞增殖等方面酪氨酸蛋白激酶2(Pyk2)同樣不可忽視[10]。鑒于此，本研究探討A-FABP、NMP22聯(lián)合Pyk2檢測診斷肌層浸潤性膀胱癌的臨床價值。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取本院2017年2月—2020年5月收治的124例肌層浸潤性膀胱癌。納入標準：符合肌層浸潤性膀胱癌診斷標準[11]；患者或家屬簽署知情同意書；臨床資料完整。排除標準：合并其他惡性腫瘤；其他疾病放化療者；妊娠期患者。124例中男99例，女25例；年齡22～77(50.14±11.69)歲；腫瘤分期：T1期31例，T2期38例，T3期55例；分化程度：高分化32例，中分化38例，低分化54例。

1.2研究方法 取124例膀胱癌組織和距離膀胱癌病灶3 cm處正常組織。標本進行固定、脫水、包埋處理后加入抗人Pyk2、A-FABP、NMP22單克隆抗體24 h后采用SP免疫組織化學法檢測Pyk2、A-FABP、NMP22水平，試劑盒購于上海艾博抗公司。A-FABP陽性為細胞呈棕黃色，陽性分為3級：弱陽性為陽性細胞數(shù)<10%，顯色為淡黃色或個別細胞呈黃色至棕黃色；強陽性為陽性細胞>60%，多數(shù)細胞呈黃色至棕黃色；中等陽性為陽性細胞數(shù)及顯色界于弱陽性與強陽性之間[12]。凡顯色強度與背景無明顯差別者為陰性。Pyk2陽性率判斷標準：顯微鏡下出現(xiàn)棕黃色或棕褐色顆粒狀物質(zhì)即為陽性。NMP22陽性為顯微鏡下細胞呈黃色或褐色，陽性表達分為Ⅲ～Ⅴ級，Ⅲ級為有可疑腫瘤細胞，Ⅳ級為有腫瘤細胞，Ⅴ級為有形態(tài)典型的腫瘤細胞；陰性為顯微鏡下細胞顯色度與背景無差異，分為Ⅰ～Ⅱ級，Ⅰ級為正常細胞，Ⅱ級為有非典型細胞。

1.3觀察指標 ①比較癌組織和癌旁正常組織Pyk2、A-FABP、NMP22表達情況。②比較肌層浸潤性膀胱癌患者Pyk2、A-FABP、NMP22陽性表達與臨床病理特征的關系。③Pyk2、A-FABP、NMP22聯(lián)合檢測對肌層浸潤性膀胱癌的診斷價值。

1.4統(tǒng)計學方法 應用SPSS 22.0軟件分析數(shù)據(jù)。計數(shù)資料以率(%)表示，比較采用χ2檢驗；采用受試者工作特征(ROC)曲線評估診斷價值。α=0.05為檢驗水準。

2 結(jié)果

2.1癌組織和癌旁正常組織Pyk2、A-FABP、NMP22表達比較 癌組織Pyk2、A-FABP、NMP22陽性表達率均高于癌旁正常組織(P<0.01)，見表1。

表1 癌組織和癌旁正常組織Pyk2、A-FABP、NMP22表達比較[例(%)]

2.2Pyk2、A-FABP、NMP22陽性表達與臨床病理特征的關系 Pyk2、A-FABP、NMP22陽性率病理分期Ⅲ期患者明顯高于Ⅰ期、Ⅱ期患者，低分化患者明顯高于中分化及高分化患者(P<0.01)。見表2。

表2 Pyk2、A-FABP、NMP22陽性表達與臨床病理特征的關系(例)

2.3Pyk2、A-FABP、NMP22單獨及聯(lián)合檢測對肌層浸潤性膀胱癌的診斷價值 ROC曲線分析顯示，Pyk2、A-FABP、NMP22三者聯(lián)合診斷肌層浸潤性膀胱癌的曲線下面積(AUC)為0.914，敏感度、特異度分別為0.855、0.912，顯著高于各指標單一檢測，見表3及圖1。

表3 Pyk2、A-FABP、NMP22單獨及聯(lián)合檢測對肌層浸潤性膀胱癌的診斷價值分析

圖1 Pyk2、A-FABP、NMP22聯(lián)合檢測診斷肌層浸潤性膀胱癌的ROC曲線

3 討論

肌層浸潤性膀胱癌屬于泌尿系惡性腫瘤，及時診斷有助于采取有效措施，對患者預后具有重大意義[13-18]。臨床采用腹部膀胱彩超、靜脈尿路造影或膀胱鏡檢查等方法診斷膀胱癌[19-20]。但腹部膀胱彩超對于診斷早期膀胱癌存在一定弊端，靜脈尿路造影有造影劑不良反應的擔憂，膀胱鏡檢查有創(chuàng)，可能會出現(xiàn)二次感染的情況[21-24]。故選取更安全、診斷率更高的檢測方法對診斷本病具有重要價值。

賀金標等[25]認為A-FABP、NMP22、Pyk2聯(lián)合檢測具有敏感度高、無創(chuàng)傷等優(yōu)點，可作為診斷膀胱癌和術后監(jiān)測的有效指標。A-FABP表達水平與膀胱癌的進展密切相關，對于遠期干預和預測預后具有重要作用，其可抑制腫瘤細胞生長，促進腫瘤細胞凋亡[26-28]。本研究發(fā)現(xiàn)，肌層浸潤性膀胱癌患者癌組織A-FABP、NMP22、Pyk2表達顯著高于癌旁正常組織，說明三者對膀胱癌患者的診斷具有重要意義，提示A-FABP、NMP22、Pyk2可以作為評價肌層浸潤性膀胱癌患者臨床效果的重要指標。

進一步分析顯示，A-FABP、NMP22、Pyk2表達與肌層浸潤性膀胱癌患者性別、年齡、病灶數(shù)無關，病理分期Ⅲ期、低分化患者A-FABP、NMP22、Pyk2陽性率明顯升高，表明3種蛋白可能參與了本病的分化及轉(zhuǎn)移過程。ROC曲線分析結(jié)果表明，A-FABP、NMP22、Pyk2單一檢測診斷肌層浸潤性膀胱癌有一定價值，但敏感度不高，三者聯(lián)合檢測診斷肌層浸潤性膀胱癌AUC為0.914，敏感度為0.855，提示3項蛋白聯(lián)合檢測可成為臨床診斷肌層浸潤性膀胱癌的新指標。

綜上，A-FABP、NMP22聯(lián)合Pyk2檢測可提高肌層浸潤性膀胱癌的診斷率。