齊超 岑順鋮 張鈞

炎癥是機體面對刺激時的一種防御反應(yīng)，臨床若不能及時、正確診斷及治療膿毒癥、膿毒癥休克等感染性疾病，則會危及患者生命。微生物培養(yǎng)作為感染診斷的金標準，其耗時長，不利于早期診治。因此，精準、快速的檢驗指標對感染的及時診治至關(guān)重要。

流式細胞儀檢測白細胞前向散射光（forword scatter area，F(xiàn)SC-A）能反映生理狀態(tài)下白細胞的體積大小，該參數(shù)的變異度（FSC-A %CV）則能反映白細胞體積大小變異度，即體積大小的異質(zhì)性與離散趨勢，比血涂片上白細胞形態(tài)大小不均的觀察更客觀、準確[1,2]。本次研究基于流式細胞儀，通過比較感染組和對照組患者外周血三群白細胞（中性粒細胞、淋巴細胞、單核細胞）FSC-A %CV 之間的差異以及與外周血C 反應(yīng)蛋白（C-reactive protein，CRP）和降鈣素原（procaicitonin，PCT）之間的相關(guān)性，旨在探究外周血白細胞FSC-A %CV 能否作為一種潛在的感染篩查及診斷指標，以期為臨床診治感染性疾病提供更多的循證依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2022 年1 月至2022 年4 月浙江大學醫(yī)學院附屬邵逸夫醫(yī)院收治的感染患者60 例作為感染組，其中男性36 例、女性24 例；平均年齡（61.18±21.61）歲；其中呼吸系統(tǒng)感染26 例、泌尿系統(tǒng)感染21 例、消化系統(tǒng)感染3 例、其他部位感染10 例；細菌感染53 例、真菌感染7 例。同期正常體檢患者50 例作為對照組，其中男性21 例、女性29 例；年齡（55.88±16.19）歲。納入標準為：①患者臨床資料完整（基本資料、主訴、既往史、現(xiàn)病史、相關(guān)輔助檢查、臨床診斷等）；②感染組患者臨床上明確感染存在，微生物培養(yǎng)結(jié)果明確致病菌種類；③對照組患者無發(fā)熱，炎癥指標均在正常參考范圍內(nèi)（CRP、血常規(guī)、血沉等）。排除標準為：①感染組樣本采集前患者已進行抗感染治療；②對照組1 個月內(nèi)出現(xiàn)過感染和/或進行抗感染治療；③患有血液系統(tǒng)疾病和器質(zhì)性疾病。本次研究通過本院倫理委員會審批。兩組性別、年齡比較，差異均無統(tǒng)計學意義（P均＞0.05）。

1.2 方法 采集EDTA 抗凝全血標本1 ml，采用鼠抗人CD45 單克隆抗體（由BD 快速診斷產(chǎn)品蘇州有限公司生產(chǎn)）10 μl 標記EDTA-K2 抗凝全血標本100 μl 中的三群白細胞（中性粒細胞、淋巴細胞、單核細胞），振蕩混勻，避光靜置15 min。加入1 ml 紅細胞裂解液振蕩混勻后避光靜置5 min，2000 r/min離心3 min，棄上清液，加入1 ml 磷酸鹽緩沖液洗滌，2000 r/min 離心3 min，棄上清液。加入300 μl磷酸鹽緩沖液，振蕩數(shù)秒，使白細胞充分重懸。采用FACSCanto Ⅱ流式細胞儀（由美國BD公司生產(chǎn)）檢測上述重懸標本，采用CD45 和側(cè)向散射光進行設(shè)門，分別得到三群白細胞（中性粒細胞、淋巴細胞和單核細胞）的FSC-A %CV。

1.3 觀察指標 ①比較感染組與對照組患者三群白細胞FSC-A %CV 數(shù)據(jù)。②觀察分析感染組患者三群白細胞FSC-A %CV 與其外周血炎癥指標之間的相關(guān)性。③剔除感染組中真菌感染患者，觀察分析細菌感染患者三群白細胞FSC-A %CV 與其外周血炎癥指標CRP、PCT 之間的相關(guān)性。

1.4 統(tǒng)計學方法 采用SPSS 25.0 軟件進行統(tǒng)計分析。滿足正態(tài)性分布的計量資料用均數(shù)±標準差（）表示，組間比較采用獨立樣本t檢驗。相關(guān)性分析采用Pearson相關(guān)。設(shè)P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者三群白細胞FSC-A %CV比較見表1

表1 兩組患者三群白細胞FSC-A %CV比較

由表1 可見，感染組患者三群白細胞FSC-A %CV 較對照組明顯增大，差異均有統(tǒng)計學意義（t分別=8.58、11.66、10.60，P均＜0.05）。

2.2 感染組患者三群白細胞FSC-A %CV 與炎癥指標相關(guān)性分析 感染組患者淋巴細胞FSC-A %CV與PCT 之間呈正相關(guān)性（r=0.29，P＜0.05），與CRP之間無顯著相關(guān)性（r=0.07，P＞0.05）。中性粒細胞FSC-A %CV、單核細胞FSC-A %CV 與PCT、CRP 之間無顯著相關(guān)性（r分別=0.16、0.03；0.18、0.21，P均＞0.05）。

2.3 剔除真菌感染患者后，感染組中53 例細菌感染患者淋巴細胞FSC-A %CV 與外周血炎癥指標相關(guān)性分析 細菌感染患者淋巴細胞FSC-A %CV 與PCT 之間存在相關(guān)性（r=0.32，P＜0.05），且相關(guān)性較未剔除真菌感染患者時有所增強，與CRP 之間無顯著相關(guān)性（r=0.04，P＞0.05）。中性粒細胞FSC-A %CV、單核細胞FSC-A %CV 與PCT、CRP 之間仍無顯著相關(guān)性（r分別=0.18、0.02；0.17、0.24，P均＞0.05）。

3 討論

目前，臨床上診斷感染的金標準為病原微生物培養(yǎng)，該方法存在耗時長、漏檢率高的弊端，并且可能延誤最佳診治時間[3]。外周血白細胞總數(shù)、三群白細胞比例是感染性疾病診治中的經(jīng)典指標[4]。血常規(guī)作為評估上述指標的檢測項目，其特異性和敏感度不足，易受疾病、應(yīng)激、機體免疫等多種非感染性因素影響而存在漏診[5]，并且需要人工對血涂片進行顯微鏡鏡檢來判斷感染造成的白細胞形態(tài)學改變，耗時且存在主觀差異和偏倚[6]。CRP、PCT 等炎癥指標的檢測需要血清標本，并且當濃度大于儀器檢測的線性范圍時需稀釋后復測，耗時且耗成本，在一定程度上影響急診和危重癥患者的診療。感染性疾病的早期診治可以有效控制病情的進展、降低重癥感染及抗菌藥物耐藥性的發(fā)生[7]。因此，早期感染篩查指標的研究顯得尤為重要。

有研究發(fā)現(xiàn)外周血單核細胞分布寬度與白細胞相結(jié)合在一定程度上能提高膿毒癥的早期診斷，使單核細胞分布寬度成為診斷急診患者膿毒癥的新指標[8，9]。目前，暫無中性粒細胞、淋巴細胞和單核細胞分布寬度與炎癥指標相關(guān)性的研究報道，并且臨床上各類全自動血細胞分析儀也沒有配置中性粒細胞及淋巴細胞分布寬度相關(guān)的參數(shù)指標。FSC-A %CV 作為一種能反映白細胞體積大小異質(zhì)性的流式細胞參數(shù)，與白細胞分布寬度具有相似的意義。本次研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)機體在感染狀態(tài)下，外周血三群白細胞的FSC-A %CV 較正常生理狀態(tài)下增大，表明該參數(shù)可以避免人工顯微鏡鏡檢判讀的主觀差異和偏倚，為臨床提供一個客觀、可量化的感染早期篩查指標，也在一定程度上彌補了目前臨床上血細胞分析儀在這方面參數(shù)空缺的問題。

機體在正常狀態(tài)下，PCT 主要由甲狀腺C 細胞分泌，其血清濃度僅為0.5 μg/L，無激素活性。在自身免疫性疾病、病毒感染、腫瘤等情況下，外周血PCT 不升高或輕度升高。在細菌感染狀態(tài)下，外周血單個核細胞在內(nèi)毒素、腫瘤壞死因子α、白細胞介素6 等因子作用下分泌異位PCT，導致其血清濃度顯著升高[10]。本次研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)機體在感染狀態(tài)下，淋巴細胞FSC-A %CV 與血清PCT 水平之間存在相關(guān)性（P＜0.05），并且在細菌感染時兩者之間的相關(guān)性增強，提示淋巴細胞在炎癥的刺激下形態(tài)和體積發(fā)生改變，但其體積大小變異度與PCT 之間相關(guān)性的具體機制暫無研究報道。

綜上所述，外周血白細胞FSC-A %CV 值具有預測感染存在的價值，并且淋巴細胞FSC-A %CV值與PCT 具有相關(guān)性，對臨床上感染的診治起到輔助作用。本次研究感染組中真菌感染患者例數(shù)較少，在后續(xù)研究中需擴大樣本量，根據(jù)致病菌種類及抗感染治療，將感染組進一步分組，探究機體在不同感染類型和抗感染治療前后外周血三群白細胞FSC-A %CV與炎癥指標的關(guān)系及潛在的機制。