郝立群

(吉林省腫瘤醫(yī)院，吉林 長春 130000)

食管癌病理分型90%以上為鱗癌，具有較高的病死率，嚴重危害人們生命健康及影響患者生存質量〔1,2〕。食管癌患者主要采用根治性切除術治療，但5年總體生存率仍較低〔3〕。目前，隨著分子生物學研究已發(fā)現(xiàn)食管癌發(fā)生、發(fā)展中大量異常出現(xiàn)的分子事件，但關于食管癌早期診斷及預后判斷分子標志物仍有限〔4,5〕。因此，早期診斷食管癌及預后判斷分子標志物更深入研究有重要意義。腫瘤相關長鏈非編碼RNA(CARLo)-5是新發(fā)現(xiàn)的一種具有2 628個堿基對長度的lncRNA，發(fā)現(xiàn)其在多種癌癥中異常表達〔6〕。目前臨床上關于CARLo-5與食管癌尚無報道，缺乏可靠的臨床依據(jù)。本文探討老年食管癌組織CARLo-5表達意義及預后價值。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取吉林省腫瘤醫(yī)院2018年1月至2021年1月手術切除的老年食管癌組織和癌旁正常組織(距離癌組織≥5 cm)97例，男54例，女43例；年齡65～83〔平均(74.87±6.56)〕歲；體重指數(shù)17～29〔平均(23.24±2.17)〕kg/m2。納入標準：①經(jīng)病理學證實為食管癌；②年齡≥65歲；③具有完整的臨床資料和隨訪資料。排除標準：①合并其他部位惡性腫瘤；②合并嚴重基礎疾?。虎壑匾K器嚴重異常者。

1.2主要試劑與儀器 主要試劑：Trizol試劑(由美國Invitrogen公司提供)，反轉錄試劑盒(由美國Thermo公司提供)。主要儀器：微量分光光度計(由美國賽默飛公司提供)，聚合酶鏈反應(PCR)儀(由美國ABI公司提供)，高速低溫離心機(由德國Heraeus公司提供)。

1.3CARLo-5表達測定 采用實時熒光定量PCR(qRT-PCR)，取癌組織及癌旁組織各50 mg，按照Trizol法提取組織RNA，采用微量分光光度計鑒定RNA濃度及純度。以RNA為模板反轉錄為cDNA，再行qRT-PCR。反應體系：1 μl的模板cDNA，5 μl的2×SYBR Green Mix，0.2 μl的ROX Ⅱ，0.5 μl的上游引物，0.5 μl的下游引物，2.6 μl的無RNA酶水。反應條件：采用94℃預變性4 min，采用94℃變性30 s，采用60℃退火34 s，采用72℃延伸34 s，共40個循環(huán)。結果采用2-△△Ct法表示，每個樣本重復3次。引物序列為CARLo-5上游引物：5′-GCCACAAATCAACAACAACAACAACAA-3′、下游：5′-AGAGTGATGCCAAGGCTGTTATTGTGAA-3′；GAPDH上游：5′-CGGATTTGGTCGTATTGGG-3′、下游：5′-TGCTGGAAGATGGTGATGGGATT-3′。

1.4預后評價 記錄患者總生存期(OS)，OS指從診斷日起至任何原因的死亡或隨訪末。所有食管癌患者隨訪至2021年10月，主要采取門診復診、電話、微信、上門隨訪等多種方式隨訪。

1.5統(tǒng)計學方法 采用統(tǒng)計學軟件SPSS25.0，計量資料采用t檢驗，多組計量資料采用方差分析，計數(shù)資料采用χ2檢驗。生存分析采用Kaplan-Meier法，組間生存情況比較采用Log-rank檢驗。采用Logistic回歸分析影響食管癌預后獨立危險因素。

2 結 果

2.1癌組織與癌旁組織CARLo-5 mRNA表達比較 癌組織CARLo-5 mRNA表達(2.73±0.46)顯著高于癌旁組織(1.00±0.02；t=37.005，P<0.05)。

2.2不同病理特征CARLo-5 mRNA表達比較 不同性別、年齡、體重指數(shù)和腫瘤直徑CARLo-5 mRNA表達無明顯差異(P>0.05)；臨床分期Ⅲ～Ⅳ期CARLo-5 mRNA表達顯著高于Ⅰ～Ⅱ期(P<0.05)；淋巴結轉移CARLo-5 mRNA表達顯著高于無淋巴結轉移(P<0.05)。見表1。

2.3CARLo-5 mRNA表達與預后關系 隨訪9～75(平均36)個月。以CARLo-5 mRNA表達2.73為界，分為低表達(n=51)和高表達(n=46)。CARLo-5高表達OS(27個月)短于CARLo-5低表達(43個月)。見圖1。

表1 不同病理特征食管癌患者 CARLo-5 mRNA表達比較

圖1 CARLo-5 mRNA表達與食管癌患者預后關系

2.4采用多因素Logistic回歸分析影響食管癌預后獨立危險因素 臨床分期Ⅲ～Ⅳ期、淋巴結轉移和CARLo-5高表達為影響食管癌預后獨立危險因素。見表2。

表2 采用多因素Logistic回歸分析影響食管癌患者預后獨立危險因素

3 討 論

食管癌是世界上第八大常見的一種惡性腫瘤，而其中我國是發(fā)病率較高的一個地區(qū)〔7〕。 食管癌早期癥狀不明顯，大部分食管癌就診時已屬中晚期而錯失了最佳根治時機〔8,9〕。食管癌目前仍以手術治療為主，雖近年來治療技術日臻成熟，但調(diào)查顯示5年生存率仍較低〔10,11〕。隨著研究的深入，雖對食管癌的形成及進展機制有部分研究，但現(xiàn)有知識仍存在諸多不足，且單單遺傳因素無法解釋其發(fā)生緣由。大量研究證實，表觀遺傳學在癌癥發(fā)生發(fā)展中具有關鍵作用〔12〕。故而，探究食管癌發(fā)生、發(fā)展機制及其表觀遺傳學及尋找食管癌早期高特異性和靈敏性診斷及治療靶點，為提高食管癌患者生存率及降低食管癌發(fā)病率奠定基礎〔13〕。

Lnc-RNA是長度為200 nt的一類非編碼RNA，大部分有多聚腺苷酸尾結構，由于缺乏明顯的開放閱讀框架而無蛋白質編碼的潛力〔14〕。Lnc-RNA可通過多種機制調(diào)節(jié)腫瘤組織細胞，可通過與某些特定的蛋白質相互作用，以此發(fā)揮作用〔15～17〕。CARLo-5是新發(fā)現(xiàn)的一種lncRNA，位于染色體8q24.21，主要是從c-MYC基因上游515 kb的遠端增強子轉錄的增強子衍生的RNA，其中癌基因的Myc增強子區(qū)域和CARLo-5啟動子區(qū)域能夠相互作用，并且Myc增強子區(qū)域上的癌癥相關變異點能夠通過調(diào)節(jié)CARLo-5啟動子區(qū)域，以此調(diào)節(jié)CARLo-5表達〔18〕。劉艷紅等〔19〕研究表明，與癌旁組織比較，子宮內(nèi)膜癌組織LncRNACARLo-5表達升高，且與臨床分期、淋巴結轉移和肌層浸潤深度相關；子宮內(nèi)膜癌組織CARLo-5高表達較低表達患者生存預后差。楊海霞等〔20〕研究表明，子宮內(nèi)膜癌組織CARLo-5蛋白表達陽性率顯著高于癌旁組織，且CARLo-5陰性患者平均生存時間長于陽性，CARLo-5表達是影響子宮內(nèi)膜癌獨立危險因素。本文研究表明，老年食管癌患者CARLo-5呈高表達；CARLo-5表達與臨床分期和淋巴結轉移相關。

綜上，老年食管癌組織CARLo-5高表達，且與預后密切相關，CARLo-5表達越高預后越差，具有重要臨床研究價值。但本研究仍存在一些不足，隨訪時間短，樣本量小，故而還需延長隨訪時間及增加樣本量深入研究，以此為食管癌診斷、治療及預后提供參考依據(jù)。