周潮艾 馮小偉 王靈 鄭惠心

小兒肺炎是兒科中常見的呼吸系統(tǒng)疾病，5歲以下兒童的死亡率和發(fā)病率較高，臨床上若不及時(shí)進(jìn)行有效的治療，則會(huì)對(duì)患兒的身體健康和生長(zhǎng)發(fā)育造成影響，甚至威脅患兒生命[1-2]。及時(shí)評(píng)估小兒肺炎病情對(duì)于改善預(yù)后具有重要意義。血管生成是多種炎癥和自身免疫疾病發(fā)生的關(guān)鍵過程。胎盤生長(zhǎng)因子(placental growth factor， PlGF)是血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)家族的一部分，誘導(dǎo)血管生成，在調(diào)節(jié)適應(yīng)性免疫和炎癥反應(yīng)的過程中發(fā)揮作用[3-4]?？扇苄匝軆?nèi)皮生長(zhǎng)因子受體-1(soluble fms-like tyrosine kinase-1，sFlt-l)是VEGF和PlGF的天然拮抗劑，與內(nèi)皮功能障礙有關(guān)[5-6]。sFlt-1和PlGF在小兒肺炎中的作用尚未被研究。本研究檢測(cè)了肺炎患兒血清中sFlt-1和PlGF的表達(dá)水平，旨在描述兩者與小兒肺炎嚴(yán)重程度的相關(guān)性。

資料與方法

一、資料

本研究選擇于2019年11月～2021年6月期間我院1個(gè)月以上和12歲以下因肺炎住院的患兒作為肺炎組，共72例，所有患兒根據(jù)《諸福棠實(shí)用兒科學(xué)(第7版)》中的診斷標(biāo)準(zhǔn)[7]確診為肺炎，并且沒有其它免疫性疾病和炎性疾病，肺部有其他疾病(如肺結(jié)核、支氣管異物等)的患兒排除在外。根據(jù)臨床肺部感染評(píng)分(Clinical pulmonary infection score，CPIS)將所有患兒劃分為輕癥組30例，重癥組42例。輕癥組包括18例男孩和12例女孩，平均年齡在(6.20±1.35)歲；重癥組包括24例男孩和18例女孩，平均年齡在(5.83±1.06)歲。同時(shí)選擇40例健康兒童作為對(duì)照組，為同時(shí)期在我院進(jìn)行健康檢查的兒童，包括26例男孩和14例女孩，平均年齡在(6.05±1.24)歲。三組兒童在年齡和性別方面比較沒有明顯差異(P>0.05)。所有患兒及健康兒童的家屬同意參與研究并簽署了同意書，醫(yī)院倫理機(jī)構(gòu)也同意本研究方案。

二、方法

1 血樣采集與保存 肺炎患兒入院時(shí)和對(duì)照組兒童體檢當(dāng)天抽取靜脈血3 mL，通過1000 g離心15 min分離血清，然后分裝到無菌收集管中，儲(chǔ)存在-80℃直至隨后檢測(cè)。

2 血清sFlt-1、PIGF表達(dá)水平的檢測(cè) 使用酶聯(lián)免疫實(shí)驗(yàn)(ELISA)試劑盒測(cè)定血清sFlt-1、PIGF表達(dá)水平，根據(jù)試劑盒說明書上的方法進(jìn)行操作，使用酶標(biāo)儀測(cè)定450 nm波長(zhǎng)下的OD值。人sFlt-1 ELISA試劑盒(貨號(hào)：ZK-3250)由上海臻科生物科技有限公司提供，人PIGF ELISA試劑盒(貨號(hào)：SEKH-0296)由北京索萊寶科技有限公司提供。酶標(biāo)儀(型號(hào)：iMark)由伯樂生命醫(yī)學(xué)產(chǎn)品(上海)有限公司提供。

3 病情評(píng)估分組 根據(jù)CPIS來評(píng)估患兒肺炎的嚴(yán)重程度，主要包括體溫、白細(xì)胞計(jì)數(shù)、氣管分泌物、氧合情況、X線胸片、肺部浸潤(rùn)影的進(jìn)展情況和氣管吸取物培養(yǎng)7項(xiàng)指標(biāo)的檢測(cè)結(jié)果，最高評(píng)分為12分，得分越高，病情越重[8]。當(dāng)CPIS評(píng)分<6分時(shí)為輕癥組，≥6分時(shí)為重癥組。

三、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

結(jié) 果

一、肺炎組患兒與對(duì)照組血清sFlt-1、PIGF表達(dá)水平

結(jié)果顯示，肺炎組患兒血清中sFlt-1、PIGF的表達(dá)水平與對(duì)照組相比均明顯上升(P<0.05)(表1)。

表1 肺炎患兒與對(duì)照組血清sFlt-1、PIGF表達(dá)水平的比較

二、不同病情組血清sFlt-1、PIGF表達(dá)水平及CPIS評(píng)分

結(jié)果顯示，與輕癥組相比，重癥組患兒的血清sFlt-1、PIGF表達(dá)水平及CPIS評(píng)分顯著增高(P<0.05)(表2)。

表2 各組血清sFlt-1、PIGF表達(dá)水平及CPIS評(píng)分的比較

三、肺炎患兒血清sFlt-1、PIGF表達(dá)水平與CPIS評(píng)分的相關(guān)性

結(jié)果顯示，肺炎患兒血清sFlt-1、PIGF的表達(dá)水平與CPIS評(píng)分呈正相關(guān)(r=0.445，P<0.05；r=0.471，P<0.05)(圖1)。

圖1 肺炎患兒血清sFlt-1、PIGF表達(dá)水平與CPIS評(píng)分的相關(guān)性分析

四、ROC曲線分析血清sFlt-1、PIGF表達(dá)水平評(píng)估肺炎嚴(yán)重程度的價(jià)值

根據(jù)ROC曲線分析血清sFlt-1、PIGF表達(dá)水平評(píng)估肺炎嚴(yán)重程度的價(jià)值，結(jié)果顯示，血清sFlt-1、PIGF單獨(dú)檢測(cè)及聯(lián)合檢測(cè)(sFlt-1+PIGF)的曲線下面積(AUC)分別為0.843(95%CI：0.751～0.935)、0.788(95%CI：0.683～0.893)、0.888(95%CI：0.813～0.964)(見圖2)；s-Flt-1、PIGF和sFlt-1+PIGF具有較高的靈敏度、特異性、準(zhǔn)確度(見表3)。

表3 血清sFlt-1、PIGF單獨(dú)檢測(cè)及聯(lián)合檢測(cè)評(píng)估肺炎嚴(yán)重程度的價(jià)值

圖2 血清sFlt-1、PIGF單獨(dú)檢測(cè)及聯(lián)合檢測(cè)評(píng)估肺炎嚴(yán)重程度的ROC曲線

討 論

小兒肺炎是我國(guó)住院患兒死亡的首要原因，由于兒童的身體抵抗力較低，該病發(fā)病較急，病情進(jìn)展較快，重癥肺炎可累及循環(huán)、神經(jīng)及消化等系統(tǒng)，容易出現(xiàn)多種并發(fā)癥，嚴(yán)重威脅小兒健康和生命安全，雖然人工呼吸機(jī)和抗生素的使用，能在一定程度上緩解患兒癥狀，但若不能及時(shí)給予治療，依然對(duì)患兒的生命造成威脅[9]。因此，及時(shí)準(zhǔn)確地評(píng)估小兒肺炎的病情嚴(yán)重程度，結(jié)合病情采用合理有效的治療策略，對(duì)于改善患兒預(yù)后的意義重大。

據(jù)研究報(bào)道，重癥肺炎與內(nèi)皮細(xì)胞功能障礙有關(guān)[10]，血清sFlt-1是VEGF受體的可溶性形式，據(jù)研究報(bào)道，sFlt-1在內(nèi)皮細(xì)胞中充當(dāng)VEGF信號(hào)傳導(dǎo)的競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑，與VEGF結(jié)合從而中和VEGF的促炎癥作用，改變血管壁通透性，引起血管內(nèi)皮功能障礙[11]。sFlt-1的過表達(dá)已被多項(xiàng)研究證實(shí)可促進(jìn)內(nèi)皮功能障礙。此前有研究稱，sFlt-1在膿毒癥患者中表達(dá)升高，并且其水平隨著膿毒癥嚴(yán)重程度逐漸升高[6]。最近Dupont等[12]人發(fā)現(xiàn)sFlt-1在2019年冠狀病毒肺炎(COVID-19)患者的血漿中的表達(dá)水平升高，其表達(dá)水平與COVID-19患者的呼吸道癥狀嚴(yán)重程度、內(nèi)皮功能障礙生物標(biāo)志物的表達(dá)和器官衰竭的發(fā)生率相關(guān)。符征高等[13]人的研究顯示，sFLt-1水平在對(duì)照組、普通肺炎組、重癥肺炎組的血漿中逐漸升高，參與了肺炎的病情進(jìn)展，并且可作為重癥肺炎患者28 d不良預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。我們的研究結(jié)果正如前人報(bào)道的那樣，在肺炎患兒血清中觀察到了sFLt-1水平上升，并且在重癥組患兒中顯著高于輕癥組，結(jié)果提示sFLt-1可能通過誘導(dǎo)內(nèi)皮功能障礙參與小兒肺炎的發(fā)病機(jī)制和病情進(jìn)展。

PlGF作為VEGF家族的一員，結(jié)構(gòu)和功能與VEGF相似，在炎癥、血管通透性和病理性血管生成中起作用。大量的證據(jù)表明，在不同類型的腫瘤中，血漿PlGF水平上調(diào)并與腫瘤分級(jí)和存活相關(guān)，可能是癌癥進(jìn)展的有用預(yù)后標(biāo)志物[4]。疾病條件下機(jī)體缺氧能夠上調(diào)PlGF的表達(dá)，蔡姝萍等[14]人研究顯示，睡眠呼吸暫停低通氣綜合征通過導(dǎo)致機(jī)體缺氧等機(jī)制而使PLGF水平升高，進(jìn)一步加重了頸動(dòng)脈病變的嚴(yán)重程度。近年來文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)，PlGF在慢性阻塞性肺疾病患者血清和支氣管肺泡灌洗液中的表達(dá)也上升，且PlGF的表達(dá)水平與肺功能呈負(fù)相關(guān)，在呼吸系統(tǒng)疾病中具有重要作用[15-16]。PlGF可在小兒肺炎中的水平及其作用尚不明確，結(jié)合上述文獻(xiàn)，我們推測(cè)PlGF可能在小兒肺炎的發(fā)生發(fā)展中也發(fā)揮作用，因此檢測(cè)了肺炎患兒血清中PlGF的表達(dá)水平，結(jié)果如預(yù)期的那樣，與對(duì)照組相比，肺炎患兒血清中PlGF表達(dá)水平上升，并且重癥組顯著高于輕癥組，提示PlGF在小兒肺炎的病理過程中發(fā)揮促炎反應(yīng)。

CPIS評(píng)分系統(tǒng)對(duì)評(píng)估肺炎患者病情具有較高的應(yīng)用價(jià)值，本研究分析了CPIS評(píng)分在不同病情患兒中的差異，重癥組顯著高于輕癥組，進(jìn)一步對(duì)肺炎患兒sFLt-1和PLGF表達(dá)水平與CPIS評(píng)分進(jìn)行了相關(guān)性分析，結(jié)果顯示，sFLt-1和PLGF表達(dá)水平分別與CPIS評(píng)分正相關(guān)，提示sFLt-1和PLGF與小兒肺炎的嚴(yán)重程度存在一定的關(guān)聯(lián)。另外本研究應(yīng)用ROC曲線分析sFLt-1、PLGF和sFLt-1+PLGF評(píng)估肺炎嚴(yán)重程度的價(jià)值，血清sFlt-1、PIGF單獨(dú)檢測(cè)及聯(lián)合檢測(cè)的曲線下面積(AUC)分別為0.843、0.788、0.888，可用于診斷小兒肺炎的病情，聯(lián)合檢測(cè)的效果更佳，結(jié)果進(jìn)一步證明了sFLt-1、PLGF在小兒肺炎進(jìn)展中的重要作用，可作為評(píng)估肺炎嚴(yán)重程度方面的有希望的生物標(biāo)志物。

綜上所述，肺炎患兒的血清sFLt-1、PLGF表達(dá)水平升高，與病情的嚴(yán)重程度有關(guān)，sFlt-1和PLGF的血清水平可以幫助對(duì)肺炎患兒的嚴(yán)重程度進(jìn)行分類，從而幫助臨床醫(yī)生更好地進(jìn)行針對(duì)性治療。進(jìn)一步研究將擴(kuò)大患者數(shù)量和擴(kuò)大臨床評(píng)估范圍，有助于更好地了解這些生物標(biāo)志物的臨床效用。