王 靜，苗 姝，佟金平，王 濤，孫 偉

(1.大連大學(xué)附屬新華醫(yī)院呼吸與危重癥醫(yī)學(xué)科，遼寧大連 116021；2.大連大學(xué)附屬中山醫(yī)院呼吸與危重癥醫(yī)學(xué)一科，遼寧大連 116001；3.四川省醫(yī)學(xué)科學(xué)院·四川省人民醫(yī)院呼吸與危重癥科，成都 610072)

支氣管哮喘是一種由肥大細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞(eosinophil，EOS)、淋巴細(xì)胞等多種細(xì)胞及細(xì)胞因子參與的氣道慢性炎癥疾病[1]。最新流行病學(xué)調(diào)查研究顯示全球約由3億人患有支氣管哮喘，而中國占1/10，且哮喘的控制現(xiàn)狀并不滿意[2]。氣道炎癥和氣道高反應(yīng)性是支氣管哮喘典型病理特征[3]。研究發(fā)現(xiàn)氣道炎性細(xì)胞的聚集與炎性介質(zhì)、細(xì)胞因子的釋放均受到趨化因子的調(diào)節(jié)[4]。趨化因子作為一種生物活性介質(zhì)，在調(diào)節(jié)炎性細(xì)胞移動及釋放活性介質(zhì)調(diào)節(jié)方面發(fā)揮重要作用[5]。趨化因子配體13蛋白(C-X-C chemokine ligand 13，CXCL13)是非常重要的趨化因子，可通過促進(jìn)免疫細(xì)胞和炎性細(xì)胞的遷移，將特異性的細(xì)胞群，如特異性T細(xì)胞、B細(xì)胞等聚集在肺組織周圍，增加了氣道的高反應(yīng)性，從而參與了支氣管哮喘炎性反應(yīng)的全過程[6-9]。但目前CXCL13在支氣管哮喘中的臨床意義尚不明確，所以本研究擬通過檢測支氣管哮喘患者血清CXCL13水平，分析其與肺功能、炎性因子的相關(guān)性，為將來支氣管哮喘的臨床治療、病情評估提供理論依據(jù)，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2019年3月至2021年3月大連大學(xué)附屬新華醫(yī)院收治的100例支氣管哮喘患者為研究對象。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)符合2016年版《支氣管哮喘防治指南》的診斷標(biāo)準(zhǔn)；(2)1個月內(nèi)未使用抗感染、激素、免疫抑制劑等藥物；(3)患者及其家屬對本研究表示同意、配合并簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)合并其他疾病，如感染性相關(guān)疾病、免疫性系統(tǒng)性疾病、其他器官過敏性疾?。?2)其他氣道及非特異性感染性疾病，如慢性阻塞性肺疾病、支氣管擴(kuò)張、肺結(jié)核等疾??；(3)患有嚴(yán)重肝腎功能障礙，高血壓、糖尿病等系統(tǒng)性疾病。根據(jù)支氣管哮喘臨床指南，根據(jù)病情程度分為急性發(fā)作組和慢性持續(xù)組。急性發(fā)作組60例，其中男30例，女30例，年齡19～50歲，平均(35.35±7.45)歲，BMI 17.8～27.2 kg/m2，平均(21.05±4.03)kg/m2。慢性持續(xù)組40例，其中男20例，女20例，年齡21～53歲，平均(35.88±6.45)歲，BMI 18.6～25.7 kg/m2，平均(21.52±2.25)kg/m2。另選取40例門診體檢的健康志愿者作為健康對照組，均經(jīng)門診體檢后除外呼吸道感染、哮喘、高血壓、糖尿病、免疫性相關(guān)系統(tǒng)性疾病等。健康對照組中男20例，女20例，年齡20～55歲，平均(35.23±4.94)歲，BMI 17.2～24.5 kg/m2，平均(21.01±2.51)kg/m2。3組一般資料比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。本研究獲得醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)。

1.2 方法

1.2.1生化指標(biāo)檢測

在入院后24 h內(nèi)采集符合診斷標(biāo)準(zhǔn)的支氣管哮喘患者肘靜脈血(5 mL)，一份放置在干燥離心管內(nèi)，另一份放置在抗凝的生化檢查試管內(nèi)。1 h內(nèi)將干燥離心管置于TDZ4-WS低速自動平衡離心機(jī)(長沙湘智離心機(jī)儀器有限公司)4 ℃條件下3 000 r/min離心(離心半徑為10 cm)，時間為15 min，之后取血漿保存于-80 ℃冰箱內(nèi)(美國Thermo Fisher公司)。ELISA檢測各標(biāo)本血清中CXCL13的表達(dá)水平，試劑盒購自法國Diaclone公司。E601電化學(xué)發(fā)光儀(美國羅氏公司)及其配套試劑檢測血清免疫球蛋白E(immunoglobulin E，IgE)的表達(dá)水平。另一份抗凝生化試劑管的血液標(biāo)本充分搖勻后上機(jī)，采用Sysmex XT4000-i全自動血細(xì)胞分析儀檢測外周血EOS計(jì)數(shù)。

1.2.2肺功能檢測

符合診斷標(biāo)準(zhǔn)的支氣管哮喘患者在入院72 h完成肺功能檢查，健康對照組的檢查時間不受限制。Master Screen肺功能儀(德國耶格公司)，檢測前吸入200 μg沙丁胺醇，15 min后測量第1秒用力呼氣容積(forced expiratory volume in one second，F(xiàn)EV1)，計(jì)算FEV1與用力肺活量(forced vital capacity，F(xiàn)VC)的比值(FEV1/FVC)、FEV1占預(yù)計(jì)值百分?jǐn)?shù)(FEV1%pred)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié) 果

2.1 3組CXCL13、IgE、EOS水平比較

急性發(fā)作組CXCL13、IgE、EOS水平高于慢性持續(xù)組和健康對照組，且慢性持續(xù)組高于健康對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表1。

表1 3組CXCL13、IgE、EOS水平比較

2.2 3組肺功能比較

急性發(fā)作組FEV1、FEV1/FVC、FEV1%pred低于慢性持續(xù)組和健康對照組，而慢性持續(xù)組低于健康對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表2。

表2 3組肺功能比較

2.3 CXCL13水平與IgE、EOS和肺功能的相關(guān)性分析

以急性發(fā)作期患者CXCL13水平為因變量，IgE、EOS、FEV1、FEV1/FVC、FEV1%pred為自變量，進(jìn)行多元線性回歸分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn)CXCL13與IgE、EOS呈正相關(guān)，與FEV1、FEV1/FVC、FEV1%pred呈負(fù)相關(guān)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表3。

表3 CXCL13與IgE、EOS和肺功能參數(shù)的相關(guān)性分析

2.4 ROC曲線

ROC曲線結(jié)果顯示，CXCL13、IgE、EOS用于預(yù)測支氣管哮喘急性發(fā)作曲線下面積分別為0.833 9、0.546 7、0.632 6。CXCL13預(yù)測支氣管哮喘急性發(fā)作的效能最佳，見圖1。

圖1 ROC曲線

3 討 論

支氣管哮喘是影響人們?nèi)粘Ｉ钯|(zhì)量的常見呼吸道疾病[10]。在過敏等因素誘發(fā)支氣管哮喘發(fā)作過程中，T淋巴細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞、酸性粒細(xì)胞及中性粒細(xì)胞在支氣管黏膜處的聚集后釋放一系列生物活性物質(zhì)，引起氣道的高反應(yīng)性，導(dǎo)致患者出現(xiàn)明顯的呼吸困難[11-12]。但上述細(xì)胞相互作用后產(chǎn)生的這一系列生物學(xué)效應(yīng)受到了趨化因子的調(diào)節(jié)[13]。趨化因子通過與其特異性受體結(jié)合后招募了炎性細(xì)胞的活化、積聚，最終觸發(fā)了氣道內(nèi)的過敏炎性反應(yīng)[14-15]。CXCL13是趨化因子CXC家族成員之一，基因定位在4號染色體長臂2區(qū)1代，主要分布于淋巴組織中，而氣道中CXCL13主要由成纖維細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞分泌，由于其具有趨化、募集EOS、B淋巴細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞的生理作用，因此，在支氣管哮喘發(fā)作中扮演了重要角色[16-17]。

目前關(guān)于CXCL13在呼吸道疾病中的臨床意義少有報道，而在基礎(chǔ)研究中曾發(fā)現(xiàn)在流感病毒感染的小鼠模型中CXCL13促進(jìn)了氣道支氣管相關(guān)淋巴結(jié)的形成，并在支氣管哮喘小鼠模型中檢測出CXCL13表達(dá)水平增加，以此證明了CXCL13水平與支氣管相關(guān)淋巴組織產(chǎn)生的IgE與EOS募集相關(guān)[18]。此外，也發(fā)現(xiàn)了使用CXCL13抑制劑對支氣管哮喘小鼠模型進(jìn)行干預(yù)后，氣道炎癥明顯減輕[18]。同時，國外的報道也發(fā)現(xiàn)支氣管哮喘患者的支氣管肺泡灌洗液中存在CXCL13的高表達(dá)[19]。所以，本研究推測CXCL13可能通過調(diào)節(jié)IgE、EOS參與了支氣管哮喘的急性發(fā)作。

目前的研究已經(jīng)證實(shí)了IgE是參與支氣管哮喘發(fā)病的重要因素，且IgE的表達(dá)水平能夠直接反映支氣管哮喘患者的炎癥程度[20]。所以，本研究將IgE作為對照指標(biāo)，比較支氣管哮喘急性發(fā)作期患者血清中CXCL13與IgE之間的相關(guān)性。本研究結(jié)果表明IgE在急性發(fā)作組血清中的表達(dá)水平明顯高于慢性持續(xù)組和健康對照組，且血清CXCL13水平與IgE水平呈正相關(guān)，說明CXCL13和IgE均能反映支氣管哮喘患者的炎癥水平。

EOS一直被公認(rèn)是支氣管哮喘急性發(fā)作的重要標(biāo)志，也是支氣管哮喘發(fā)生過程的主要效應(yīng)細(xì)胞，在過敏性疾病中發(fā)揮關(guān)鍵作用[21]。大量證據(jù)支持支氣管哮喘的嚴(yán)重性與氣道內(nèi)EOS的水平呈正相關(guān)[21]。在氣道內(nèi)積聚的EOS可以直接損傷氣道黏膜，增加氣道平滑肌的收縮及氣道高反應(yīng)性。因此，本研究也將外周血EOS百分比作為反映支氣管哮喘中氣道炎癥的指標(biāo)，并將支氣管哮喘急性發(fā)作期患者血清中的CXCL13的表達(dá)水平與EOS百分比水平進(jìn)行相關(guān)性分析，也發(fā)現(xiàn)了兩者之間呈正相關(guān)。除此之外，本研究中發(fā)現(xiàn)CXCL13對預(yù)測支氣管哮喘急性發(fā)作的臨床效能要優(yōu)于IgE、EOS，這些結(jié)果更加證明了CXCL13可以作為評估支氣管哮喘急性發(fā)作的血清學(xué)標(biāo)志物。

綜上所述，CXCL13水平與患者肺功能、IgE、EOS密切相關(guān)，監(jiān)測血清CXCL13水平可輔助評估哮喘急性發(fā)作的可能，對醫(yī)生指導(dǎo)哮喘防治及改善疾病預(yù)后也具有重要的臨床意義。