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        外泌體源性microRNA-124對(duì)急性創(chuàng)傷性脊髓損傷大鼠脊髓小膠質(zhì)細(xì)胞活化及炎癥反應(yīng)的影響*

        2022-10-08 07:47:06高迎吉朱中蛟楊秀玲
        關(guān)鍵詞:手術(shù)

        高迎吉,朱中蛟,楊秀玲

        (1.臨沂市人民醫(yī)院脊柱外科,山東臨沂 276002;2.滕州市中心醫(yī)院脊柱外科,山東滕州 277599;3.山東大學(xué)齊魯醫(yī)院腫瘤內(nèi)科,山東濟(jì)南 250012)

        急性創(chuàng)傷性脊髓損傷(acute spinal cord injury,ASCI)是一種突發(fā)性中樞神經(jīng)系統(tǒng)創(chuàng)傷,可導(dǎo)致脊髓中血管破裂,神經(jīng)元迅速死亡[1]。神經(jīng)炎癥是ASCI 重要的病理生理機(jī)制,其中小膠質(zhì)細(xì)胞(Microglia, MG)發(fā)揮重要作用,活化MG 中的M1 型可釋放炎癥因子,M2 型可釋放抑炎因子[2]。因此,促進(jìn)ASCI 后M1 型MG 向M2 型轉(zhuǎn)化是改善預(yù)后的重要措施。有研究發(fā)現(xiàn),microRNA-124(miR-124)特異性表達(dá)于MG 中,上調(diào)其表達(dá)可促進(jìn)M1 型MG 向M2 型轉(zhuǎn)化,但裸露miR-124 易被降解,無(wú)法穩(wěn)定地在中樞神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)揮作用,故探究可完整遞送miRNA 的方式具有必要性[3]。外泌體(Exosomes,Exos)是一種由自體細(xì)胞分泌的納米級(jí)囊泡樣小體,通過(guò)轉(zhuǎn)運(yùn)RNA、生物活性磷脂、蛋白質(zhì)等參與細(xì)胞與內(nèi)環(huán)境的信號(hào)傳遞及物質(zhì)運(yùn)輸,已逐漸用于遞送載體、參與器官間聯(lián)系及組織穩(wěn)態(tài)維持[4]。本研究通過(guò)復(fù)制ASCI 大鼠模型,觀察Exos 源性miR-124 對(duì)其脊髓MG 活化及炎癥反應(yīng)的影響,并探討其作用機(jī)制。

        1 材料與方法

        1.1 材料

        1.1.1 細(xì)胞系、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物人源胚胎腎(human emborynic kidney, HEK)239 細(xì)胞系購(gòu)自南京森貝伽生物科技有限公司。SPF 級(jí)SD 大鼠35 只,6 周齡,體重(200±20)g,購(gòu)自上海靈暢生物科技有限公司,實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào):SCXK(滬)2018-0003,實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證號(hào):SYXK(滬)2022-0004。

        1.1.2 主要試劑miR-124-mimics 過(guò)表達(dá)質(zhì)粒(上海漢恒生物科技有限公司),LipofectamineTM3000 試劑盒(上海吉瑪制藥技術(shù)有限公司),Exos 提取試劑盒(上海貝博生物科技公司),兔抗人CD9、CD63 一抗,兔抗鼠核苷酸結(jié)合寡聚化結(jié)構(gòu)域樣受體3(nucleotide-bindingoligomerizationdomain-like receptor 3, NLRP3)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)、P2X7 一抗、小鼠抗大鼠Iba-1、CD32、CD206 抗體(美國(guó)Abcam 公司),腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α, TNF-α)、白細(xì)胞介素-6(Interleukin-6, IL-6)、白細(xì)胞介素-8(interleukin-8,IL-8)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)試劑盒(上海酶聯(lián)生物科技有限公司)。

        1.1.3 主要儀器StepOne Puls 實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(quantitative real-time polymerase chain reaction, qRT-PCR)儀(美國(guó)ABI 公司),JEM-2100Plus 透射電子顯微鏡(日本電子株式會(huì)社),Stat Fax-4200 酶標(biāo)儀(美國(guó)Awareness 公司)。

        1.2 方法

        1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)及轉(zhuǎn)染HEK239 細(xì)胞置于37℃、5%二氧化碳CO2、飽和濕度的DMEM 培養(yǎng)基中(含10%胎牛血清、L-谷氨酰胺、1%非必需氨基酸、青霉素100 u/mL、鏈霉素100 μg/mL)。取對(duì)數(shù)期HEK239 細(xì)胞,PBS 洗滌,按1×105個(gè)/mL 接種至6 孔板,待細(xì)胞再次融合達(dá)75%,分為空白組、轉(zhuǎn)染組??瞻捉M不處理,轉(zhuǎn)染組按照LipofectamineTM3000 試劑盒說(shuō)明書步驟,轉(zhuǎn)染miR-124-mimics 質(zhì)粒。每組設(shè)置5 個(gè)復(fù)孔,每2 天更換1 次培養(yǎng)基,2~3 周后形成單克隆細(xì)胞系用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

        1.2.2 qRT-PCR檢測(cè)轉(zhuǎn)染后細(xì)胞miR-124、Exos源性miR-124、脊髓組織miR-124的表達(dá)取空白組、轉(zhuǎn)染組細(xì)胞,用TRIzol 試劑提取總RNA,逆轉(zhuǎn)錄為cDNA,按照熒光定量試劑盒說(shuō)明書操作,反應(yīng)體系:雙倍核酸染料12 μL,正反向引物(10 μmol/L)各1 μL,模板cDNA 2 μL,補(bǔ)充dd H2O 至總體積20 μL。反應(yīng)條件:90℃預(yù)變性10 min,94℃變性20 s,62℃退火30 s,72℃延伸25 s,共40 個(gè)循環(huán)。以U6為內(nèi)參基因,2-ΔΔCt為目的基因相對(duì)表達(dá)強(qiáng)度,引物序列見(jiàn)表1。取空白組、轉(zhuǎn)染組Exos,檢測(cè)Exos 源性miR-124 相對(duì)表達(dá)量。取冷凍保存的脊髓組織,眼科剪剪碎,PBS 勻漿,注入離心管內(nèi),離心后取上清液,檢測(cè)脊髓組織中miR-124 相對(duì)表達(dá)量。

        表1 qRT-PCR引物序列

        1.2.3 分離含miR-124 的Exos 并鑒定DMEM 培養(yǎng)基(含10%胎牛血清)12 000 r/min 離心15 h,取上清液??瞻捉M、轉(zhuǎn)染組細(xì)胞置于37℃、5% CO2、飽和濕度的DMEM 培養(yǎng)基中(含10%胎牛血清、1%青霉素)培養(yǎng)5 d。3 500 r/min 離心10 min,取上清液,采用Exos 提取試劑盒提取Exos,根據(jù)試劑盒說(shuō)明書步驟進(jìn)行操作。取Exos 10 μL,滴至載樣銅網(wǎng)并靜置2 min,去除浮液,1%磷鎢酸溶液染色5 min,去除染液,自然晾干,在透射電鏡下觀察其形態(tài)。

        1.2.4 Western bloting 檢測(cè)空白組、轉(zhuǎn)染組Exos 膜表面特異性標(biāo)志蛋白的表達(dá)和脊髓組織NLRP3、Caspase-1、P2X7 蛋白的表達(dá)取Exos 50 μL,加入裂解液50 μL(含蛋白酶抑制劑),4℃振蕩25 min。離心取上清液,BCA 蛋白定量試劑盒定量,加入上樣緩沖液,沸水浴變性5 min。每孔40 μg 上樣,電泳后濕轉(zhuǎn)至硝酸纖維素膜上,封閉液封閉2 h,加入兔抗人CD9、CD63 一抗(1∶500),4℃孵育過(guò)夜,洗滌,加入山羊抗兔二抗(1∶2 000),室溫孵育2 h,洗滌、曝光、顯影,凝膠成像系統(tǒng)分析,以CD9、CD63 與內(nèi)參GAPDH 的灰度值比值表示蛋白相對(duì)表達(dá)量。

        取冷凍保存的脊髓組織,操作方法同上,加入兔抗大鼠NLRP3、Caspase-1、P2X7 一抗(1∶500),檢測(cè)脊髓組織NLRP3、Caspase-1、P2X7 蛋白相對(duì)表達(dá)量。

        1.2.5 ASCI 大鼠模型的復(fù)制及分組腹腔注射戊巴比妥鈉麻醉大鼠,保持其俯臥體位,將T10椎體作為中心行矢狀切口,顯露T9~T11椎板,去除T10椎板和韌帶,顯露硬脊膜。采用紐約大學(xué)脊髓損傷打擊器固定大鼠,將撞擊棒(直徑2.5 mm,重量10 g)從25 mm 位置自由下落撞擊脊髓,自撞擊棒下落到抬起時(shí)間間隔10 s。模型復(fù)制成功標(biāo)準(zhǔn):脊髓被擊打后表面迅速淤血、水腫,擊打瞬間大鼠表現(xiàn)為后肢放射性迅速收回、抖動(dòng)[5]。模型復(fù)制成功后清洗周圍組織,常規(guī)縫合、抗感染。

        從35 只大鼠中隨機(jī)選取10 只僅咬除椎板顯露脊髓,不進(jìn)行損傷處理,設(shè)為假手術(shù)組,其余25 只復(fù)制ASCI 模型,模型復(fù)制成功20 只,隨機(jī)分為ASCI 組、實(shí)驗(yàn)組,每組10 只。模型復(fù)制成功后24 h,實(shí)驗(yàn)組經(jīng)尾靜脈注射Exos 3×109個(gè)微粒(通過(guò)納米顆粒跟蹤分析儀Nanosight NS300 system 控制Exos量),假手術(shù)組及ASCI 組注射等量PBS 溶液[6]。

        1.2.6 標(biāo)本采集干預(yù)后3 d,頸椎脫臼法處死大鼠,于冰盤上迅速分離大鼠T9~T11節(jié)段脊髓,轉(zhuǎn)移至EP 管中封閉保存,取5 只大鼠的脊髓組織-80℃冷凍保存,用于miR-124 相對(duì)表達(dá)量、MG 占比、脊髓組織炎癥因子水平的檢測(cè),另外5 只大鼠的脊髓組織分成兩份,一份固定于4%多聚甲醛24 h,另一份置入-80℃冰箱冷凍保存用于檢測(cè)蛋白相對(duì)表達(dá)量。

        1.2.7 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)脊髓組織MG 占比取脊髓組織,胰蛋白酶消化后離心,經(jīng)密度梯度離心法分離出單個(gè)核細(xì)胞,用10%胎牛血清重懸,在單核細(xì)胞懸液中加入小鼠抗大鼠Iba-1、CD32、CD206 抗體,避光孵育30 min,離心棄上清液,PBS 洗滌,1%多聚甲醛定容,300 目細(xì)胞濾網(wǎng)過(guò)濾,4℃遮光保存,以陰性對(duì)照管設(shè)門,采用多參數(shù)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)定脊髓組織MG 中Iba-1+/CD32+、Iba-1+/CD206+占比。

        1.2.8 ELISA 檢測(cè)脊髓組織TNF-α、IL-6、IL-8水平取冷凍保存的脊髓組織,勻漿后采用ELISA檢測(cè)TNF-α、IL-6、IL-8 水平,根據(jù)試劑盒說(shuō)明書操作步驟,經(jīng)酶標(biāo)儀測(cè)定570 nm 波長(zhǎng)處吸光度值,畫出曲線,計(jì)算樣本濃度。

        1.2.9 蘇木精-伊紅(Hematoxylin-eosin,HE)染色觀察脊髓組織病理學(xué)變化取脊髓組織切片,常規(guī)水化,沖洗,蘇木精染液染色5 min,沖洗,分化液分化,沖洗,藍(lán)化液反藍(lán),伊紅染色2 min,漂洗,常規(guī)脫水、透明,滴入中性樹脂封固,顯微鏡下觀察脊髓組織病理學(xué)變化。

        1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

        數(shù)據(jù)分析采用SPSS 19.0 統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示,比較用t檢驗(yàn)或方差分析,進(jìn)一步兩兩比較用LSD-t檢驗(yàn)。P<0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

        2 結(jié)果

        2.1 兩組細(xì)胞轉(zhuǎn)染后miR-124相對(duì)表達(dá)量比較

        空白組與轉(zhuǎn)染組miR-124 相對(duì)表達(dá)量分別為(0.95±0.12)和(2.38±0.27),經(jīng)t檢驗(yàn),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=10.822,P=0.000),轉(zhuǎn)染組高于空白組。

        2.2 Exos形態(tài)

        透射電鏡觀察結(jié)果顯示,Exos 膜結(jié)構(gòu)完整,大小不一,大部分呈杯形或圓形,直徑30~100 nm,與Exos 特征相符。見(jiàn)圖1。

        圖1 透射電鏡觀察Exos形態(tài) (×70 000)

        2.3 含miR-124的Exos鑒定結(jié)果

        空白組與轉(zhuǎn)染組CD9、CD63 蛋白及miR-124相對(duì)表達(dá)量的比較,經(jīng)t檢驗(yàn),差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),轉(zhuǎn)染組CD9、CD63 蛋白及miR-124相對(duì)表達(dá)量升高。見(jiàn)表2 和圖2。

        表2 兩組細(xì)胞CD9、CD63 蛋白、miR-124 相對(duì)表達(dá)量比較 (±s)

        表2 兩組細(xì)胞CD9、CD63 蛋白、miR-124 相對(duì)表達(dá)量比較 (±s)

        組別空白組轉(zhuǎn)染組t 值P 值CD9蛋白0.38±0.04 0.67±0.07 8.043 0.000 CD63蛋白0.32±0.04 0.61±0.08 7.250 0.000 miR-124 1.22±0.18 2.57±0.29 8.844 0.000

        圖2 空白組、轉(zhuǎn)染組CD9、CD63蛋白的表達(dá)

        2.4 3 組大鼠脊髓組織miR-124 相對(duì)表達(dá)量比較

        假手術(shù)組、ASCI 組、實(shí)驗(yàn)組大鼠脊髓組織miR-124 相對(duì)表達(dá)量分別為(1.02±0.17)、(1.04±0.15)、(2.10±0.34),經(jīng)方差分析,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=34.287,P=0.000)。進(jìn)一步兩兩比較結(jié)果:與假手術(shù)組、ASCI 組比較,實(shí)驗(yàn)組脊髓組織miR-124 相對(duì)表達(dá)量升高(P<0.05);假手術(shù)組與ASCI 組脊髓組織miR-124 相對(duì)表達(dá)量比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

        2.5 3組大鼠脊髓組織MG占比比較

        假手術(shù)組、ASCI 組、實(shí)驗(yàn)組大鼠脊髓組織Iba-1+/CD32+、Iba-1+/CD206+占比比較,經(jīng)方差分析,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。進(jìn)一步兩兩比較結(jié)果:與假手術(shù)組比較,ASCI 組脊髓組織Iba-1+/CD32+、Iba-1+/CD206+占比均升高(P<0.05);與ASCI 組比較,實(shí)驗(yàn)組脊髓組織Iba-1+/CD32+占比降低(P<0.05),Iba-1+/CD206+占比升高(P<0.05)。見(jiàn)表3。

        表3 3組大鼠脊髓組織MG占比比較 (n=5,%,±s)

        表3 3組大鼠脊髓組織MG占比比較 (n=5,%,±s)

        注:①與假手術(shù)組比較,P <0.05;②與ASCI組比較,P <0.05。

        組別假手術(shù)組ASCI組實(shí)驗(yàn)組F 值P 值Iba-1+/CD206+25.47±4.21 39.65±5.07①54.87±6.39②38.484 0.000 Iba-1+/CD32+20.19±3.57 44.28±5.31①29.36±4.92②34.039 0.000

        2.6 3組大鼠脊髓組織TNF-α、IL-6、IL-8水平比較

        假手術(shù)組、ASCI 組、實(shí)驗(yàn)組大鼠脊髓組織TNFα、IL-6、IL-8 水平比較,經(jīng)方差分析,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。進(jìn)一步兩兩比較結(jié)果:與假手術(shù)組比較,ASCI 組脊髓組織TNF-α、IL-6、IL-8 水平升高(P<0.05);與ASCI 組比較,實(shí)驗(yàn)組脊髓組織TNF-α、IL-6、IL-8 水平降低(P<0.05)。見(jiàn)表4。

        表4 3組大鼠脊髓組織TNF-α、IL-6、IL-8水平比較(n=5,±s)

        表4 3組大鼠脊髓組織TNF-α、IL-6、IL-8水平比較(n=5,±s)

        注:①與假手術(shù)組比較,P <0.05;②與ASCI組比較,P <0.05。

        組別假手術(shù)組ASCI組實(shí)驗(yàn)組F 值P 值IL-8/(ng/mL)79.63±10.25 156.38±19.64①129.97±16.69②29.643 0.000 TNF-α/(ng/mL)4.21±0.96 7.59±1.12①6.23±0.74②15.930 0.000 IL-6/(pg/mL)106.85±12.68 179.74±23.57①142.28±19.96②17.878 0.000

        2.7 3組大鼠脊髓組織病理學(xué)改變

        假手術(shù)組大鼠脊髓組織未觀察到明顯的炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。ASCI 組可觀察到大量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn),表現(xiàn)為典型的“血管袖套樣”,且部分炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)至腦實(shí)質(zhì)中。實(shí)驗(yàn)組血管周圍與腦實(shí)質(zhì)中有炎癥細(xì)胞浸潤(rùn),但不及ASCI 組炎癥細(xì)胞數(shù)量多,程度較輕。見(jiàn)圖3。

        圖3 3組大鼠脊髓組織病理切片 (HE染色×200)

        2.8 3組大鼠脊髓組織NLRP3、Caspase-1、P2X7蛋白相對(duì)表達(dá)量比較

        假手術(shù)組、ASCI 組、實(shí)驗(yàn)組大鼠脊髓組織NLRP3、Caspase-1、P2X7 蛋白相對(duì)表達(dá)量比較,經(jīng)方差分析,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。進(jìn)一步兩兩比較結(jié)果:與假手術(shù)組比較,ASCI 組脊髓組織NLRP3、Caspase-1、P2X7 蛋白相對(duì)表達(dá)量升高(P<0.05);與ASCI 組比較,實(shí)驗(yàn)組脊髓組織NLRP3、Caspase-1、P2X7 蛋白相對(duì)表達(dá)量降低(P<0.05)。見(jiàn)表5 和圖4。

        表5 3組大鼠脊髓組織NLRP3、Caspase-1、P2X7蛋白相對(duì)表達(dá)量比較 (n=5,±s)

        表5 3組大鼠脊髓組織NLRP3、Caspase-1、P2X7蛋白相對(duì)表達(dá)量比較 (n=5,±s)

        注:①與假手術(shù)組比較,P <0.05;②與ASCI組比較,P <0.05。

        組別假手術(shù)組ASCI組實(shí)驗(yàn)組F 值P 值P2X7 0.25±0.03 0.92±0.11①0.40±0.05②119.645 0.000 NLRP3 0.35±0.04 0.72±0.08①0.53±0.06②44.267 0.000 Caspase-1 0.29±0.03 0.99±0.12①0.62±0.07②91.064 0.000

        圖4 各組大鼠脊髓組織NLRP3、Caspase-1、P2X7蛋白的表達(dá)

        3 討論

        ASCI 引發(fā)的局部病理?yè)p傷表現(xiàn)為區(qū)域性、不完全性,并造成血管痙攣、局部炎癥、組織水腫缺血、離子失衡、代謝紊亂及氨基酸毒性等復(fù)雜級(jí)聯(lián)反應(yīng),進(jìn)而損傷神經(jīng)細(xì)胞并致其脫髓鞘,生成膠質(zhì)瘢痕影響軸突正常生長(zhǎng),最終導(dǎo)致不可逆性神經(jīng)功能損害[7-8]。MG 廣泛分布于神經(jīng)系統(tǒng),其作為巨噬細(xì)胞具有呈遞抗原、吞噬病原體、為神經(jīng)元提供營(yíng)養(yǎng)支持等作用,與炎癥產(chǎn)生關(guān)系密切。ASCI 后中樞系統(tǒng)感受到強(qiáng)烈刺激,MG 轉(zhuǎn)變?yōu)镸1、M2 兩種極化類型,M1 型通過(guò)分泌蛋白酶、炎癥因子等加劇脊髓損傷,并誘導(dǎo)炎癥細(xì)胞遷移至損傷區(qū)域,而M2 型可分泌抗炎因子從而減輕炎癥反應(yīng)及組織損傷[9]。由此可見(jiàn),活化MG 在調(diào)控ASCI 后的炎癥反應(yīng)中占據(jù)重要地位。

        miR-124 被證實(shí)大量表達(dá)于哺乳動(dòng)物腦及脊髓神經(jīng)元中,在癲癇、帕金森病及腦缺血等中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病中起關(guān)鍵作用,并可促進(jìn)MG 從促炎M1 型轉(zhuǎn)化為抑炎M2 型[10-12]。李昊天等[13]發(fā)現(xiàn),上調(diào)miR-124 可抑制脊髓損傷大鼠氧化應(yīng)激導(dǎo)致的神經(jīng)元凋亡,減輕脊髓損傷,提示其在治療脊髓損傷方面的潛能。將Exos 作為將miR-124 輸送至中樞神經(jīng)系統(tǒng)的載體與自然生理學(xué)狀態(tài)更為接近,且體積微小、容易獲取及保存、無(wú)免疫排斥、免疫原性低。此外,該基因修飾方式可促進(jìn)Exos 表面表達(dá)特定的受體和配體,從而使其具有結(jié)合特定細(xì)胞的功能。楊永祥等[14]研究發(fā)現(xiàn),Exos 源性miR-146a 可提高N9 型MG 中miR-146a 相對(duì)表達(dá)量,進(jìn)而調(diào)控下游靶向因子抑制N9 型MG 介導(dǎo)的炎癥反應(yīng),表明Exos 可作為將miRNA 遞送給受體細(xì)胞的有效載體。本研究結(jié)果顯示,與ASCI 組比較,實(shí)驗(yàn)組脊髓組織Iba-1+/CD32+占比降低,Iba-1+/CD206+占比升高,且TNFα、IL-6、IL-8 水平降低,提示Exos 源性miR-124 可促進(jìn)ASCI 大鼠脊髓M1 型MG 轉(zhuǎn)化為M2 型,從而減輕脊髓炎癥反應(yīng)。

        NOD 樣受體是機(jī)體重要的模式識(shí)別受體,NLRP3 是其中主要類型之一,被激活后與Caspase-1、ASC 組成炎癥小體。NLRP3 炎癥小體是一種可激活炎癥反應(yīng)的多蛋白復(fù)合物,在先天性免疫及炎癥相關(guān)疾病進(jìn)程中發(fā)揮重要作用,可響應(yīng)微生物感染與細(xì)胞損傷,具有抗微生物及免疫調(diào)節(jié)作用,通過(guò)介導(dǎo)Caspase-1 激活和促炎TNF-α、IL-6、IL-8 等炎癥因子分泌,導(dǎo)致細(xì)胞焦亡[15-16]。ZHAO 等[17]發(fā)現(xiàn),通過(guò)抑制NLRP3 炎癥小體激活、調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞極化可有效減少神經(jīng)膠質(zhì)瘢痕形成并促進(jìn)軸突生長(zhǎng),從而治療急性脊髓損傷,提示NLRP3 炎癥小體可作為脊髓損傷治療中的有效靶點(diǎn)。本研究結(jié)果顯示,與假手術(shù)組比較,ASCI 組脊髓組織NLRP3、Caspase-1、P2X7 蛋白相對(duì)表達(dá)量升高,經(jīng)實(shí)驗(yàn)組干預(yù)后均有所降低,提示P2X7-NLRP3/Caspase-1 信號(hào)通路在ASCI中被異常激活,Exos 源性miR-124 可能通過(guò)抑制該通路活性發(fā)揮治療ASCI 的作用。

        綜上所述,Exos 源性miR-124 可促進(jìn)ASCI 大鼠脊髓M1 型MG 轉(zhuǎn)化為M2 型,減輕炎癥反應(yīng),推測(cè)其作用機(jī)制與抑制P2X7-NLRP3/Caspase-1 信號(hào)通路活性有關(guān)。

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