劉震坤, 張傳師

（重慶三峽職業(yè)學(xué)院, 重慶萬州 404155）

自2020年我國飼料全面“禁抗”以來, 發(fā)酵飼料成為飼用抗生素的有效替代品之一。發(fā)酵飼料具有濃郁的酸香味, 適口性好, 能提高動(dòng)物采食量, 且含有大量益生菌, 如乳酸菌、芽孢桿菌等, 能分解飼料中不易被消化的蛋白質(zhì)、纖維素等大分子營養(yǎng)物質(zhì), 大量益生菌可改善動(dòng)物腸道微生態(tài)區(qū)系, 提高動(dòng)物免疫力, 降低發(fā)病率。目前, 肉兔發(fā)酵飼料主要是發(fā)酵蛋白原料（如發(fā)酵豆粕、發(fā)酵雜粕）、發(fā)酵粗飼料（如發(fā)酵秸稈、發(fā)酵干草等）及發(fā)酵糟渣類原料（如發(fā)酵酒糟、發(fā)酵醋糟等）。而發(fā)酵肉兔全價(jià)飼料的報(bào)道很少, 本試驗(yàn)采用益生菌和酶制劑協(xié)同發(fā)酵育肥兔全價(jià)飼料, 等量替代一定比例的肉兔常規(guī)飼料, 研究菌酶協(xié)同發(fā)酵飼料對(duì)肉兔生產(chǎn)性能和血清生化指標(biāo)的影響, 為發(fā)酵肉兔全價(jià)飼料提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì) 試驗(yàn)將48只（2.09±0.17）kg的健康育肥肉兔隨機(jī)分為3組, 即對(duì)照組、處理組1和處理組2。每個(gè)處理4個(gè)重復(fù), 每個(gè)重復(fù)4只肉兔。基礎(chǔ)日糧參照《NY/T 4049-2021 肉兔營養(yǎng)需要量》配制, 其組成及營養(yǎng)水平見表1。對(duì)照組全程飼喂基礎(chǔ)日糧, 處理組1飼喂95%基礎(chǔ)日糧和5%發(fā)酵全價(jià)飼料, 處理組2飼喂90%基礎(chǔ)日糧和10%發(fā)酵全價(jià)飼料, 預(yù)試期7 d, 試驗(yàn)期為31 d。

表1 基礎(chǔ)日糧組成及營養(yǎng)水平（以風(fēng)干為基礎(chǔ)）

1.2 發(fā)酵飼料制備 發(fā)酵飼料采用菌酶協(xié)同發(fā)酵生產(chǎn)工藝。復(fù)合菌包括植物乳桿菌、枯草芽孢桿菌和釀酒酵母等；酶制劑包括纖維素酶、木聚糖酶、β-葡聚糖酶、β-甘露聚糖酶等。具體制作步驟：將復(fù)合菌按比例接種至37℃的紅糖水中, 活化12 h以上。將活化好的菌液和酶制劑按比例依次添加至配合飼料（玉米35%、豆粕16%、麥麩15%、米糠10%、花生殼22%、石粉1.5%、食鹽0.5%）中, 用溫水調(diào)整飼料含水量至30%, 混合均勻后裝入帶有單向排氣閥的呼吸膜袋中, 37℃密閉發(fā)酵3 d以上, 發(fā)酵飼料的營養(yǎng)水平見表2。

表2 發(fā)酵飼料組成及營養(yǎng)水平（以風(fēng)干為基礎(chǔ)） %

1.3 飼養(yǎng)管理 試驗(yàn)前對(duì)兔舍和兔籠進(jìn)行清洗、消毒、晾干, 按照常規(guī)程序免疫, 自然通風(fēng)。每天09：00和18：00飼喂兩次, 自由采食, 自由飲水。

1.4 指標(biāo)測(cè)定與方法

1.4.1 生長(zhǎng)性能 分別于正式期第1天和最后1 d上午8點(diǎn)準(zhǔn)時(shí)稱取各組肉兔的空腹體重, 根據(jù)初重和末重計(jì)算平均日增重（ADG）；每天稱取飼料總量及當(dāng)天食槽內(nèi)的飼料余量, 準(zhǔn)確記錄各處理組及各個(gè)重復(fù)的采食量, 用以計(jì)算平均日采食量（ADFI）。

計(jì)算公式如下：

總增重/g=末重（g）-初重（g）；

平均日增重（ADG, g）=總增重（g）/試驗(yàn)天數(shù)（d）；

平均日采食量（ADFI, g）=消耗飼料總量（g）/試驗(yàn)天數(shù)（d）；

料肉比（F/G）=平均日采食量（ADFI）/平均日增重（ADG）。

1.4.2 血清指標(biāo) 試驗(yàn)第31天早上8點(diǎn)稱重結(jié)束后, 對(duì)各處理試驗(yàn)肉兔進(jìn)行耳緣靜脈和后肢外側(cè)面小隱靜脈采血約5 mL, 室溫下靜置1 h, 待血樣凝固收縮后, 采用3000 r/min離心5 min, 取上層血清-20℃保存?zhèn)溆?。血清中葡萄糖、總蛋白、白蛋白、球蛋白、尿素氮、總膽固醇、鈣、磷含量及谷丙轉(zhuǎn)氨酶、堿性磷酸酶、谷氨酰轉(zhuǎn)移酶的活性使用Catalyst One全自動(dòng)動(dòng)物生化分析儀測(cè)定。

1.5 統(tǒng)計(jì)分析 試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS13.0軟件進(jìn)行單因素方差分析, 采用Duncan’s法進(jìn)行多重比較。結(jié)果用“平均值與標(biāo)準(zhǔn)誤”表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 發(fā)酵飼料對(duì)肉兔生長(zhǎng)性能的影響 由表3可知, 分別用5%和10%的發(fā)酵飼料等量替代肉兔基礎(chǔ)日糧, 飼喂31 d后發(fā)現(xiàn)肉兔平均日增重、平均日采食量和料肉比均無顯著變化（P＞0.05）, 但料肉比有降低趨勢(shì)。

表3 發(fā)酵飼料對(duì)肉兔生長(zhǎng)性能的影響

2.2 發(fā)酵飼料對(duì)肉兔血清生化指標(biāo)的影響 由表4可知, 處理組能顯著提高肉兔的血清白蛋白含量（P＜0.05）, 顯著降低血清谷氨酰轉(zhuǎn)移酶、膽固醇含量（P＜0.05）, 但5%和10%處理組之間差異不顯著（P＞0.05）。血糖、血尿素氮、谷丙轉(zhuǎn)氨酶、堿性磷酸酶、血鈣和血磷等指標(biāo)在對(duì)照組和處理組之間差異均不顯著（P＞0.05）, 其中血尿素氮有下降的趨勢(shì), 血鈣和血磷有上升的趨勢(shì)。

表4 發(fā)酵飼料對(duì)肉兔血清生化指標(biāo)的影響

3 討論

3.1 發(fā)酵飼料對(duì)肉兔生長(zhǎng)性能的影響 益生菌和酶協(xié)同發(fā)酵的效果優(yōu)于益生菌或酶單獨(dú)發(fā)酵的效果, 能使大分子物質(zhì)降解得更加徹底, 產(chǎn)生更多的易被動(dòng)物消化吸收的酸不溶蛋白、寡肽、小肽、氨基酸、寡糖、單糖等營養(yǎng)物質(zhì), 發(fā)酵效率更高, 既縮短了發(fā)酵周期, 又能利用益生菌抵抗有害菌, 如大腸桿菌、沙門氏菌和金黃色葡萄球菌等的影響, 改善了動(dòng)物腸道內(nèi)的微生態(tài)環(huán)境, 提高了動(dòng)物免疫力, 減少了疾病的發(fā)生, 對(duì)畜禽生長(zhǎng)性能具有良好的促進(jìn)作用（孫智媛等, 2021；谷子林等, 2020）。大量研究報(bào)道, 在肉兔飼日糧中添加發(fā)酵飼料均顯著提高肉兔的平均日增重, 降低料肉比（張旭暉等, 2022；齊聰鹽等, 2017；周永倫, 2009、徐興軍等, 2006）；但本試驗(yàn)中5%處理組和10%處理組與對(duì)照組相比, 采食量、平均日增重、料肉比均無顯著差異（P＞0.05）。原因可能是本試驗(yàn)使用的育肥肉兔均已超過70日齡, 胃腸道發(fā)育完善, 肉兔盲腸非常發(fā)達(dá), 盲腸內(nèi)有大量的有益微生物, 能充分分解小腸未完全消化的食糜, 并且能維持正常的腸道微生態(tài)區(qū)系, 保持機(jī)體健康, 整個(gè)試驗(yàn)階段, 肉兔未發(fā)生腹瀉和發(fā)病現(xiàn)象。因此, 5%和10%發(fā)酵飼料替代量并未對(duì)肉兔生長(zhǎng)性能產(chǎn)生明顯影響。

3.2 發(fā)酵飼料對(duì)肉兔血清生化指標(biāo)的影響 血清生化指標(biāo)是衡量動(dòng)物生理機(jī)能和健康狀況的重要指標(biāo)。血清總蛋白和白蛋白質(zhì)水平反映了動(dòng)物機(jī)體蛋白質(zhì)分解與合成代謝情況, 代謝增強(qiáng)時(shí), 血液中需要相對(duì)較多的白蛋白運(yùn)輸營養(yǎng)物質(zhì)和代謝廢物（趙國先等, 1997；Malmlof, 1988）。本試驗(yàn)對(duì)照組和兩個(gè)試驗(yàn)組血清總蛋白無顯著差異（P＞0.05）, 但白蛋白有顯著差異（P＜0.05）, 表明添加發(fā)酵飼料增強(qiáng)了肉兔對(duì)蛋白質(zhì)的代謝情況。血清尿素氮是動(dòng)物機(jī)體氨基酸分解后的產(chǎn)物, 氨基酸利用率越高, 其含量越低（WANG等, 2011；Borg等, 1987）。本試驗(yàn)中, 處理組和對(duì)照組血清尿素氮差異不顯著（P＞0.05）, 但呈下降趨勢(shì), 一定程度上反映了發(fā)酵飼料可提高肉兔的氨基酸利用率和氮沉積率。堿性磷酸酶（AKP）由成骨細(xì)胞產(chǎn)生, 主要分布于骨化的骨組織中, 在生理性骨骼生長(zhǎng)發(fā)育期, 血清堿性磷酸酶的活性變化顯著（陳束春等, 1999）。本試驗(yàn)使用的是育肥后期的肉兔, 日齡超過70 d, 結(jié)果顯示, 堿性磷酸酶活性與對(duì)照組相比均無顯著差異（P＞0.05）。谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）是反映肝細(xì)胞受損程度最靈敏的指標(biāo), 肝細(xì)胞受到損傷時(shí), 谷丙轉(zhuǎn)氨酶被釋放到血液中, 會(huì)引起血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶偏高（Zhao等, 2017）。本試驗(yàn)結(jié)果顯示, 對(duì)照組和試驗(yàn)組血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶含量差異不顯著（P＞0.05）, 表明肉兔肝臟功能均未受到影響。谷酰胺轉(zhuǎn)移酶被認(rèn)為是機(jī)體發(fā)生炎癥反應(yīng)和氧化應(yīng)激反應(yīng)的標(biāo)記物（禹潔, 2021）。本試驗(yàn)結(jié)果顯示, 5%處理組和10%處理組血清中谷酰胺轉(zhuǎn)移酶含量均顯著低于對(duì)照組（P＜0.05）, 原因是優(yōu)良的乳酸菌株具有很強(qiáng)的抗氧化能力, 進(jìn)入動(dòng)物體內(nèi)后, 能在一定程度上避免機(jī)體氧化損傷。血清膽固醇主要來源于體內(nèi)合成和從食物中獲取, 能反映體內(nèi)脂質(zhì)代謝情況。本試驗(yàn)結(jié)果顯示, 處理組能顯著降低肉兔血清中膽固醇的含量（P＜0.05）, 原因可能是一些特定的乳酸菌, 如植物乳桿菌、發(fā)酵乳桿菌具有降解血清膽固醇含量的功能（鄭志瑤等, 2020）。本試驗(yàn)所用菌種主要是乳酸菌, 即植物乳桿菌（活菌數(shù)＞1.0×109CFU/g）, 使用具有單向排氣閥的呼吸膜袋發(fā)酵, 發(fā)酵3 d后呼吸膜袋接近真空狀態(tài), 有利于植物乳桿菌的大量繁殖。對(duì)照組和試驗(yàn)組血清中的鈣磷含量差異均不顯著（P＜0.05）, 但有升高趨勢(shì), 且10%處理組的鈣磷含量最高。原因可能是乳酸菌在發(fā)酵飼料過程中產(chǎn)生的乳酸、乙酸、丙酸等有機(jī)酸會(huì)使腸內(nèi)pH降低, 使鈣磷處于離子狀態(tài), 更有利于鈣磷吸收。

4 結(jié)論

用發(fā)酵全價(jià)飼料等量替代5%和10%的肉兔基礎(chǔ)日糧, 對(duì)育肥后期肉兔生長(zhǎng)性能無顯著影響, 但料肉比有下降趨勢(shì), 且能增強(qiáng)機(jī)體蛋白質(zhì)代謝。下一步研究應(yīng)側(cè)重于改善肉兔肉品質(zhì)方向。