李建珍 張 倩

（1.山西鐵道職業(yè)技術(shù)學(xué)院 山西太原 030013；2.山西錦爍生物醫(yī)藥科技有限公司 山西晉中 030600）

我國(guó)蔬菜種植產(chǎn)業(yè)龐大，種類繁多，病蟲害問(wèn)題日益嚴(yán)重，為了防止病蟲害帶來(lái)的經(jīng)濟(jì)損失，多數(shù)種植戶采用化學(xué)防治法——噴灑農(nóng)藥，導(dǎo)致農(nóng)藥亂用、濫用的現(xiàn)象屢禁不止，增大了農(nóng)藥殘留的風(fēng)險(xiǎn)。為保障食品安全，我國(guó)每年進(jìn)行食品安全國(guó)家監(jiān)督抽檢，從食安通平臺(tái)查詢2021年度的全國(guó)食品抽檢信息與分析可以看出，食用農(nóng)產(chǎn)品-蔬菜的農(nóng)藥殘留量不合格率偏高，其中腐霉利的不合格率最高。

腐霉利又稱速克靈，是一種低毒內(nèi)吸性殺菌劑，用于油菜、黃瓜、白菜、蘿卜、茄子等作物，防治灰霉病和菌核病及灰星病、花腐病、褐腐病、蔓枯病等[1-2]。腐霉利由于噴灑后兼有保護(hù)和治療作用，持效期長(zhǎng)，高效低毒，因而得到了廣泛應(yīng)用，導(dǎo)致在日常農(nóng)產(chǎn)品-蔬菜檢測(cè)中時(shí)有檢出[3-4]。蔬菜上殘留的腐霉利通過(guò)食物鏈進(jìn)入人體，代謝為二氯苯胺與其他芳香胺類物質(zhì)，對(duì)機(jī)體有毒性，從而危害人體健康與安全[5]。

鑒于腐霉利殘留對(duì)消費(fèi)者的危害，歐盟、美國(guó)、日本等均對(duì)農(nóng)產(chǎn)品中腐霉利的最大殘留量作了限量規(guī)定[6]。我國(guó)也在《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中農(nóng)藥最大殘留限量》[7]（GB2763—2021）中規(guī)定了腐霉利在蔬菜中的最大殘留量，同時(shí)注明了蔬菜中腐霉利的檢測(cè)方法有GB 23200.8—2016、GB 23200.113—2018、NY/T 761—2008，包括氣相色譜法和氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法。氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法綜合了氣相色譜的高分離和質(zhì)譜檢測(cè)器的強(qiáng)定性能力，具有準(zhǔn)確定性和定量的優(yōu)異性，消除了由于未純化的雜質(zhì)峰與目標(biāo)物保留時(shí)間重疊導(dǎo)致的假陽(yáng)性問(wèn)題[8]。由于黃瓜既可以作為蔬菜也可以作為水果鮮食，消費(fèi)者需求量大，且Martínez Vidal等（2004）建議將黃瓜作為蔬菜的通用基質(zhì)[9]。因此，本研究以黃瓜為基質(zhì)，參照GB23200.113—2018[10]在傳統(tǒng)QuEChERS前處理的基礎(chǔ)上，通過(guò)優(yōu)化前處理?xiàng)l件和凈化劑用量建立了氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用測(cè)定黃瓜中腐霉利的方法。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

黃瓜試樣（購(gòu)自太原市美特好超市）；腐霉利農(nóng)藥純度標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（標(biāo)準(zhǔn)值99.8%；使用前，在P2O5干燥器中干燥48 h以上，以除去水分；中國(guó)計(jì)量科學(xué)研究院）；環(huán)氧七氯（純度99.5%，北京曼哈格生物）；乙腈（色譜純，德國(guó)默克）；乙酸乙酯（色譜純，德國(guó)默克）；無(wú)水硫酸鎂（分析純，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）；鹽包（4g MgSO4、1g NaCl、1g TSCD、0.5 g DHS，迪馬科技）；乙二胺-N-丙基硅烷化硅膠（PSA，40 μm～60 μm，天津博納艾杰爾科技有限公司）；石墨化炭黑（GCB，40 μm～120 μm，天津博納艾杰爾科技有限公司）；微孔濾膜（有機(jī)相，13mm×0.22 μm，天津市津騰實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）。

1.2 儀器設(shè)備

TSQ9000型氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀，配有電子轟擊源（EI），賽默飛世爾科技有限公司；JJ2B高速組織搗碎勻漿機(jī)，上海達(dá)洛科學(xué)儀器有限公司；JA12002電子天平，上海衡平儀器儀表有限公司；HNMTC-100恒溫混勻儀（制冷型），上海達(dá)洛科學(xué)儀器有限公司；3016R冷凍離心機(jī)，安徽中科中佳公司；VM-T1多功能定時(shí)渦旋混勻器，上海泰坦科技股份有限公司；HGC-12D氮吹儀，天津市恒奧科技發(fā)展有限公司。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

腐霉利標(biāo)準(zhǔn)溶液：準(zhǔn)確稱取0.001 g腐霉利標(biāo)準(zhǔn)品，用正己烷溶解、定容至10 mL，搖勻，即制得100 μg/mL的腐霉利標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。準(zhǔn)確移取1.00 mL濃度為100 μg/mL的腐霉利標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液至100 mL容量瓶中，用乙酸乙酯定容至刻度，即制得1 μg/mL的腐霉利標(biāo)準(zhǔn)中間液。再用乙酸乙酯逐級(jí)稀釋成腐霉利含量依次為5 ng/mL、10 ng/mL、20 ng/mL、30 ng/mL、50 ng/mL、100 ng/mL、500 ng/mL的標(biāo)準(zhǔn)系列溶液。

內(nèi)標(biāo)溶液：準(zhǔn)確稱取0.001 g環(huán)氧七氯用乙酸乙酯溶解后轉(zhuǎn)移至10 mL容量瓶中，定容混勻?yàn)閮?nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液。內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備溶液用乙酸乙酯稀釋至5 mg/L為內(nèi)標(biāo)溶液。

基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：空白基質(zhì)溶液氮?dú)獯蹈?，加?0 μL內(nèi)標(biāo)溶液，加入1 mL相應(yīng)質(zhì)量濃度的腐霉利標(biāo)準(zhǔn)系列溶液復(fù)溶，過(guò)微孔濾膜，待用。

1.3.2 樣品制備及前處理

稱取10 g試樣（精確至0.01 g）于50 mL塑料離心管中，加入10 mL乙腈、鹽包，蓋上離心管蓋，劇烈震蕩1 min后4 200 r/min離心5 min。吸取5 mL上清液加到885 mg硫酸鎂、150 mg PSA及15 mg GCB中，渦旋混勻1 min后4 200 r/min離心5 min。準(zhǔn)確移取2 mL上清液于10 mL試管中，40 ℃水浴中氮?dú)獯抵两?。加?0 μL內(nèi)標(biāo)溶液，加入1 mL乙酸乙酯復(fù)溶，過(guò)微孔濾膜，用于測(cè)定。

1.3.3 儀器條件

色譜柱：SH-Rxi-17Sil MS（30 m×0.25 μm×0.25 mm）。色譜柱溫度：60 ℃保持1 min，然后以35 ℃/min程序升溫至125 ℃，再以30 ℃/min升溫至300 ℃，保持15 min。載氣：氦氣。流速：1.2 mL/min。進(jìn)樣口溫度：280 ℃。進(jìn)樣量：1 μL。進(jìn)樣方式：不分流進(jìn)樣。EI電子轟擊源：70 eV。離子源溫度：320 ℃。傳輸線溫度：280 ℃。溶劑延遲：3 min。檢測(cè)方式：多離子反應(yīng)監(jiān)測(cè)（條件見表1）。定量方法：峰面積內(nèi)標(biāo)法。

表1 腐霉利多離子反應(yīng)監(jiān)測(cè)條件

2 結(jié)果與分析

2.1 方法的優(yōu)化

2.1.1 提取條件的優(yōu)化

乙腈對(duì)大多數(shù)農(nóng)藥具有良好的提取效率，且萃取液中蛋白質(zhì)和脂質(zhì)等干擾物含量低，因此本研究采用乙腈為提取溶劑。當(dāng)腐霉利的添加量為0.05 mg/kg時(shí)，按上述前處理步驟進(jìn)行2次平行測(cè)定，腐霉利的回收率僅為46.98%～54.83%。試驗(yàn)過(guò)程中發(fā)現(xiàn)，加入鹽包后放熱，離心管溫度比較高，而腐霉利通常用于低溫高濕的環(huán)境，于是采用將乙腈提前冷凍后再加入提取，回收率顯著提高，測(cè)定結(jié)果見圖1。

圖1 乙腈和冷凍乙腈對(duì)腐霉利回收率的影響（n=2）

2.1.2 凈化劑的用量?jī)?yōu)化

QuEChERS方法常用乙二胺-N-丙基硅烷化硅膠（PSA）和石墨化炭黑（GCB）混合吸附劑去除提取液中的共萃基質(zhì)。PSA可從非極性樣品中去除極性干擾物質(zhì)，如糖類和脂類等，但對(duì)色素的去除能力有限[11]。GCB主要用來(lái)去除具有平面結(jié)構(gòu)的類胡蘿卜素、葉綠素等色素，多酚類和類固醇等物質(zhì)[12]。鑒于PSA去除干擾物質(zhì)的能力有限，GCB對(duì)部分農(nóng)藥有較強(qiáng)的吸附能力，且這兩種吸附劑價(jià)格昂貴，本著“綠色化學(xué)”的原則，本研究對(duì)PSA和GCB的用量進(jìn)行優(yōu)化。

（1）PSA用量?jī)?yōu)化

在腐霉利的添加量為0.05 mg/kg時(shí)，按照上述前處理步驟，加入冷凍乙腈提取，改變PSA用量（分別為25 mg、50 mg、100 mg、150 mg、200 mg、250 mg）進(jìn)行加標(biāo)回收率測(cè)定（每個(gè)用量水平進(jìn)行2次平行測(cè)定）。檢測(cè)結(jié)果見圖2，從圖中可以看出，當(dāng)PSA用量為100 mg、150 mg、200 mg時(shí)回收率在93.53%～103.02%之間，滿足檢測(cè)過(guò)程中的加標(biāo)回收率要求，為了節(jié)約成本，本研究確定PSA用量為100 mg。

圖2 PSA用量對(duì)腐霉利回收率的影響（n=2）

（2）GCB用量?jī)?yōu)化

在腐霉利的添加量為0.05 mg/kg時(shí)，按照上述前處理步驟，加入冷凍乙腈提取，PSA用量為100 mg，改變GCB用量（分別為5 mg、10 mg、20 mg、30 mg、40 mg、50 mg）進(jìn)行加標(biāo)回收率測(cè)定。檢測(cè)結(jié)果表明，隨著GCB用量的增加，經(jīng)過(guò)前處理的樣品溶液顏色逐漸變淺；當(dāng)GCB用量為5 mg時(shí)，回收率為45.23%～53.67%，且測(cè)定圖譜雜質(zhì)峰較多；當(dāng)GCB用量為20 mg、30 mg、40 mg時(shí)，測(cè)定圖譜雜質(zhì)峰明顯減少，回收率在90.26%～98.26%之間，滿足檢測(cè)過(guò)程中的加標(biāo)回收率要求；當(dāng)GCB用量增加至50 mg時(shí)，回收率降低，可能是由于GCB的吸附作用。綜合考慮，本研究確定GCB用量為20 mg。

2.2 方法的線性范圍與檢出限

將配制好的腐霉利標(biāo)準(zhǔn)系列溶液，在上述儀器條件下進(jìn)行測(cè)定，以目標(biāo)物峰面積為縱坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)系列質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，曲線方程為：

y=2.098649+1.900245x，r2=0.999 93。根據(jù)3倍信噪比對(duì)應(yīng)的腐霉利含量計(jì)算方法檢出限，10倍信噪比對(duì)應(yīng)的腐霉利含量計(jì)算方法定量限，得出稱樣量為10 g時(shí)該方法的檢出限為0.002 5 mg/kg，定量限為0.01 mg/kg。

2.3 準(zhǔn)確度與精密度試驗(yàn)

根據(jù)方法定量限、GB2763—2021中的限量要求和GB/T 27404—2008中方法驗(yàn)證的要求，在黃瓜樣品（本底值為0 mg/kg）中添加低（0.01 mg/kg）、中（0.05 mg/kg）、高（2 mg/kg）3個(gè)濃度水平的腐霉利標(biāo)準(zhǔn)溶液，按照本研究?jī)?yōu)化的提取、凈化前處理過(guò)程，在設(shè)定好的儀器條件下進(jìn)行加標(biāo)回收率測(cè)定，每個(gè)濃度水平進(jìn)行6次平行試驗(yàn)，分析其準(zhǔn)確度與精密度，結(jié)果見表2。

表2 加標(biāo)回收率及精密度結(jié)果分析（n=6）

由表2數(shù)據(jù)分析可以看出，黃瓜中腐霉利農(nóng)藥在0.01 mg/kg～2 mg/kg添加水平下，回收率為92.19%～104.43%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）在2.32%～3.94%之間，表明該方法測(cè)定黃瓜中的腐霉利符合GB/T 27404—2008的規(guī)定，準(zhǔn)確度和精密度良好。

3 結(jié)論

本研究參照GB23200.113—2018，通過(guò)優(yōu)化前處理過(guò)程，建立了QuEChERS結(jié)合氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用測(cè)定黃瓜中腐霉利的方法。試驗(yàn)結(jié)果表明，在5 ng/mL～500 ng/mL范圍內(nèi)，線性良好，取樣量為10 g時(shí)該方法的檢出限為0.002 5 mg/kg，定量限為0.01 mg/kg，加標(biāo)回收率為92.19%～104.43%，RSD在2.32%～3.94%之間，能夠滿足黃瓜中腐霉利的快速、準(zhǔn)確、批量檢測(cè)，可以為相關(guān)機(jī)構(gòu)腐霉利的檢測(cè)提供參考。