熊曉玲 王 盼 覃小艷

湖北省麻城市人民醫(yī)院病理科 438300

結(jié)直腸癌是居全球第3位的惡性腫瘤，并且隨著近年來人們飲食結(jié)構(gòu)改變，該病發(fā)病率逐年增加[1]。該病早期癥狀不明顯，隨著病情的發(fā)展會出現(xiàn)血便、腹瀉、局部腹痛，但是診斷時往往失去最佳治療時機，影響預(yù)后效果[2]。另外，結(jié)直腸癌的發(fā)生、發(fā)病機制尚不明確，深入了解其發(fā)病機制，尋找有力的靶點成為新的研究熱點。絲/蘇氨酸激酶-1(Pim-1)是一種誘導(dǎo)癌細胞惡化、加速增殖、抑制凋亡的原癌基因[3]；硫酸酯酶1(SULF1)能夠特異性去除細胞表面硫酸肝素蛋白多糖的硫酸基團[4]；上皮型黏附素(E-cadherin)是一種鈣黏附素，能夠維持細胞間連接，參與細胞內(nèi)信號傳導(dǎo)[5]。鑒于此，本文為了探究Pim-1、SULF1、E-cadherin在結(jié)直腸癌組織中的表達意義，選擇180例結(jié)直腸癌患者進行分析,現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2018年1月—2019年8月我院收治的180例結(jié)直腸癌患者作為觀察對象。其中男98例,女82例；年齡32～72(52.36±10.18)歲；腫瘤部位：結(jié)腸92例，直腸88例；病理類型: 黏液細胞癌31例，乳頭狀腺癌69例，管狀腺癌80例；分化程度：低60例，中104例，高16例；TNM分期：Ⅰ期19例，Ⅱ期69例，Ⅲ期81例，Ⅳ期11例；浸潤深度：T1 12例，T2 59例，T3 91例，T4 18例。

1.2 選擇標準 (1)納入標準：①依據(jù)《中國結(jié)直腸腫瘤早診篩查策略專家共識》[6]，并經(jīng)活檢、病理學(xué)檢查確診為結(jié)直腸癌者；②預(yù)計生存期在6個月以上者；③年齡30～75歲；④浸潤深度：T1～T4；⑤知情本次研究者。排除標準：①無法與醫(yī)護人員正常溝通者；②1周內(nèi)有特殊用藥史者；③伴有心腦血管疾病，肝、腎功能不全者；④伴有其他惡性腫瘤者。

1.3 試劑及藥品 單克隆兔pim-1抗體購自美國Santa Cruz公司、多克隆兔E-cadherin抗體購自北京奧博星生物技術(shù)有限責(zé)任公司，多克隆鼠SULF1抗體購自武漢博士德生物工程有限公司，二氨基聯(lián)苯胺(DBA)顯色試劑盒(批號180102)及SP試劑盒(批號171207)均購于北京奧博星生物技術(shù)有限責(zé)任公司。

1.4 方法 用10%甲醛固定結(jié)直腸癌和癌旁組織標本，用石蠟包埋后，切4μm薄片，烘干、脫蠟后滴加單克隆兔Pim-1抗體、多克隆兔E-cadherin抗體、多克隆鼠SULF1抗體。然后進行蘇木素染色。以自配制磷酸鹽緩沖液代替一抗做陰性對照，用已知標志物的陽性組織切片為陽性對照，具體檢測操作步驟嚴格按照所用試劑盒的操作說明進行。

1.5 觀察指標 (1)Pim-1、SULF1、E-cadherin表達情況：Pim-1表達的陽性細胞判定標準：細胞質(zhì)染為淡黃色至棕褐色；E-cadherin表達的陽性細胞判定標準：細胞核或細胞漿中出現(xiàn)棕黃色顆粒，在400倍鏡下，陽性細胞<25%判定為陰性，≥25%判定為陽性；SULF1表達的陽性細胞判定標準：細胞核或細胞漿中出現(xiàn)棕黃色顆粒，在400倍鏡下，陽性細胞<50%判定為陰性，≥50%判定為陽性。(2)臨床病理參數(shù)：性別、年齡、腫瘤直徑、腫瘤部位、分化程度、TNM分期、浸潤深度。(3)統(tǒng)計Pim-1、SULF1、E-cadherin陽性和陰性表達結(jié)直腸癌患者24個月生存狀況，并利用Prism軟件繪制生存曲線。

2 結(jié)果

2.1 Pim-1、SULF1、E-cadherin表達情況 相比癌旁組織，結(jié)直腸癌組織中Pim-1、SULF1陽性率明顯更高，E-cadherin陽性率明顯更低(P<0.05)。見表1。

表1 Pim-1、SULF1、E-cadherin表達情況比較[n(%)]

2.2 Pim-1、SULF1、E-cadherin表達與結(jié)直腸癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系分析 在結(jié)腸癌組織中，Pim-1、SULF1陽性表達率隨著腫瘤直徑增加、分化程度降低、TNM分期增加、浸潤深度增加而增加；E-cadherin陽性表達率隨著腫瘤直徑增加、分化程度降低、TNM分期增加、浸潤深度增加而降低(P<0.05)。見表2。

表2 Pim-1、SULF1、E-cadherin表達與結(jié)直腸癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系分析[n(%)]

2.3 Pim-1、SULF1、E-cadherin陽性和陰性表達結(jié)直腸癌患者24個月生存狀況比較 結(jié)直腸癌患者24個月生存率為81.67%(147/180)，其中Pim-1陽性表達患者24個月生存率為75.00%(93/124)，明顯低于陰性表達患者的96.43%(54/56)；SULF1陽性患者24個月生存率為71.96%(77/107)，明顯低于陰性表達患者的95.89%(70/73)；E-cadherin陽性表達患者24個月生存率為100.00%(32/32)，明顯高于陰性表達患者的77.70%(115/148)(P<0.05)。見圖1～3。

圖1 結(jié)直腸癌患者Pim-1陽性與陰性表達生存曲線

圖2 結(jié)直腸癌患者SULF1陽性與陰性表達生存曲線

圖3 結(jié)直腸癌患者E-cadherin陽性與陰性表達生存曲線

3 討論

結(jié)直腸癌是來源于結(jié)直腸黏膜的惡性腫瘤，發(fā)病與生活方式、遺傳、結(jié)直腸腺瘤等關(guān)系密切[7]。并且該病發(fā)病過程較復(fù)雜，且有效的治療靶點尚無確定。目前臨床上治療結(jié)直腸癌患者的關(guān)鍵在于改善患者生活質(zhì)量，延長生存周期。同時大量研究報道[8-9]，結(jié)直腸癌的發(fā)生、轉(zhuǎn)移及預(yù)后與多種生物指標相關(guān)。

Pim-1不僅能夠促使凋亡分子Bad發(fā)生磷酸化，喪失活性，加速腫瘤細胞增殖，而且能夠調(diào)節(jié)細胞的增殖周期，增強細胞的抗凋亡作用[10]。硫酸肝素蛋白多糖存在于細胞表面，能夠促進腫瘤新生血管生成，能夠促進癌細胞轉(zhuǎn)移，促進癌組織生長，而SULF1能夠特異性去除細胞表面硫酸肝素蛋白多糖的硫酸基團，提高硫酸肝素蛋白多糖的作用效果[11]。存在于人體非神經(jīng)上皮細胞的E-cadherin減少是惡性腫瘤轉(zhuǎn)移和擴散的關(guān)鍵[12]。故本文結(jié)果發(fā)現(xiàn)，相比癌旁組織，結(jié)直腸癌組織中Pim-1、SULF1陽性率明顯更高，E-cadherin陽性率明顯更低。分析原因，Pim-1陽性表達能夠增強細胞的抗凋亡，延長癌細胞生存周期；SULF1陽性報道能夠促進心血管生成，加速癌細胞轉(zhuǎn)移；E-cadherin表達減弱使得上皮細胞間的連接作用減弱，使細胞間出現(xiàn)松散，易于擴散和轉(zhuǎn)移。

另外，本文結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在結(jié)腸癌組織中，Pim-1、SULF1陽性表達率隨著腫瘤直徑增加、分化程度降低、TNM分期增加、浸潤深度增加而增加；E-cadherin陽性表達率隨著腫瘤直徑增加、分化程度降低、TNM分期增加、浸潤深度增加而降低。結(jié)直腸癌患者24個月生存率為81.67%，其中Pim-1陽性表達患者24個月生存率明顯低于陰性表達患者；SULF1陽性患者24個月生存率明顯低于陰性表達患者；E-cadherin陽性表達患者24個月生存率明顯高于陰性表達患者的。分析原因，Pim-1可有效抑制腫瘤細胞出現(xiàn)凋亡，明顯促進腫瘤細胞的增殖速度，且顯著性阻滯腫瘤細胞的分化和成熟過程；SULF1陽性報道能夠促進心血管生成，加速癌細胞轉(zhuǎn)移；E-cadherin的表達缺失會增加結(jié)直腸癌患者的死亡率，加速癌細胞轉(zhuǎn)移，影響預(yù)后。

綜上所述，Pim-1、SULF1、E-cadherin參與結(jié)直腸癌的發(fā)病，與患者臨床特征和預(yù)后密切相關(guān)。