李俊娜 韓曉亮 謝東文 趙根成

河南省安陽(yáng)市第五人民醫(yī)院綜合科 455000

布魯菌病是一種由布魯桿菌誘發(fā)的人和動(dòng)物共患的傳染疾病，且該疾病在全世界范圍內(nèi)皆存在廣泛分布，嚴(yán)重威脅人與動(dòng)物的公共衛(wèi)生及食品安全[1]。據(jù)相關(guān)研究表明，布魯菌能通過(guò)呼吸道、消化道以及皮膚黏膜入侵機(jī)體，可侵犯神經(jīng)、淋巴結(jié)、肝脾及骨關(guān)節(jié)等器官，患者常表現(xiàn)為體溫升高、多汗、乏力、關(guān)節(jié)疼痛、肝脾以及淋巴結(jié)腫大等[2]。此外，布魯菌病有著慢性化的傾向，且具有極高的致殘率。相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)，干擾素-γ(interferon-γ，IFN-γ)為布魯菌主要控制的關(guān)鍵因子，可通過(guò)與特異性受體結(jié)合，增強(qiáng)抵抗增生及病毒等能力；而白細(xì)胞介素-4(interleukin-4，IL-4)是免疫的應(yīng)答重要因子；可溶性T細(xì)胞免疫球蛋白黏蛋白3(T cell immunoglobulin and mucin-domain containing molecules family-3，Tim-3)主要存在于免疫細(xì)胞的表面，參與調(diào)節(jié)T細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答，同一些變態(tài)反應(yīng)以及自身免疫性病變的發(fā)生、發(fā)展存在一定的聯(lián)系[3-5]。但目前關(guān)于IFN-γ、IL-4及Tim-3與布魯菌病病情、治療效果的相關(guān)性研究甚少。鑒于此，本研究就IFN-γ、IL-4及Tim-3與布魯菌病病情、治療效果的相關(guān)性進(jìn)行研究分析，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2017年4月—2020年4月本院收治的布魯菌病患者87例，并將其歸為研究組。其中男56例，女31例，年齡11～70歲，平均年齡(41.56±11.49)歲；急性46例，慢性41例。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)所有患者均符合《布魯桿菌病診斷標(biāo)準(zhǔn)》中關(guān)于布魯菌的診斷標(biāo)準(zhǔn)；(2)試管凝集試驗(yàn)(SAT)滴度≥1∶100++；(3)所有患者家屬均知曉并同意本次研究，且簽署知情同意書(shū)。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)存在自身免疫性疾病、血液疾病者；(2)心、腦、肝、腎等臟器功能嚴(yán)重不全者；(3)存在精神疾患、意識(shí)障礙等依從性差的情況；(4)存在藥物過(guò)敏情況者或藥物不耐受者。另選取同期于我院體檢的健康志愿者75例，設(shè)為對(duì)照組，其中男43例，女32例，年齡22～78歲，平均年齡(43.29±12.41)歲。研究組與對(duì)照組一般資料比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，存在可比性。

1.2 方法 所有對(duì)象均在醫(yī)生協(xié)助下完善相關(guān)檢查，研究組在入院第2天、對(duì)照組在體檢當(dāng)日抽取空腹靜脈血5ml，3 000r/min，離心10min，離心半徑10cm，分離血清，置-80℃保存。IFN-γ、IL-4采用微量樣本多指標(biāo)流式蛋白定量技術(shù)測(cè)定(Cytometric Bead Array，CBA)，試劑盒由德國(guó)EUROIMMUN公司生產(chǎn)；Tim-3采用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)，儀器為美國(guó)貝克曼庫(kù)爾特全自動(dòng)免疫分析儀，試劑盒由福建太陽(yáng)生物技術(shù)公司生產(chǎn)；皆嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。并給予布魯菌患者利福平、多西環(huán)素、利福噴汀膠囊進(jìn)行治療，共治療9周。

1.3 觀察指標(biāo) (1)觀察并對(duì)比研究組和對(duì)照組IFN-γ、IL-4及Tim-3表達(dá)水平。(2)觀察并對(duì)比急性和慢性布魯菌病患者IFN-γ、IL-4及Tim-3表達(dá)水平。急性：病程在6個(gè)月以內(nèi)；慢性：病程超過(guò)6個(gè)月仍未痊愈。(3)觀察并對(duì)比不同治療效果的布魯菌病患者IFN-γ、IL-4及Tim-3表達(dá)水平：根據(jù)治療效果將其分為有效組和無(wú)效組，統(tǒng)計(jì)并對(duì)比兩組IFN-γ、IL-4及Tim-3表達(dá)水平。有效：經(jīng)治療后發(fā)熱、多汗、肌肉和關(guān)節(jié)疼痛、乏力等臨床表現(xiàn)完全消失或者較前明顯改善，行動(dòng)恢復(fù)，各項(xiàng)功能正常。無(wú)效：經(jīng)治療后發(fā)熱、多汗、肌肉和關(guān)節(jié)疼痛、乏力等臨床表現(xiàn)未見(jiàn)明顯改善，甚至出現(xiàn)加重現(xiàn)象。(4)采用多元Logistic回歸分析影響布魯菌病患者治療效果的危險(xiǎn)因素。

2 結(jié)果

2.1 研究組和對(duì)照組IFN-γ、IL-4及Tim-3表達(dá)水平比較 研究組IFN-γ水平低于對(duì)照組,IL-4及Tim-3水平高于對(duì)照組(P<0.05)。詳情見(jiàn)表1。

表1 研究組和對(duì)照組IFN-γ、IL-4及Tim-3表達(dá)水平比較

2.2 急性和慢性布魯菌病患者IFN-γ、IL-4及Tim-3表達(dá)水平比較 急性組IFN-γ水平低于慢性組,而IL-4及Tim-3水平高于慢性組(P<0.05)。詳情見(jiàn)表2。

表2 急性和慢性布魯菌患者IFN-γ、IL-4及Tim-3表達(dá)水平比較

2.3 有效組和無(wú)效組IFN-γ、IL-4及Tim-3表達(dá)水平比較 87例布魯菌病患者中，治療有效67例(77.01%)，治療無(wú)效20例(22.99%)。有效組IFN-γ水平高于無(wú)效組，IL-4及Tim-3水平低于無(wú)效組(P<0.05)，詳情見(jiàn)表3。

表3 有效組和無(wú)效組IFN-γ、IL-4及Tim-3表達(dá)水平比較

2.4 分析影響布魯菌病患者治療效果的危險(xiǎn)因素 經(jīng)Logistic回歸模型分析顯示，IFN-γ(異常降低)、IL-4(異常升高)、Tim-3(異常升高)是影響布魯菌病患者治療效果的獨(dú)立危險(xiǎn)因素(P<0.05)。詳情見(jiàn)表4。

表4 影響布魯菌病患者治療效果的危險(xiǎn)因素分析

3 討論

布魯菌是一類細(xì)胞內(nèi)的寄生菌，易于春秋季發(fā)病，可于吞噬細(xì)胞內(nèi)存活甚至繁殖[6-8]。布魯菌病感染患者于早期的急性期常伴有流感樣癥狀，此類癥狀往往是由細(xì)胞毒性免疫反應(yīng)誘發(fā)，若不予以及時(shí)治療，可能會(huì)使得病情拖延至慢性期，從而造成無(wú)法治愈的情況[9-10]。故對(duì)于布魯菌病應(yīng)予以及時(shí)有效的診斷與治療。此外，據(jù)相關(guān)研究表明，對(duì)于細(xì)胞內(nèi)細(xì)菌的保護(hù)性免疫取決于細(xì)胞因子間的相互作用以及T細(xì)胞亞群，其中最主要的為細(xì)胞免疫[11]。亦據(jù)Pnioar IO等[12]研究表明，對(duì)于布魯菌的保護(hù)性獲得免疫關(guān)聯(lián)到巨噬細(xì)胞中的T細(xì)胞依賴性激活，在T細(xì)胞中可使機(jī)體避免遭受布魯氏菌感染的以CD4+與CD8+為主?？梢?jiàn)，機(jī)體對(duì)布魯菌病的免疫可能包括激活淋巴及巨噬細(xì)胞以產(chǎn)生抗布魯菌活性的細(xì)胞因子。

IFN-γ是由Th1細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子，具有調(diào)節(jié)免疫及抑制腫瘤細(xì)胞增殖作用，可通過(guò)強(qiáng)化機(jī)體適應(yīng)性免疫及固有免疫，實(shí)現(xiàn)其抗腫瘤及抗病毒效應(yīng)[13-14]。據(jù)相關(guān)研究指出，IFN-γ能促使Th0向Th1分化，從而抑制Th2分化；IL-4是由T細(xì)胞分泌的因子，在免疫應(yīng)答過(guò)程中具有重要作用[15]。亦據(jù)相關(guān)研究指出，IL-4可促使Th0向Th2分化，從而抑制Th1。Th1/Th2細(xì)胞之間相互抑制、調(diào)節(jié)，協(xié)同維持機(jī)體的免疫穩(wěn)態(tài)[16]。本研究數(shù)據(jù)顯示，與對(duì)照組比較，研究組IFN-γ水平更低，IL-4水平更高，與Soumya等[17]報(bào)道結(jié)果相符，表明在布魯菌患者中IL-4水平呈升高趨勢(shì)，而IFN-γ水平呈下降趨勢(shì)。進(jìn)一步比較發(fā)現(xiàn)，急性組IFN-γ水平低于慢性組、IL-4水平高于慢性組，且有效組IFN-γ水平高于無(wú)效組、IL-4水平低于無(wú)效組。由此推測(cè)，在機(jī)體遭受到布魯氏菌感染的過(guò)程中，可能會(huì)存在Th1/Th2細(xì)胞的紊亂，形成Th2優(yōu)勢(shì)的免疫應(yīng)答，致使Th1細(xì)胞功能下調(diào)，從而引起細(xì)胞免疫遭到抑制，最終造成機(jī)體的持續(xù)感染。

Tim-3是第一個(gè)被發(fā)現(xiàn)的TIM家族的一員，其特定表達(dá)于輔助性T細(xì)胞上，是Th1型免疫應(yīng)答的負(fù)性調(diào)節(jié)劑，其通過(guò)與其配體半乳凝素-9結(jié)合內(nèi)能夠特異性的誘導(dǎo)Th1細(xì)胞凋亡，從而下調(diào)Th1免疫應(yīng)答，降低機(jī)體的免疫水平，從而促進(jìn)結(jié)核的發(fā)展[18-19]。本研究數(shù)據(jù)顯示，布魯菌病患者血清Tim-3表達(dá)水平明顯升高，與健康受檢者比較差異顯著，證實(shí)Tim-3可能與布魯菌病的發(fā)生發(fā)展有關(guān)，同時(shí)急性組Tim-3水平高于慢性組，且有效組Tim-3水平低于無(wú)效組，結(jié)果進(jìn)一步證實(shí)高Tim-3確實(shí)參與了布魯菌病患者的病情發(fā)展，與既往研究報(bào)道結(jié)果相似[20]。由此推測(cè)，在機(jī)體遭受到布魯氏菌感染的過(guò)程中，Tim-3可能參與了Th1/Th2細(xì)胞的免疫紊亂，使得Th1細(xì)胞的免疫功能下調(diào)，致使Th2細(xì)胞處于優(yōu)勢(shì)情況，從而抑制了細(xì)胞免疫，使得布魯菌出現(xiàn)免疫逃逸。為明確影響布魯菌病患者治療效果的危險(xiǎn)因素，本研究通過(guò)Logistic回歸模型分析，結(jié)果顯示，IFN-γ(異常降低)、IL-4(異常升高)、Tim-3(異常升高)是影響布魯菌病患者治療效果的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。

綜上所述，布魯菌病患者IFN-γ呈低表達(dá)，IL-4及Tim-3呈高表達(dá)，其可能參與了布魯菌病病情發(fā)生、發(fā)展的過(guò)程，檢測(cè)上述因子水平有助于評(píng)估治療效果。