龐金雪

（德州市陵城區(qū)婦幼保健院婦產(chǎn)科，山東 德州， 253500）

習慣性流產(chǎn)又有“復(fù)發(fā)性流產(chǎn)”之稱，臨床將妊娠不足28周、自然流產(chǎn)次數(shù)超過2次以及胎兒體質(zhì)量不足1 000 g的妊娠者稱為習慣性流產(chǎn)。遺傳因素、內(nèi)分泌失調(diào)等均都參與了該病的發(fā)生過程，但其中發(fā)病原因不明的患者，占60%，因此臨床就將其納入“不明原因復(fù)發(fā)性流產(chǎn)”。臨床研究發(fā)現(xiàn)，在維持正常妊娠過程中，母體免疫耐受、其他免疫調(diào)節(jié)具有至關(guān)重要的作用，同時封閉抗體還可以阻止免疫系統(tǒng)造成的損害。可見，實施淋巴細胞主動免疫治療效果顯著，可避免流產(chǎn)，提高妊娠率。

習慣性流產(chǎn)原因較為復(fù)雜，該病的發(fā)生與母體內(nèi)分泌、免疫、染色體等多方面因素密切相關(guān)，已有研究明確指出，造成習慣性流產(chǎn)的最主要因素是免疫因素，習慣性流產(chǎn)患者的免疫因素以封閉抗體缺乏最為典型和關(guān)鍵。因此現(xiàn)階段臨床對習慣性流產(chǎn)患者的封閉抗體缺乏情況，多采取淋巴細胞主動免疫療法，具體是指將淋巴細胞注入患者體內(nèi)，促使淋巴細胞反復(fù)刺激患者的免疫系統(tǒng)，促使人類抗白細胞抗原的生成，繼而合成滋養(yǎng)細胞交叉抗原封閉抗體，確保患者再次妊娠時封閉抗體可有效識別患者抗原并與之結(jié)合，有效阻斷母體免疫系統(tǒng)對胚胎的攻擊，保護其順利生長并發(fā)育。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2019年1月～2020年11月德州市陵城區(qū)婦幼保健院收治的60例不明原因習慣性流產(chǎn)患者為研究對象，通過隨機數(shù)表法分為對照組和觀察組，每組30例。對照組患者年齡20～39歲，平均年齡（29.14±3.85）歲；流產(chǎn)次數(shù)2～5次，平均流產(chǎn)次數(shù)（3.56±0.78）次；孕周6～20周，平均孕周（12.47±2.33）周。觀察組患者年齡20～38歲，平均年齡（29.56±3.56）歲；流產(chǎn)次數(shù)2～4次，平均流產(chǎn)次數(shù)（3.44±0.69）次；孕周5～20周，平均孕周（12.56±2.41）周。兩組患者一般資料經(jīng)比較，差異無統(tǒng)計學意義（＞0.05），具有可比性。所有患者和家屬對本研究內(nèi)容均知情，并簽署知情同意書，本研究經(jīng)過德州市陵城區(qū)婦幼保健院醫(yī)學倫理委員會批準。

1.2 納入與排除標準

納入標準：①無感染征象、中毒癥狀者；②符合習慣性流產(chǎn)的診斷標準；③精神狀態(tài)良好；④語言功能良好無交流障礙；⑤生命體征穩(wěn)定。

排除標準：①溝通、認知障礙；②合并其他免疫系統(tǒng)疾??；③伴有急慢性感染者；④生命體征不平穩(wěn)者；⑤呼吸衰竭；⑥合并呼吸系統(tǒng)疾病；⑦合并惡性腫瘤；⑧肝腎功能不全；⑨合并嚴重肺源性心臟病者；⑩合并代謝疾病或骨腫瘤者。

1.3 方法

對照組運用常規(guī)治療。治療前完善超聲、尿常規(guī)以及人絨毛膜促性腺激素（HCG）檢測，嚴格以檢查結(jié)果為準，取2 000 IU的HCG注射，1次/2周，直至患者妊娠12周后停止。同時肌肉注射20 mg黃體酮（生產(chǎn)企業(yè)：浙江仙琚制藥，國藥準字H33020828，規(guī)格：1 mL：20 mg×10支），1次/d，直至妊娠12周后停止。

觀察組運用聯(lián)合淋巴細胞主動免疫治療。抽取患者丈夫20 mL上肘靜脈血并加入抗凝劑，借助0.9%氯化鈉溶液（生產(chǎn)企業(yè)：安徽雙鶴藥業(yè)，國藥準字H20054037，規(guī)格：500 mL）沖洗淋巴細胞懸液，連續(xù)3次加入2 mL 0.9%氯化鈉溶液稀釋淋巴細胞（2.5×10/mL）。在其前臀內(nèi)側(cè)行放射狀注射，每3周注射1次，連續(xù)注射5次為1個療程。1個療程結(jié)束后展開封閉抗體檢測，若檢測為陰性者，繼續(xù)接受免疫治療，但是治療切勿超過2個療程，同時加用黃體酮治療，方式同對照組。

1.4 觀察指標

妊娠結(jié)局。主要觀察未受孕、流產(chǎn)以及妊娠成功率。妊娠成功率越高，表示患者妊娠結(jié)局越好。

血清因子及調(diào)節(jié)蛋白因子。主要對比重組干擾素（IFN-γ）、白細胞介素（IL-8）以及細胞表達分泌因子（RANTES）；治療前后患者空腹狀態(tài)下采集5 mL靜脈血給予離心處理（轉(zhuǎn)速2 500 r/min，離心10 min），取上清液后待檢，IL-8借助酶聯(lián)免疫吸附法測定，IFN-γ通過抗體夾心免疫PCR檢測，RANTES通過ELISA試劑盒（生產(chǎn)企業(yè)：上海通蔚生物，批號：TW15997）檢測。

自然殺傷（NK）細胞含量及T細胞亞群表達水平。T細胞亞群主要觀察CD3以及CD8。NK細胞含量檢測注意事項：靶細胞必須新鮮，且細胞存活率＞95%。比色時保持恒定環(huán)境溫度。LDH基質(zhì)液應(yīng)臨用前配制。治療前后患者空腹狀態(tài)下采集3 mL靜脈血，借助流式細胞儀對T細胞分化群展開檢測。

雌孕激素水平。主要觀察雌二醇、β-HCG以及孕酮。分別在治療前后采集患者空腹狀態(tài)下的血液標本給予離心處理（轉(zhuǎn)速2 500 r/min，離心10 min），取血清后通過放射免疫法進行測定。

血液流變學指標。主要觀察紅細胞壓積（HCT）、血漿黏度（PV）以及紅細胞沉降率（ESR）和紅細胞電泳時間（EEP）。分別在治療前后采用粘度計、流式細胞儀以及電泳儀展開以上各指標的檢測工作。

1.5 統(tǒng)計學分析

2 結(jié)果

2.1 兩組患者妊娠結(jié)局比較

觀察組妊娠成功率高達96.66%，對照組僅為76.66%，觀察組妊娠結(jié)局較好，差異有統(tǒng)計學意義（＜0.05）。見表1。

2.2 兩組患者血清因子及調(diào)節(jié)蛋白因子水平比較

治療后，觀察組患者IFN-γ表達較低，IL-8、RANTES表達較高，與對照組比較，差異有統(tǒng)計學意義（＜0.05）。見表2 。

2.3 兩組患者NK細胞含量及T細胞亞群表達水平比較

治療后，觀察組患者NK細胞含量較低，CD3、CD8水平較高，與對照組比較，差異有統(tǒng)計學意義（＜0.05）。見表3。

2.4 兩組患者雌孕激素指標比較

治療后，觀察組患者雌二醇、β-HCG以及孕酮水平明顯提高，與對照組比較，差異有統(tǒng)計學意義（＜0.05）。見表4。

2.5 兩組患者治療前后血液流變學指標比較

治療后，觀察組患者HCT、PV、ESR、EEP等改善幅度較大，與對照組比較，差異有統(tǒng)計學意義（＜0.05）。見表5。

3 討論

習慣性流產(chǎn)發(fā)病機制較為復(fù)雜，而女性在出現(xiàn)習慣性流產(chǎn)后，對于抗原識別能力大幅較低，而機體在受精卵種植和著床過程中也會出現(xiàn)免疫排斥現(xiàn)象。經(jīng)研究證實，母體若無法分泌充足的封閉抗體，會直接影響胎兒的抗體調(diào)節(jié)能力，導(dǎo)致其降低促使妊娠失敗。臨床根據(jù)病因和發(fā)病機制，將習慣性流產(chǎn)分為免疫型、自身免疫型。其中免疫型為不明原因習慣性流產(chǎn)，而父母雙方白細胞抗原的相容性較高，父方抗原無法準確刺激母體，會造成封閉抗體缺乏，因此不明原因習慣性流產(chǎn)也成為了現(xiàn)階段臨床研究的重點方向。

現(xiàn)階段臨床治療習慣性流產(chǎn)，補充黃體酮是常用治療方法，使用黃體酮后會直接刺激卵巢黃體，促使其分泌孕激素，確保受精卵正常著床，繼而發(fā)揮自身免疫抑制作用，降低免疫介質(zhì)水平、降低母體免疫反應(yīng)。但隨著臨床研究的深入，發(fā)現(xiàn)黃體酮常規(guī)治療效果欠佳，遠期治療效果較低，且長期、大量用藥會造成患者出現(xiàn)不同程度的不良反應(yīng)。

淋巴細胞主動免疫治療是指提取父系外周血淋巴細胞并將其注入母體，誘導(dǎo)封閉型抗體產(chǎn)生繼而提高母體免疫耐受程度，促使胚胎發(fā)育的同時糾正免疫紊亂現(xiàn)象，改善妊娠結(jié)局的同時提高妊娠成功率。此研究中的觀察組，妊娠成功率高達96.67%，對照組僅76.67%，兩組數(shù)據(jù)對比，差異有統(tǒng)計學意義（＜0.05）。分析原因：淋巴細胞主動免疫治療后女性妊娠會恢復(fù)正常，繼而阻斷混合淋巴細胞的反應(yīng)過程，確保并維持正常妊娠。臨床研究發(fā)現(xiàn)，對此類患者進行淋巴細胞主動免疫治療，患者封閉抗體陽性率高達70.0%，同時還可明顯增加患者免疫耐受反應(yīng)。IFN-γ若呈高反應(yīng)表達，會加強巨噬細胞的抗原提效應(yīng)，促使胚囊滋養(yǎng)細胞凋亡。T 淋巴細胞免疫紊亂，會強化細胞免疫耐受反應(yīng)，而RANTES會加強淋巴細胞免疫平衡，繼而緩解排斥反應(yīng)。觀察組患者經(jīng)治療后IFN-γ表達、NK細胞含量較低，IL-8、RANTES 表達以及CD3、CD8水平較高，和對照組對比，差異有統(tǒng)計學意義（＜0.05）。證實了淋巴細胞主動免疫治療不明原因習慣性流產(chǎn)患者的效果和價值。

隨著臨床研究的深入，發(fā)現(xiàn)并證實了復(fù)發(fā)性流產(chǎn)的發(fā)生與機體雌孕激素水平偏低之間的密切關(guān)系，因此諸多學者對習慣性流產(chǎn)患者實施外源性雌孕激素補充方案+淋巴細胞主動免疫治療。黃體酮注射液、β-HCG注射液等均為現(xiàn)階段臨床常見的治療藥物，以上藥物與淋巴細胞主動免疫的聯(lián)合治療，可補充患者體內(nèi)雌激素和孕激素，刺激體內(nèi)雌激素分泌，并促使子宮內(nèi)膜組織細胞吸收雌激素，有效提高機體內(nèi)雌激素水平，促使其子宮內(nèi)膜孕激素分泌，為子宮內(nèi)膜發(fā)育提供保障，減少習慣性流產(chǎn)事件的發(fā)生概率。此研究結(jié)果示：觀察組患者治療后雌孕激素水平較高，血液流變學指標改善幅度較大，和對照組對比，差異有統(tǒng)計學意義（＜0.05）。以上各指標的變化，充分說明了淋巴細胞主動免疫治療不明原因習慣性流產(chǎn)的效果和價值。