丁家寶,高 鯤,張 倩

(秦皇島市第一醫(yī)院 1.胸外科；2.風(fēng)濕免疫科,河北 秦皇島066000)

非小細(xì)胞肺癌具有較高的惡性生物學(xué)特性，嚴(yán)重威脅著患者的生命健康[1]。目前臨床上對(duì)于非小細(xì)胞肺癌的具體發(fā)病機(jī)制尚不完全明確，研究發(fā)現(xiàn)，非小細(xì)胞肺癌的發(fā)生與多種細(xì)胞因子表達(dá)相關(guān)[2]。既往研究證實(shí)，SCNN1B、YAP1、ABCG2均參與惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展[3-5]。本研究分析SCNN1B、YAP1、ABCG2在非小細(xì)胞肺癌組織中的表達(dá)，報(bào)道如下。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象

2019年7月—2020年7月秦皇島市第一醫(yī)院收治的120例非小細(xì)胞肺癌患者，男70例，女50例，年齡40-67歲，平均年齡(50.83±10.15)歲，≥60歲30例，<60歲90例；腫瘤直徑：≥3 cm 59例，<3 cm 61例；TNM分期：Ⅰ+Ⅱ期60例，Ⅲ+Ⅳ期60例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移42例；分化程度：中低分化46例，高分化74例；病理類型：鱗癌61例，腺癌59例。另外收集通過(guò)手術(shù)切除的肺組織良性病變標(biāo)本120例，其中包括炎性假瘤78例，肺結(jié)核31例，其他11例。患者及家屬均知情同意本次研究，且經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)。

納入標(biāo)準(zhǔn)：符合《中華醫(yī)學(xué)會(huì)肺癌臨床診療指南(2018版)》[6]中關(guān)于非小細(xì)胞肺癌的診斷標(biāo)準(zhǔn)，且經(jīng)細(xì)胞學(xué)、病理學(xué)及影像學(xué)確診，自愿參與本次研究，未經(jīng)放化療治療。

排除標(biāo)準(zhǔn)：合并肝癌、胃癌等其他惡性腫瘤者；合并先天性免疫缺陷病者；合并糖尿病、高血壓等嚴(yán)重內(nèi)科疾病者；心、腎、肝等臟器功能障礙者；合并精神障礙、溝通障礙者。

1.2 樣本采集

取所有患者手術(shù)切除的癌組織、良性病變組織，采用40 g/L多聚甲醛固定后行石蠟包埋、切片，作后續(xù)指標(biāo)檢測(cè)。

1.3 實(shí)時(shí)熒光定量PCR(RT-PCR)法檢測(cè)SCNN1B、YAP1、ABCG2表達(dá)量

取所制備的癌組織、良性病變組織標(biāo)本，提取組織RNA(Trizol法)，之后使用紫外分光光度儀、聚丙烯酰胺凝膠電泳鑒定RNA純度，利用PCR試劑盒合成cDNA。逆轉(zhuǎn)錄：模板RNA 14 μl，Enzyme mix 2 μl，5×RT緩沖液4 μl，使用蒸餾水補(bǔ)至20 μl，之后在PCR檢測(cè)儀上做42℃ 1 h、95℃ 5 min的處理后，將所合成的cDNA在-20℃下保存。反應(yīng)體系：0.4 μl上下游引物，cDNA模板 8 μl，SYBRP Green mix 10μl，PCR Primer mix 2 μl。反應(yīng)條件：95℃ 10 min；95℃ 10 s；60℃ 1 min；40個(gè)循環(huán)。以β-actin為內(nèi)參，采用2-△△Ct方法計(jì)算表達(dá)量。SCNN1B上游引物序列：5’-GAGCGGGACCAAAGCAC-3’，下游引物序列：5’-GCAGCCAGACGATGTTATT-3’；YAP1上游引物序列：5’-ACCCACAGCTCAGCATCTTC-3’，下游引物序列：5’-TCATGGCAAAACGAGGGTCA-3’；ABCG2上游引物序列：5’-GGTCAGAGTGTGGTTTCTGTAGCA-3’，下游引物序列：5’-GTGAGAGATCGATGCCCTGCTTA-3’；β-actin上游引物序列：5’-CACTGTGCCCATCTACGAGG-3’，下游引物序列：5’-TAATGTCACGCACGATTTCC-3’。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 SCNN1B、YAP1、ABCG2在非小細(xì)胞肺癌組織、良性病變組織中的表達(dá)

如表1所示，與良性病變組織相比，癌組織中SCNN1B、YAP1、ABCG2表達(dá)量均較高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

表1 SCNN1B、YAP1、ABCG2在非小細(xì)胞肺癌組織、良性病變組織中的表達(dá)

2.2 SCNN1B、YAP1、ABCG2與非小細(xì)胞肺癌患者臨床特征的關(guān)系

如表2所示，SCNN1B、YAP1、ABCG2表達(dá)與非小細(xì)胞肺癌患者性別、年齡、病理類型無(wú)關(guān)，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；SCNN1B、YAP1、ABCG2表達(dá)與非小細(xì)胞肺癌患者腫瘤直徑、TNM分期、有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分化程度相關(guān)，腫瘤直徑≥3 cm、Ⅲ+Ⅳ期、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、中低分化患者SCNN1B、YAP1、ABCG2表達(dá)量較高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

表2 SCNN1B、YAP1、ABCG2與非小細(xì)胞肺癌患者臨床特征的關(guān)系

2.3 SCNN1B、YAP1、ABCG2之間相關(guān)性分析

如圖1所示，Pearson相關(guān)性分析顯示，SCNN1B與YAP1之間呈正相關(guān)(r=0.301，P<0.001)；SCNN1B與ABCG2之間呈正相關(guān)(r=0.277，P=0.002)；YAP1與ABCG2之間呈正相關(guān)(r=0.372，P<0.001)。

圖1 SCNN1B、YAP1、ABCG2之間相關(guān)性

2.4 SCNN1B、YAP1、ABCG2對(duì)非小細(xì)胞肺癌的預(yù)測(cè)價(jià)值

如表3所示，與SCNN1B、YAP1、ABCG2單項(xiàng)相比，3項(xiàng)聯(lián)合對(duì)非小細(xì)胞肺癌的預(yù)測(cè)價(jià)值較高(P<0.05)。

表3 SCNN1B、YAP1、ABCG2對(duì)非小細(xì)胞肺癌的預(yù)測(cè)價(jià)值

3 討論

SCNN1B屬于一種具有穩(wěn)定鈉通道的β亞單位的編碼基因，控制不同器官中水和電解質(zhì)的跨上皮轉(zhuǎn)運(yùn)，參與惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展[7]。Karacan Kü?ükali G[8]、Fan P等[9]分別在其研究中發(fā)現(xiàn)SCNN1B與假性醛固酮增多癥、高血壓相關(guān)，另外柯東平等[10]認(rèn)為SCNN1B與胃癌細(xì)胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化相關(guān)。本研究中，SCNN1B在非小細(xì)胞肺癌組織中表達(dá)升高，與雷銳等[11]研究中認(rèn)為SCNN1B基因與非小細(xì)胞肺癌相關(guān)的研究結(jié)果一致。

臨床研究顯示，HIPPO信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路屬于由不同的蛋白質(zhì)所組成的通路，其與組織再生、器官大小相關(guān)，參與惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展，而YAP1屬于HIPPO信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的核心因子，在多種惡性腫瘤中表達(dá)均較高，與惡性腫瘤患者的轉(zhuǎn)移和預(yù)后生存密切相關(guān)[12]。報(bào)道顯示，正?；罨腨AP1可修復(fù)生物體創(chuàng)傷，但在其處于超激活狀態(tài)下時(shí)為異常高表達(dá)的狀態(tài)，可在一定程度上提高細(xì)胞增殖能力，促進(jìn)惡性腫瘤的形成[13]。目前已有多數(shù)研究顯示，YAP1在多種惡性腫瘤中表達(dá)異常。本研究顯示，YAP1在非小細(xì)胞肺癌組織中表達(dá)升高，且與多種病理特征相關(guān)，此結(jié)果提示YAP1可能參與非小細(xì)胞肺癌的發(fā)生發(fā)展。

ABCG2為一種近年來(lái)新發(fā)現(xiàn)的藥泵蛋白，臨床研究顯示，ABCG2主要在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中生成，在正常肝細(xì)胞、小腸黏膜細(xì)胞、腎上皮細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞的腔膜面等均微量或者低表達(dá)，但在癌變細(xì)胞中表達(dá)明顯升高[14]。胡凱等[15]在其研究中認(rèn)為ABCG2在非小細(xì)胞肺癌中表達(dá)明顯升高，參與此病的發(fā)生發(fā)展。本文結(jié)果顯示，ABCG2在非小細(xì)胞肺癌高表達(dá)，且與患者腫瘤直徑、TNM分期、有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分化程度相關(guān)，提示其可能參與此病的發(fā)生發(fā)展。