趙和欽豪，夏蒙，周杰，喻鑫玲，李廣平，鄧奕，羅振華，李勝明，王慧嵐

湖南省血吸蟲(chóng)病防治所，WHO湖區(qū)血吸蟲(chóng)病防治合作中心，血吸蟲(chóng)病免疫與傳播控制湖南省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，國(guó)家臨床重點(diǎn)?？疲?岳陽(yáng) 414000

湖南省曾是全國(guó)血吸蟲(chóng)病重度流行區(qū)之一，隨著血吸蟲(chóng)病消除進(jìn)程的推進(jìn)，居民血吸蟲(chóng)感染率和感染度逐漸降低，目前已達(dá)歷史最低水平[1-2]。為適應(yīng)新時(shí)期、新形勢(shì)血吸蟲(chóng)病防控工作需求，血吸蟲(chóng)病監(jiān)測(cè)方案和行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)也不斷更新和出臺(tái)，對(duì)質(zhì)控體系建設(shè)和實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)技能的要求也越來(lái)越高[3-4]。及時(shí)、準(zhǔn)確地發(fā)現(xiàn)和診斷血吸蟲(chóng)病，已成為精準(zhǔn)防控血吸蟲(chóng)病的關(guān)鍵因素[5-7]。

我國(guó)從2009年開(kāi)始建立“國(guó)家級(jí)-省級(jí)-縣級(jí)”三級(jí)血吸蟲(chóng)病診斷網(wǎng)絡(luò)平臺(tái)。湖南省通過(guò)積極開(kāi)展“血防技術(shù)人員專業(yè)技能競(jìng)賽”“省級(jí)血吸蟲(chóng)病診斷網(wǎng)絡(luò)實(shí)驗(yàn)室準(zhǔn)入資質(zhì)授牌”等監(jiān)測(cè)能力建設(shè)措施[8]，穩(wěn)步推進(jìn)血防“四大工程”[9]，網(wǎng)絡(luò)實(shí)驗(yàn)室實(shí)驗(yàn)條件、人員素質(zhì)和檢測(cè)能力等方面有了顯著提升。2021年湖南省血吸蟲(chóng)病國(guó)家級(jí)監(jiān)測(cè)點(diǎn)數(shù)量由41 個(gè)增加到97 個(gè)，覆蓋了全部41 個(gè)血吸蟲(chóng)病流行縣的57 個(gè)基層血防機(jī)構(gòu)，其設(shè)置的網(wǎng)絡(luò)實(shí)驗(yàn)室均具備縣級(jí)監(jiān)測(cè)職能與資質(zhì)，承擔(dān)監(jiān)測(cè)點(diǎn)血吸蟲(chóng)病診斷項(xiàng)目的檢測(cè)工作，至此，湖南省已初步建成血吸蟲(chóng)病監(jiān)測(cè)診斷網(wǎng)絡(luò)實(shí)驗(yàn)室體系，并有效運(yùn)行[10]。根據(jù)《全國(guó)血吸蟲(chóng)病監(jiān)測(cè)方案（2020 年版）》和《湖南省2021 年血吸蟲(chóng)病防治工作計(jì)劃》的要求，湖南省于2021 年9 月啟動(dòng)了血吸蟲(chóng)病監(jiān)測(cè)點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)能力評(píng)估工作，旨在為完善全省血吸蟲(chóng)病監(jiān)測(cè)體系提供參考。

1 內(nèi)容與方法

1.1 調(diào)查點(diǎn)的確定 根據(jù)全省血吸蟲(chóng)病疫情監(jiān)測(cè)等級(jí)和地區(qū)分布比例[2-3]，在湖南省41個(gè)血吸蟲(chóng)病流行縣的57 個(gè)監(jiān)測(cè)點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室中分層抽取12 個(gè)診斷網(wǎng)絡(luò)實(shí)驗(yàn)室為調(diào)查對(duì)象，其中Ⅰ類監(jiān)測(cè)縣診斷網(wǎng)絡(luò)實(shí)驗(yàn)室必檢，Ⅱ、Ⅲ類監(jiān)測(cè)縣各抽取20%?？己藛挝患皩?duì)應(yīng)的監(jiān)測(cè)等級(jí)分別為：常德市安鄉(xiāng)縣黃山頭血防站（Ⅱ類）、澧縣澧陽(yáng)血防站（Ⅰ類）、臨澧縣新安鎮(zhèn)血防院（Ⅱ類）、桃源縣盤塘鎮(zhèn)中心衛(wèi)生院（Ⅱ類）；益陽(yáng)市南縣武圣宮鎮(zhèn)血防站（Ⅱ類）、大通湖區(qū)北洲子鎮(zhèn)衛(wèi)生院（Ⅱ類）；岳陽(yáng)市汨羅市白塘鎮(zhèn)磊石血防站（Ⅱ類）、岳陽(yáng)縣麻塘鎮(zhèn)血防站（Ⅱ類）、臨湘市黃蓋湖鎮(zhèn)血防站（Ⅱ類）、南湖新區(qū)管委會(huì)血防站（Ⅲ類）；長(zhǎng)沙市岳麓區(qū)公共衛(wèi)生中心（Ⅱ類）；株洲市石峰區(qū)公共衛(wèi)生中心（Ⅲ類）。

1.2 質(zhì)控品制備 質(zhì)控品包含血清、糞樣加藤厚涂片和蟲(chóng)卵懸液三類。血清陽(yáng)性和陰性質(zhì)控品分別來(lái)源于湖南省血吸蟲(chóng)病防治所附屬湘岳醫(yī)院血吸蟲(chóng)病重點(diǎn)?？票４娴穆匝x(chóng)病患者和正常人群的血清，每份質(zhì)控樣品50 μL。蟲(chóng)卵懸液來(lái)源于人工感染血吸蟲(chóng)7 周的家兔肝，蟲(chóng)卵收集后保存于1.2% NaCl 溶液中作陽(yáng)性質(zhì)控品，部分蟲(chóng)卵懸液煮沸滅活5 min 后用作陰性質(zhì)控品，每份2 mL。糞樣加藤厚涂片陽(yáng)性質(zhì)控品采用正常人新鮮糞便加入兔肝中收集的蟲(chóng)卵，攪拌混勻制作而成，蟲(chóng)卵計(jì)數(shù)為3~18 個(gè)/片；陰性質(zhì)控品不加蟲(chóng)卵。三類質(zhì)控品均由血吸蟲(chóng)病免疫與傳播控制湖南省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室2名專業(yè)技術(shù)人員制作，再由2 名實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)技術(shù)人員對(duì)上述質(zhì)控品進(jìn)行3次重復(fù)檢測(cè)，并標(biāo)定結(jié)果。

1.3 檢測(cè)能力評(píng)價(jià)

1.3.1 間接紅細(xì)胞凝集試驗(yàn)（IHA） 待測(cè)樣本由5份血清組成，包含1 個(gè)強(qiáng)陽(yáng)性、1 個(gè)弱陽(yáng)性和3 個(gè)陰性血清樣本。血清樣本按1∶5、1∶10、1∶20、1∶40 四個(gè)稀釋度進(jìn)行檢測(cè)，判斷陰性、陽(yáng)性，并記錄效價(jià)。檢測(cè)用V 孔玻璃板與IHA 檢測(cè)試劑由湖南省血吸蟲(chóng)病防治所統(tǒng)一提供。試劑盒由安徽安吉醫(yī)藥科技有限公司生產(chǎn)（批號(hào)：20200303）。

1.3.2 改良加藤厚涂片法 待測(cè)樣本包含5張加藤厚涂片，有陰性和陽(yáng)性，每張陽(yáng)性片血吸蟲(chóng)蟲(chóng)卵數(shù)量在30 個(gè)以內(nèi)，無(wú)其他蠕蟲(chóng)蟲(chóng)卵；鏡檢結(jié)果要求定性并定量（蟲(chóng)卵計(jì)數(shù)）。

1.3.3 尼龍絹集卵孵化法 待測(cè)樣本包含1個(gè)陽(yáng)性質(zhì)控品和2個(gè)陰性質(zhì)控品。樣本4 ℃保存，并于72 h內(nèi)完成檢測(cè)，結(jié)果只定性，不定量。

1.4 評(píng)價(jià)指標(biāo)與統(tǒng)計(jì)分析

1.4.1 評(píng)價(jià)指標(biāo) 將縣級(jí)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果與湖南省血吸蟲(chóng)病免疫與傳播控制重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室標(biāo)定結(jié)果進(jìn)行比對(duì)。定性鑒定結(jié)果相同為符合，反之為不符合，其評(píng)價(jià)指標(biāo)包括陽(yáng)性符合率、陰性符合率、總符合率[11]。計(jì)算公式：①陽(yáng)性符合率=A/（A+C）×100%；②陰性符合率=D/（B+D）×100%；③總符合率=（A+D）/（A+B+C+D）×100%，其中A 為真陽(yáng)性數(shù)，B 為假陽(yáng)性數(shù)，C 為假陰性數(shù)，D 為真陰性數(shù)。定量

鑒定（效價(jià)和蟲(chóng)卵計(jì)數(shù)）結(jié)果用合格率計(jì)算，IHA 法抗體效價(jià)檢測(cè)與標(biāo)定結(jié)果一致，改良加藤厚涂片法血吸蟲(chóng)卵鏡檢計(jì)數(shù)與標(biāo)定結(jié)果的誤差在30%以內(nèi)，判為合格，合格率=合格樣本量/總樣本量×100%。

1.4.2 結(jié)果評(píng)分 總分10 分，9 分及以上為優(yōu)秀，8分及以上為良好，6 分及以上為合格，6 分以下為不合格。量化分值為：間接紅細(xì)胞凝集試驗(yàn)考核總分3 分，定性錯(cuò)誤每個(gè)扣0.6 分，效價(jià)每誤差一個(gè)滴度扣0.1 分/樣本；改良加藤厚涂片法考核總分4 分，定性錯(cuò)誤每個(gè)扣0.8分，蟲(chóng)卵計(jì)數(shù)每偏離標(biāo)定結(jié)果1倍扣除0.1 分/樣本；尼龍絹集卵孵化法考核總分3 分，定性錯(cuò)誤每個(gè)扣1分。

1.4.3 統(tǒng)計(jì)分析 采用Excel 2013 建立數(shù)據(jù)庫(kù)，并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

2 結(jié) 果

2.1 間接紅細(xì)胞凝集試驗(yàn) 12個(gè)實(shí)驗(yàn)室中11個(gè)實(shí)驗(yàn)室定性檢測(cè)結(jié)果完全正確，僅桃源縣盤塘鎮(zhèn)中心衛(wèi)生院漏檢（將2 個(gè)陽(yáng)性質(zhì)控品錯(cuò)判為陰性）。IHA檢測(cè)陽(yáng)性符合率為91.67%（22/24），陰性符合率為100.00%（36/36），總符合率為96.67%（58/60）。

6 個(gè)實(shí)驗(yàn)室效價(jià)檢測(cè)與標(biāo)定結(jié)果完全符合，其余6 個(gè)實(shí)驗(yàn)室效價(jià)檢測(cè)出現(xiàn)錯(cuò)誤，其中安鄉(xiāng)縣黃山頭血防站、澧縣澧陽(yáng)血防站和岳麓區(qū)公共衛(wèi)生中心血清滴度標(biāo)記偏高；臨澧縣新安鎮(zhèn)血防院血清滴度標(biāo)記偏低；桃源縣盤塘鎮(zhèn)中心衛(wèi)生院和大通湖區(qū)北洲子鎮(zhèn)衛(wèi)生院的檢測(cè)結(jié)果未填寫效價(jià)（按不符合計(jì)算）。間接紅細(xì)胞凝集試驗(yàn)陽(yáng)性質(zhì)控品效價(jià)檢測(cè)總合格率為54.17%（13/24）。見(jiàn)表1。

2.2 改良加藤厚涂片法 12 個(gè)檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室中有8個(gè)實(shí)驗(yàn)室定性檢測(cè)結(jié)果完全正確，4 個(gè)實(shí)驗(yàn)室出現(xiàn)錯(cuò)誤，其中臨湘市黃蓋湖鎮(zhèn)血防站和南湖新區(qū)管委會(huì)血防站各有1 張陽(yáng)性加藤片誤判為陰性（假陰性），大通湖區(qū)北洲子鎮(zhèn)衛(wèi)生院、南湖新區(qū)管委會(huì)血防站和石峰區(qū)公共衛(wèi)生中心共有8張陰性加藤片誤判為陽(yáng)性（假陽(yáng)性）。改良加藤厚涂片法鑒定血吸蟲(chóng)卵陽(yáng)性符合率為90.00%（18/20），陰性符合率為80.00%（32/40），總符合率為83.33%（50/60）。

12 個(gè)實(shí)驗(yàn)室共檢測(cè)20 張陽(yáng)性加藤片，其中6 張陽(yáng)性加藤片血吸蟲(chóng)卵計(jì)數(shù)在允許誤差范圍內(nèi)，改良加藤厚涂片法血吸蟲(chóng)卵計(jì)數(shù)合格率為30.00%。見(jiàn)表1。

2.3 尼龍絹集卵孵化法 12 個(gè)實(shí)驗(yàn)室中有9 個(gè)實(shí)驗(yàn)室定性檢測(cè)結(jié)果完全正確，其余3個(gè)實(shí)驗(yàn)室各有1個(gè)質(zhì)控品檢測(cè)錯(cuò)誤，其中大通湖區(qū)北洲子鎮(zhèn)衛(wèi)生院和石峰區(qū)公共衛(wèi)生中心將陽(yáng)性質(zhì)控品誤判為陰性（假陰性），汨羅市白塘鎮(zhèn)磊石血防站將陰性質(zhì)控品誤判為陽(yáng)性（假陽(yáng)性）。尼龍絹集卵孵化法陽(yáng)性符合率為83.33%（10/12），陰性符合率為95.63%（23/24），總符合率為91.67%（33/36）。見(jiàn)表1。

2.4 結(jié)果量化得分 根據(jù)質(zhì)控考核結(jié)果量化標(biāo)準(zhǔn)評(píng)分，12 個(gè)被抽樣實(shí)驗(yàn)室中有7 個(gè)實(shí)驗(yàn)室得分在9以上，考核結(jié)果為“優(yōu)秀”，優(yōu)秀率58.33%；2 個(gè)實(shí)驗(yàn)室考核結(jié)果為“良好”；3 個(gè)實(shí)驗(yàn)室考核結(jié)果為“合格”。見(jiàn)表1。

表1 湖南省血吸蟲(chóng)病監(jiān)測(cè)點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)控考核結(jié)果

3 討 論

2013 年以來(lái)，監(jiān)測(cè)點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)實(shí)驗(yàn)室室間比對(duì)與質(zhì)控考核已成為湖南省血吸蟲(chóng)病診斷網(wǎng)絡(luò)平臺(tái)運(yùn)行和質(zhì)量控制的常規(guī)工作。通過(guò)常態(tài)化開(kāi)展監(jiān)測(cè)點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)控考核能及時(shí)發(fā)現(xiàn)問(wèn)題，提升湖南省監(jiān)測(cè)點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室監(jiān)測(cè)能力。2021 年度的評(píng)估考核采用血清、加藤厚涂片和蟲(chóng)卵懸液三類質(zhì)控品，檢驗(yàn)了湖南省5 個(gè)流行市、12個(gè)流行縣的12個(gè)監(jiān)測(cè)點(diǎn)的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)水平。各實(shí)驗(yàn)室全部在1 周內(nèi)完成檢測(cè)，結(jié)果反饋率100%。間接紅細(xì)胞凝集試驗(yàn)、改良加藤片厚涂片法和尼龍絹集卵孵化法的檢測(cè)結(jié)果總符合率分別為96.67%、83.33%和91.67%，達(dá)到了質(zhì)控要求，表明基層血吸蟲(chóng)病監(jiān)測(cè)點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室具備開(kāi)展免疫學(xué)、病原學(xué)診斷血吸蟲(chóng)病的能力。

本次抽樣考核發(fā)現(xiàn)，湖南省血吸蟲(chóng)病監(jiān)測(cè)點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)能力基本滿足監(jiān)測(cè)工作需要，但對(duì)于定量、精準(zhǔn)化的檢測(cè)項(xiàng)目，實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)水平有待提高，如間接紅細(xì)胞凝集試驗(yàn)的陽(yáng)性質(zhì)控品效價(jià)檢測(cè)合格率僅54.17%，加藤片蟲(chóng)卵計(jì)數(shù)合格率僅30.00%。此外，部分實(shí)驗(yàn)室還存在報(bào)告格式不規(guī)范、陽(yáng)性質(zhì)控品忘填效價(jià)、質(zhì)控品保存和運(yùn)輸不當(dāng)導(dǎo)致的假陰性等問(wèn)題。通過(guò)結(jié)果量化得分比較發(fā)現(xiàn)，得分與所在地區(qū)疫情水平有一定的關(guān)系。7 個(gè)檢測(cè)能力評(píng)估為優(yōu)秀的實(shí)驗(yàn)室中，6 個(gè)來(lái)自常德、岳陽(yáng)、益陽(yáng)三個(gè)“老疫區(qū)”，疫情監(jiān)測(cè)等級(jí)全部為Ⅰ類（傳播控制縣）和Ⅱ類（傳播阻斷的有螺縣）；而疫情監(jiān)測(cè)等級(jí)為Ⅲ類（傳播阻斷或消除的無(wú)螺縣）的石峰區(qū)和南湖新區(qū)得分分別位于第10 名和12 名。血吸蟲(chóng)病低流行區(qū)的監(jiān)測(cè)點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室診斷能力相對(duì)較低，這可能與日常監(jiān)測(cè)工作中較少接觸陽(yáng)性樣本有關(guān)。

目前，全國(guó)血吸蟲(chóng)病邁入消除攻堅(jiān)階段。為適應(yīng)新時(shí)期、新形勢(shì)下血吸蟲(chóng)病防控工作的需求，在大力發(fā)展新技術(shù)、推廣核酸檢測(cè)技術(shù)的同時(shí)，仍不能忽視血清學(xué)和病原學(xué)等傳統(tǒng)診斷技術(shù)的能力提升[12]。建議各級(jí)實(shí)驗(yàn)室繼續(xù)維持和提高病原學(xué)和血清學(xué)檢測(cè)能力，對(duì)于已達(dá)到傳播阻斷的無(wú)螺地區(qū)和達(dá)到消除標(biāo)準(zhǔn)的地區(qū)，可通過(guò)開(kāi)展培訓(xùn)和組織地區(qū)間學(xué)習(xí)交流等方式，提高血吸蟲(chóng)病診斷水平。此外，應(yīng)重視和加強(qiáng)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制，以維持和鞏固敏感有效的監(jiān)測(cè)體系。