詹學(xué)斌 岳 穎 馬劍鋒

原發(fā)性肝癌(primary hepatocellular carcinoma，PHC)是一種常見(jiàn)的惡性腫瘤，具有發(fā)展迅速、預(yù)后差等特征[1]。每年新發(fā)病例約有70萬(wàn)人，由于工作壓力增大、生活習(xí)慣改變以及生活環(huán)境的變化，近年來(lái)該疾病的發(fā)病率呈現(xiàn)明顯的上升趨勢(shì)，且大量患者在確診為PHC時(shí)已達(dá)晚期。有統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)表明，PHC患者的平均5年生存率僅為10%～15%[2-3]。miRNAs是一類大小20～25個(gè)核苷酸的非編碼RNA，miRNA和靶基因間形成了復(fù)雜的調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)，參與細(xì)胞生長(zhǎng)、分化、炎癥和癌變等多種生理和病理過(guò)程[4-5]。有臨床資料指出，miRNAs在肝癌的生理病理學(xué)機(jī)制中發(fā)揮著重要的作用，除了影響肝細(xì)胞生長(zhǎng)，還對(duì)應(yīng)激反應(yīng)、代謝、感染等過(guò)程發(fā)揮調(diào)節(jié)作用[6]。有研究證實(shí)miR-934和miR-498在原發(fā)性肝癌中出現(xiàn)異常表達(dá)[7]。本研究探討血清miR-934和miR-498在原發(fā)性肝癌中的診斷價(jià)值及其對(duì)預(yù)后的影響，可為原發(fā)性肝癌診斷的生物標(biāo)志物和預(yù)后干預(yù)的靶點(diǎn)提供新的研究方向，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 研究對(duì)象

選取2017年2月至2020年2月本院收治原發(fā)性肝癌患者90例。納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合《原發(fā)性肝癌診療規(guī)范(2017年版)》[8]中關(guān)于原發(fā)性肝癌的診斷標(biāo)準(zhǔn)，患者經(jīng)病理檢查確診為原發(fā)性肝癌； ②行手術(shù)切除術(shù)；③接受手術(shù)前沒(méi)有接受過(guò)放療、化療等相關(guān)治療項(xiàng)目； ④患者簽署自愿受試同意書，患者及其家屬需簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：① 合并病毒性肝炎感染者；②合并其他惡性腫瘤患者、免疫功能嚴(yán)重受損或正在服用免疫抑制劑者；③合并存在代謝功能異?；蛘咂渌鞴俟δ苷系K者。此外，選取同期本院收治的肝硬化(liver cirrhosis，LC)患者90例，納入標(biāo)準(zhǔn)：符合《病毒性肝炎防治方案》[9]診斷標(biāo)準(zhǔn)，經(jīng)肝功能檢查、影像學(xué)檢查或肝臟穿刺活檢診斷為L(zhǎng)C。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并肝癌或其他惡性腫瘤；②合并嚴(yán)重心、肺、腎功能不全等疾病。選取同期在本院體檢的健康者90例納入對(duì)照組。

1.2 血清miR-934和miR-498水平檢測(cè)

所有入組患者抽取靜脈血5 mL，常溫下靜置并進(jìn)行離心處理，并分離血清。使用TRIzol RNA試劑盒(購(gòu)自賽默飛世爾科技有限公司)提取總RNA待用；隨后采用紫外分光光度計(jì)(上海美譜達(dá)公司)檢測(cè)總RNA 濃度及純度。選用反轉(zhuǎn)錄試劑盒(賽默飛世爾科技有限公司)進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄試驗(yàn)。取2 μg待用的總 RNA 進(jìn)行上述操作，隨后，進(jìn)行PCR擴(kuò)增反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物，循環(huán)40次。最后，選用2-ΔΔCt法對(duì)各組基因的相對(duì)表達(dá)量進(jìn)行計(jì)算。

1.3 評(píng)價(jià)指標(biāo)

收集患者一般資料。采用黃色促凝膠管抽取靜脈全血樣本，靜置待有肉眼可見(jiàn)的血清析出，置入離心機(jī)，以3500 r/min的轉(zhuǎn)速離心處理10 min，隨后使用全自動(dòng)生化免疫分析儀以及配套試劑盒上機(jī)檢測(cè)患者天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、甲胎蛋白(AFP)水平。另外，通過(guò)醫(yī)院信息系統(tǒng)調(diào)取患者的病歷信息，收集患者接受手術(shù)后短期恢復(fù)情況，包括肝區(qū)疼痛、發(fā)熱、術(shù)后并發(fā)癥、術(shù)后住院時(shí)間等等；出院后，進(jìn)行術(shù)后隨訪24～60個(gè)月，隨訪時(shí)間截止至2021年5月。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 3組臨床資料比較

3組臨床資料比較，結(jié)果發(fā)現(xiàn)3組年齡、性別差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；3組的ALT、AST、AFP、miR-934、miR-498水平比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，其中PHC組ALT、AST、AFP、miR-934、miR-498水平高于對(duì)照組和LC組(P<0.05)，LC組ALT、AST、AFP、miR-934、miR-498水平高于對(duì)照組(P<0.05)，見(jiàn)表1。

表1 3組患者臨床資料比較

2.2 血清miR-934和miR-498水平與患者術(shù)后短期恢復(fù)情況的關(guān)系

術(shù)后肝區(qū)疼痛、發(fā)熱、有術(shù)后并發(fā)癥、復(fù)發(fā)/轉(zhuǎn)移的患者血清miR-934和miR-498水平顯著高于其他患者(P<0.05)，見(jiàn)表2。

表2 血清miR-934和miR-498水平與原發(fā)性肝癌患者術(shù)后短期恢復(fù)情況的關(guān)系

2.3 血清miR-934和miR-498聯(lián)合檢測(cè)原發(fā)性肝癌的診斷價(jià)值

ROC曲線對(duì)血清miR-934、miR-498水平及聯(lián)合檢測(cè)診斷原發(fā)性肝癌效能進(jìn)行分析，miR-934、miR-498單獨(dú)檢測(cè)AUC分別為0.702、0.693，聯(lián)合檢測(cè)AUC為0.821，高于單獨(dú)檢測(cè)的AUC值。見(jiàn)表3、圖1。

圖1 血清miR-934和miR-498聯(lián)合檢測(cè)診斷原發(fā)性肝癌ROC曲線圖

表3 血清miR-934和miR-498聯(lián)合檢測(cè)原發(fā)性肝癌的診斷效能評(píng)價(jià)

3 討論

PHC作為全球第5大常見(jiàn)腫瘤，占全球癌癥相關(guān)死亡的第3位，具有起病隱匿、病情進(jìn)展快、惡性程度高等特征，其發(fā)展過(guò)程與多種因素有關(guān)。且由于早期癥狀輕微不易察覺(jué)，因此相當(dāng)比例患者在最終確診時(shí)已經(jīng)進(jìn)入中、晚期階段，對(duì)疾病的治療以及患者預(yù)后造成了嚴(yán)重的負(fù)面影響?？偠灾?，早發(fā)現(xiàn)、早治療是挽救原發(fā)性肝癌患者生命的關(guān)鍵[10-11]?；顧z、影像學(xué)和腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)是目前臨床常用的原發(fā)性肝癌的診斷方法，但是其靈敏度和特異度具有局限性，且對(duì)影像學(xué)醫(yī)師的臨床經(jīng)驗(yàn)以及檢測(cè)水平要求較高，在實(shí)際檢測(cè)過(guò)程中時(shí)常存在漏診、誤診情況[12]。近年來(lái)，隨著分子生物學(xué)診斷技術(shù)不斷發(fā)展，miRNAs表達(dá)異常與腫瘤之間的相關(guān)性已逐漸獲得了越來(lái)越多臨床醫(yī)學(xué)家的重視[13]。尋找兼具敏感性、特異性的原發(fā)性肝癌標(biāo)志物具有重要的臨床意義以及研究?jī)r(jià)值。

研究證實(shí)，腫瘤患者組織和血清中miRNA表達(dá)相比正常水平會(huì)出現(xiàn)明顯變化。相比病理學(xué)活檢，miRNA的檢測(cè)更加方便，且樣本的采集不涉及侵入性操作，具有較強(qiáng)的操作性和可重復(fù)性，作為診斷標(biāo)志物具有明顯的推廣優(yōu)勢(shì)[14-15]。有研究證實(shí)miR-934和miR-498水平在PHC中表達(dá)失常[16]，本研究發(fā)現(xiàn)PHC組miR-934、miR-498水平高于對(duì)照組和LC組，LC組miR-934、miR-498水平高于對(duì)照組，該結(jié)果說(shuō)明miR-934、miR-498水平不僅與原發(fā)性肝癌有關(guān)，可能還受肝硬化的影響。本研究還發(fā)現(xiàn)miR-934、miR-498檢測(cè)AUC分別為0.702、0.693，聯(lián)合檢測(cè)AUC為0.821，高于單獨(dú)檢測(cè)的AUC值，提示血清miR-934、miR-498在PHC診斷中具有臨床價(jià)值，且聯(lián)合檢測(cè)成為診斷PHC的臨床檢測(cè)指標(biāo)的潛力最大。另外有研究證實(shí)miR-934和miR-498在肝癌、胃癌、肺癌等多種癌癥中表達(dá)失常，且高表達(dá)的miR-934和miR-498與腫瘤的發(fā)生發(fā)展以及預(yù)后相關(guān)[17-18]，本研究中術(shù)后肝區(qū)疼痛、發(fā)熱、有術(shù)后并發(fā)癥、復(fù)發(fā)/轉(zhuǎn)移的患者血清miR-934和miR-498水平顯著高于其他患者，提示miR-934和miR-498的高表達(dá)可能與PHC 患者的預(yù)后有關(guān)。本研究不足之處在于，受限于樣本采集的難度以及資源限制，納入的樣本量較少，隨訪的時(shí)間較短；另外對(duì)患者一般資料的收集過(guò)程中，對(duì)其生活習(xí)慣、基礎(chǔ)疾病以及家族病史的相關(guān)資料收集不夠齊全，因此更加確切的研究揭露還有待擴(kuò)大樣本量進(jìn)行多中心、前瞻性的研究以進(jìn)一步證實(shí)。

綜上所述，miR-934、miR-498聯(lián)合檢測(cè)的診斷陽(yáng)性率高于單獨(dú)檢測(cè)，且miR-934、miR-498水平與患者術(shù)后恢復(fù)情況存在相關(guān)性，可作為PHC的診斷和預(yù)后指標(biāo)，值得臨床醫(yī)師參考借鑒。