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        骨髓細胞形態(tài)學與多參數(shù)流式細胞術(shù)在多發(fā)性骨髓瘤檢測中的應(yīng)用*

        2022-09-14 01:39:58劉蓮芳周勤峰
        檢驗醫(yī)學與臨床 2022年17期
        關(guān)鍵詞:骨髓細胞漿細胞形態(tài)學

        何 麗,劉蓮芳,周 謙,周勤峰△

        南京中醫(yī)藥大學附屬張家港醫(yī)院:1.檢驗科;2.腫瘤科,江蘇張家港 215600

        多發(fā)性骨髓瘤(MM)是以骨髓中惡性漿細胞異常增生和聚集為特征的一種惡性腫瘤,同時伴隨廣泛的浸潤,浸潤范圍包括淋巴結(jié)、骨質(zhì)、肝脾、神經(jīng)系統(tǒng)等[1]。MM好發(fā)于中老年人群,隨著年齡的增長發(fā)病率逐漸升高[2]。臨床表現(xiàn)主要為貧血、高鈣血癥、腎功能不全、溶骨性損傷等[3]。由于MM的臨床表現(xiàn)多樣化,在臨床工作中容易將其首發(fā)癥狀診斷為相應(yīng)的常見病,因此誤診和漏診率比較高[4-5]。本研究通過回顧性分析本院近年來已經(jīng)確診的36例MM患者骨髓細胞形態(tài)學與多參數(shù)流式細胞術(shù)檢查結(jié)果,分析其相關(guān)性,以加強臨床醫(yī)生對MM診斷的認識,提高MM的檢出率。

        1 資料與方法

        1.1一般資料 選取2019年10月至2021年5月于本院就診的MM患者36例為研究對象,其中初診患者19例(新發(fā)組),復(fù)查患者17例(復(fù)診組);36例患者中男20例、女16例,年齡36~83歲,患者均符合《血液學診斷與療效標準》中相關(guān)診斷標準[6]。根據(jù)骨髓細胞形態(tài)學檢測出漿細胞比例的結(jié)果將36例MM患者分成以下3組:A組漿細胞比例≥30%;B組漿細胞比例在10%~<30%;C組漿細胞比例<10%。

        1.2儀器與試劑 流式細胞儀為BD FACS Calibur,檢測抗體為CD19、CD56、CD117、CD138、CD81、CD27、CD38、CD45、胞質(zhì)cLambda、胞質(zhì)cKappa的混合抗體,骨髓細胞形態(tài)學檢測主要通過劉氏染液染色觀察。

        1.3方法

        1.3.1標本采集 經(jīng)患者知情同意,按常規(guī)方法行骨髓穿刺術(shù),取0.2 mL骨髓液進行推片以備骨髓細胞形態(tài)學檢測;此外,另取2 mL骨髓液置于肝素鋰抗凝管做多參數(shù)流式細胞學檢測,所有標本在6 h內(nèi)完成上機檢測。

        1.3.2骨髓細胞形態(tài)學檢查 待骨髓推片自然干燥后,行劉氏染色5 min,用流水沖洗、晾干。顯微鏡下鏡檢并按細胞的種類、發(fā)育階段分類計數(shù)200~500個有核細胞,計算出各類細胞的百分率,包括粒系、紅系、淋巴細胞系、單核細胞系、漿細胞及組織網(wǎng)狀細胞等。其中以漿細胞≥10%并伴有形態(tài)異常為MM的診斷標準。

        1.3.3多參數(shù)流式細胞術(shù)分析 按說明書提供的多參數(shù)流式細胞術(shù)細胞表面抗原及胞內(nèi)抗原方法進行標記,在試管中加入50 μL骨髓抗凝血和相關(guān)熒光標記抗體各2 μL,渦旋混勻后避光孵育15 min,加入氯化銨溶血劑,渦旋混勻后再避光放置10 min。洗滌、離心去除上清液,加入生理鹽水重懸并通過流式細胞儀進行檢測,分析骨髓細胞抗原表達熒光強度及熒光陽性細胞百分率,其中陽性定義為細胞膜抗原表達超過20%。

        2 結(jié) 果

        2.1兩種方法檢測漿細胞比例的相關(guān)性分析 36例患者中,A組15例,占41.67%;B組6例,占16.67%;C組15例,占41.67%。兩種方法檢測漿細胞比例的結(jié)果呈正相關(guān)(r=0.786,P<0.05);此外,兩種檢測方法檢測漿細胞比例的結(jié)果在A組、B組中不相關(guān)(r=0.425、0.033,P>0.05),但在C組中呈正相關(guān)(r=0.734,P<0.05)。

        2.2兩種方法檢測MM患者的漿細胞比例的結(jié)果比較 骨髓細胞形態(tài)學檢測漿細胞比例為(25.72±8.33)%,多參數(shù)流式細胞術(shù)檢測漿細胞比例為(11.48±3.29)%,結(jié)果比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05);此外,兩種檢測方法檢測漿細胞比例在A組、C組中比較,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05),但在B組中比較,差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。見表1。

        表1 兩種方法檢測漿細胞比例的結(jié)果比較

        2.3兩種方法檢測漿細胞比例對診斷MM患者的敏感性比較 A、B、C這3組中多參數(shù)流式細胞術(shù)檢測漿細胞比例≥10%的例數(shù)分別有12例、3例、0例,骨髓細胞形態(tài)學檢測漿細胞比例≥10%的例數(shù)分別有15例、6例、0例;36例MM患者中,骨髓細胞形態(tài)學檢測漿細胞比例≥10%的總例數(shù)有21例,敏感性為58.33%;多參數(shù)流式細胞術(shù)檢測漿細胞比例≥10%的總例數(shù)有15例,敏感性為41.67%。見表2。

        表2 兩種方法檢測漿細胞比例對診斷MM的敏感性比較(%)

        2.4兩種方法在新發(fā)組和復(fù)診組中的敏感性比較 結(jié)果顯示,兩種方法在新發(fā)組和復(fù)診組中的敏感性比較,差異無統(tǒng)計學意義(P=0.833、0.825),見表3、4。

        表3 骨髓細胞形態(tài)學在新發(fā)組和復(fù)診組中的敏感性比較(n)

        表4 多參數(shù)流式細胞術(shù)在新發(fā)組和復(fù)診組中的 敏感性比較(n)

        2.5多參數(shù)流式細胞術(shù)檢測cKappa、cLambda的情況統(tǒng)計 A、B、C這3組中多參數(shù)流式細胞術(shù)檢測cKappa/cLambda的陽性例數(shù)共有33例,A、B、C組中陽性例數(shù)分別有15例、6例、12例。

        3 討 論

        骨髓細胞形態(tài)學檢查在血液系統(tǒng)疾病臨床診斷中有重要作用,它能夠清晰地顯示MM細胞的形態(tài)特征,尤其是單克隆漿細胞,可作為MM的診斷標準之一[7]。MM中單克隆漿細胞比例一般≥10%且形態(tài)異常,胞體體積較大,常成堆出現(xiàn)。盡管如此,但由于漿細胞在骨髓中為灶性分布,導(dǎo)致臨床上不同部位穿刺的腫瘤細胞差異較大,部分分化良好的漿細胞與正常漿細胞在形態(tài)學上非常難區(qū)分[8],因此早期診斷MM比較困難。若該病未得到有效治療,病情發(fā)展至晚期,會導(dǎo)致療效不佳或患者失去治療機會[9]。

        近年來,隨著對MM研究的不斷深入、診斷方法及治療要求的不斷提高和完善,MM的診斷模式已從單純的骨髓細胞形態(tài)學逐步擴展為與細胞生物學及臨床醫(yī)學相結(jié)合[10]。例如多參數(shù)流式細胞術(shù)為MM的精確診斷、治療及預(yù)后判斷提供了越來越多試驗依據(jù)。尤其是多參數(shù)流式細胞術(shù)能夠客觀、快捷、準確地定量檢測單個細胞的膜上或者胞內(nèi)表達的多種抗原成分,提高了MM檢測的靈敏度,逐漸成為MM診斷的常規(guī)方法[11-12]。本研究結(jié)果顯示,36例MM患者中,骨髓細胞形態(tài)學檢測漿細胞比例的與多參數(shù)流式細胞術(shù)檢測漿細胞比例呈正相關(guān)(r=0.786,P<0.05),骨髓細胞形態(tài)學檢測漿細胞比例的結(jié)果較多參數(shù)流式細胞術(shù)高(P<0.05),與相關(guān)研究結(jié)果一致[13]。此外,兩種方法檢測漿細胞比例結(jié)果在A組、C組中比較,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05),但在B組中比較,差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。以上結(jié)果說明骨髓細胞形態(tài)學在檢測漿細胞的“量”上有明顯優(yōu)勢,造成多參數(shù)流式細胞術(shù)檢測的漿細胞比例要比骨髓細胞形態(tài)學比例少的原因可能為多參數(shù)流式細胞術(shù)檢測漿細胞易被破壞。此外,在骨髓細胞形態(tài)學與多參數(shù)流式細胞術(shù)檢測漿細胞比例對診斷MM的敏感性分析中比較發(fā)現(xiàn),骨髓細胞形態(tài)學在檢測漿細胞比例敏感性方面較多參數(shù)流式細胞術(shù)高。進一步以新發(fā)及復(fù)診患者分層,比較在新發(fā)組和復(fù)診組中兩種檢測方法的敏感性,結(jié)果顯示骨髓細胞形態(tài)學和多參數(shù)流式細胞術(shù)在新發(fā)組和復(fù)診組中敏感性差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05),說明復(fù)診治療患者并不影響兩種檢測方法診斷MM的敏感性。

        cKappa輕鏈、cLambda輕鏈為MM中異常漿細胞的標志特征之一[14]。本研究結(jié)果顯示,A組、B組、C組這3組中采用多參數(shù)流式細胞術(shù)檢測到的cKappa/cLambda陽性例數(shù)分別有15例、6例、12例,結(jié)果表明在漿細胞比例<10%時多參數(shù)流式細胞術(shù)對MM的診斷有提示作用,可以敏感地檢測出異常漿細胞。

        骨髓細胞形態(tài)學一直以來在MM漿細胞比例檢測方面存在著不可替代的作用,但由于其局限性,多參數(shù)流式細胞術(shù)的應(yīng)用可以提高MM異常漿細胞的檢測率,從而減少漏診率。此外,多參數(shù)流式細胞術(shù)可通過對標本進行多參數(shù)分析,應(yīng)用范圍更大,可同時檢測到異常漿細胞表面和胞內(nèi)多個抗原,為判斷疾病進展、靶向治療及預(yù)后監(jiān)測等提供有力依據(jù)[15-16]。因此,有條件的實驗室,可聯(lián)合兩種檢驗方法進行MM的檢測,從而提高MM的檢出率。

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