郎佳琪，趙順鑫，王 丹，李金金，黎海靈，周 濃，趙晶晶*，李雅南

1重慶三峽學(xué)院生物與食品工程學(xué)院，重慶 404120；2虎林市農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣中心，虎林 158100

滇重樓(Parispolyphyllavar.yunnanensis)屬于百合科重樓屬多年生藥用植物，其干燥根莖具有涼肝定驚、消腫止痛、清熱解毒等功效[1]，以其獨(dú)特療效和低毒副作用受到了廣泛關(guān)注和使用。隨著制藥工業(yè)需求量的逐年增加，造成了野生資源日益枯竭，故人工栽培滇重樓成了實(shí)現(xiàn)資源可持續(xù)利用的有效途徑，通過生物技術(shù)來改善滇重樓藥用品質(zhì)已成為國(guó)內(nèi)研究滇重樓規(guī)范化栽培體系的熱點(diǎn)領(lǐng)域，也是實(shí)現(xiàn)野生資源有效保護(hù)和資源可持續(xù)利用的必由之路[2,3]。

隨著工業(yè)迅速發(fā)展以及化肥、農(nóng)藥大量施用導(dǎo)致土壤重金屬污染問題日益嚴(yán)重，土壤中重金屬只能在環(huán)境中遷移，不能被土壤微生物分解而不斷積累，當(dāng)重金屬積累量達(dá)到一定限度時(shí)就會(huì)對(duì)植物系統(tǒng)產(chǎn)生毒害效應(yīng)，再通過食物鏈危害人類生命健康[4]。例如，鎘(Cd)元素超標(biāo)會(huì)誘導(dǎo)糖尿病、生殖毒性、骨質(zhì)疏松癥、腎功能損傷以及脾肝等器官致癌[5]，汞(Hg)元素超標(biāo)會(huì)影響人的中樞神經(jīng)系統(tǒng)[6]，鉛(Pb)元素對(duì)造血系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)、內(nèi)分泌系統(tǒng)及免疫系統(tǒng)等均具有危害作用[6]，故中藥材重金屬殘留問題是確保中藥材“安全、可控、有效”的首要問題之一。叢枝菌根真菌(arbuscular mycorrhizal fungi，AMF)作為自然界中分布最廣的植物共生真菌，外源接種AMF可有效地降低宿主植物對(duì)重金屬元素的吸收[1,7-9]，如Li等[9]以翅莢木為宿主植物，外源接種AMF能與翅莢木形成良好的共生關(guān)系，降低翅莢木內(nèi)Cu和Pd濃度；Wei等[1]以木香為宿主植物，發(fā)現(xiàn)外源接種摩西球囊霉(Glomusmosseae，Gm)、透明盾巨孢囊霉(Scutellosporapellucida，Spe)和美麗盾巨孢囊霉(Scutellosporacalospora，Sca)三種AMF可以顯著降低木香根部對(duì)重金屬元素(Cd、Cu、Hg、Pb和As)的吸收；Li等[10]以花生為宿主植物，外源接種AMF降低了植株地上部分Cd含量，改變了根系的形態(tài)結(jié)構(gòu)來吸附固持Cd。可見，AMF可以通過根外菌絲螯合重金屬離子和過濾保護(hù)根系等直接作用，以及促進(jìn)宿主植物對(duì)營(yíng)養(yǎng)元素的吸收改變根際土壤重金屬生物有效性和根際環(huán)境等間接作用來減少宿主植物對(duì)重金屬的吸收、轉(zhuǎn)運(yùn)和累積[11]，故外源接種AMF可有效地減少中藥材重金屬的殘留，確保了中藥材的安全性和有效性。

目前，對(duì)滇重樓重金屬元素的研究主要集中于接種單株AMF[7,8]以及不同產(chǎn)地[11,12]等方面，而關(guān)于AMF混合菌劑對(duì)滇重樓根際土壤、須根和根莖內(nèi)重金屬元素的對(duì)比研究鮮有報(bào)道。故本研究對(duì)課題組前期篩選出的12種優(yōu)良單株AMF[12-15]進(jìn)行混合，對(duì)無菌盆栽的滇重樓進(jìn)行接種共生培養(yǎng)。研究接種不同AMF混合菌劑對(duì)滇重樓根際土壤、須根和根莖內(nèi)重金屬殘留量的影響，以便尋找出能有效降低滇重樓根際土壤、須根和根莖內(nèi)重金屬殘留量的AMF混合菌劑，為不同AMF混合菌劑在滇重樓生產(chǎn)上的應(yīng)用提供了理論依據(jù)，為滇重樓的菌根化栽培提供了技術(shù)支持。

1 材料和方法

1.1 供試叢枝菌根真菌

供試植株為滇重樓(Parispolyphyllavar.yunnanensis)實(shí)生苗，購(gòu)買自云南省大理州農(nóng)業(yè)科學(xué)推廣研究院，經(jīng)重慶三峽學(xué)院的周濃教授鑒定為百合科植物滇重樓。

根據(jù)課題組前期的試驗(yàn)結(jié)果[3,15]，按表1方式將12種優(yōu)良單株AMF菌劑進(jìn)行混合[16,17]，供試AMF購(gòu)買自美國(guó)國(guó)際叢枝菌根真菌種質(zhì)資源保藏中心，經(jīng)三峽庫(kù)區(qū)道地藥材綠色種植與深加工重慶市工程實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行菌劑的保存和擴(kuò)繁，接種菌劑為帶有孢子、菌絲及侵染后根段的栽培基質(zhì)。

表1 叢枝菌根真菌的混合方式

1.2 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

供試土壤為未種植過滇重樓的沙壤土，基本理化性質(zhì)如下：全鉀28.83 g/kg、速效鉀328.64 mg/kg、全氮1.83 g/kg、速效氮10.64 mg/kg、堿解氮為43.50 mg/kg、全磷0.315 g/kg、速效磷104.66 mg/kg、有機(jī)質(zhì)21.2 g/kg、pH值6.87。供試土壤去除碎石、草根等雜物后，用2 mm篩子過篩，與河砂按3∶1體積比混合作為栽培基質(zhì)，置于1×105 Pa、121 ℃高壓滅菌鍋內(nèi)滅菌2 h，黑暗條件下保存1 周后裝盆，栽培容器為15 cm×18 cm的白色塑料花盆(用75%乙醇溶液擦拭3遍)，每盆裝土量為16.0 kg，按每千克土施用有機(jī)肥1.33 g、鉀肥0.013 g、鈣鎂磷肥0.31 g充分混勻，作為基肥一次性施用。每盆栽種大小基本一致的滇重樓5株，溫室光強(qiáng)設(shè)置為280 μmol/(m2·s)，光照時(shí)間為每天14 h，隔天澆水至田間持水量70%～80%。

本試驗(yàn)于2020年在重慶市萬州區(qū)鐵峰山國(guó)家森林公園室內(nèi)進(jìn)行，采用室溫盆栽方法進(jìn)行單因素隨機(jī)區(qū)組設(shè)計(jì)，共設(shè)置9個(gè)混合菌劑處理(S1～S9)和1個(gè)對(duì)照(S10)，每處理各設(shè)置10次重復(fù)，每盆接種劑量為15 mL(每1 mL約含60個(gè)孢子)，菌劑均勻施在滇重樓根莖處的表土下，按照常規(guī)方式進(jìn)行管理。

1.3 儀器與試劑

原子吸收分光光度計(jì)(TAS-990AFG，源于北京普析通用儀器有限責(zé)任公司)；原子熒光光度計(jì)(AFS-230E，源于北京科創(chuàng)海光有限公司)；數(shù)顯加熱板(C-MAG HP10，源于德國(guó)IKA集團(tuán))；電熱恒溫真空干燥箱(DZF-6050MBE，源于上海博訊實(shí)業(yè)有限公司)；分析天平(AE-240，源于梅特勒-托利多儀器上海有限公司)；Pb、銅(Cu)、砷(As)、汞(Hg)和鉻(Cr)空心陰極燈源于北京曙光明電子光源儀器有限公司。

重金屬元素標(biāo)準(zhǔn)溶液(1000 μg/mL)：Pb(批號(hào)為GSB04-1742-2004)、Cu(批號(hào)為GSB04-1725-2004)、As(批號(hào)為GSB04-1714-2004)、Hg(批號(hào)為GSB04-1729-2004)和Cr(批號(hào)為GSB04-1723-2004)源于國(guó)家環(huán)境保護(hù)總局標(biāo)準(zhǔn)樣品研究所，濃HNO3、氫氟酸和濃HCl均是優(yōu)級(jí)純，源于成都金山化學(xué)試劑有限公司，水為去離子水。實(shí)驗(yàn)所用玻璃器皿采用20% HNO3溶液浸泡24 h，去離子水沖洗干凈，備用。

1.4 取樣和測(cè)定方法

分別在2021年6月(T1)、7月(T2)、8月(T3)和9月(T4)收獲滇重樓植株的須根、新根莖和老根莖，45 ℃條件下烘干，粉碎過40目篩備用；對(duì)應(yīng)的根際土壤自然風(fēng)干，按分析要求分別粗磨、細(xì)磨后過40目篩，備用。采用原子吸收光譜法測(cè)定根際土壤和根莖內(nèi)Pb、Cu、As、Hg和Cr殘留量[18]。

1.5 數(shù)據(jù)分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)的整理采用Excel 2003軟件，數(shù)據(jù)方差分析采用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)(P<0.05)，繪圖采用Origian 9.0軟件進(jìn)行。

根莖內(nèi)重金屬元素的富集系數(shù)(bioconcentration factor，BCF)按下列公式計(jì)算：

2 結(jié)果與分析

2.1 叢枝菌根真菌對(duì)滇重樓根際土壤內(nèi)重金屬元素殘留量的影響

外源接種不同AMF混合菌劑對(duì)滇重樓根際土壤Pb、Cu、As、Hg和Cr 5種重金屬殘留量均有一定的影響(見圖1)。與對(duì)照相比，滇重樓根際土壤重金屬殘留量在不同生長(zhǎng)時(shí)期變化的差異較大，其中，S4處理對(duì)土壤中Pb殘留量的調(diào)控效果最佳，S1、S3和S5處理的調(diào)控效果次之；S1處理對(duì)土壤中Cu殘留量的調(diào)控效果最佳，S3和S9處理調(diào)控效果次之；S6處理對(duì)土壤中As、Hg和Cr殘留量的調(diào)控效果最佳，其下降幅度依次為24.81%～75.43%、42.86%～75.54%和16.01%～83.96%，S4處理調(diào)控效果次之。

圖1 叢枝菌根真菌對(duì)滇重樓根際土壤內(nèi)重金屬殘留量的影響

從重金屬殘留量來看，Pb和Hg殘留量隨著生長(zhǎng)時(shí)期延長(zhǎng)先升高后降低，最高值出現(xiàn)在T2期；Cu和Cr殘留量隨著生長(zhǎng)時(shí)期延長(zhǎng)而逐漸增加，多數(shù)處理的最高值出現(xiàn)在T4期；而As殘留量變化不明顯，維持在1.96～8.68 mg/kg之間。中國(guó)土壤元素背景值規(guī)定Pb殘留量為40.60 mg/kg、Cu殘留量為46.30 mg/kg、As殘留量為18.40 mg/kg、Hg殘留量為0.065 mg/kg、Cr殘留量為65.20 mg/kg[19]。除Cu和As外，其余3種元素均存在超過背景值的處理組。這說明AMF混合菌劑對(duì)重金屬元素的吸收具有差異性和很強(qiáng)的生物吸附潛力，導(dǎo)致滇重樓根際土壤中的Pb、Hg和Cr元素存在不同程度的累積和富集。

2.2 叢枝菌根真菌對(duì)滇重樓須根內(nèi)重金屬元素殘留量的影響

滇重樓須根中所含的藥用成分與根莖具有相同性，所以進(jìn)一步開發(fā)利用滇重樓須根資源具有重要的研究?jī)r(jià)值，滇重樓須根內(nèi)5種重金屬殘留量高低順序?yàn)锳s>Pb>Hg>Cu>Cr(見表2)，與對(duì)照相比，外源接種不同AMF混合菌劑可以不同程度地促進(jìn)滇重樓須根內(nèi)上述5種重金屬殘留量的增加，與對(duì)照相比，整個(gè)生育期內(nèi)Pb殘留量的平均增長(zhǎng)幅度介于88.86%～156.97%之間，Cu殘留量的平均增長(zhǎng)幅度介于37.49%～88.97%之間，As殘留量的平均增長(zhǎng)幅度介于122.07%～138.79%之間，Hg殘留量的平均增長(zhǎng)幅度介于148.25%～169.69%之間，Cr殘留量的平均增長(zhǎng)幅度介于30.79%～50.02%之間，方差分析可知，除T1期S2處理和T2期S3處理的Pb、T3期S6和S9處理的Cr外，其余處理與對(duì)照間差異均達(dá)到了顯著水平(P<0.05)。從重金屬殘留量來看，不同時(shí)期接種不同AMF混合菌劑后，滇重樓須根內(nèi)重金屬殘留量普遍高于對(duì)照。其中，T3期S3處理的Pb殘留量最高(0.59 mg/kg)，T1期S4處理的Cu殘留量最高(0.29 mg/kg)，T1期S6處理的As殘留量最高(1.83 mg/kg)，T4期S8處理的Hg殘留量最高(0.17 mg/kg)，T2期S8和S9處理的Cr殘留量最高(均為0.04 mg/kg)。

表2 叢枝菌根真菌對(duì)滇重樓須根內(nèi)重金屬殘留量的影響

2.3 叢枝菌根真菌對(duì)滇重樓根莖內(nèi)重金屬元素殘留量的影響

滇重樓新根莖和老根莖內(nèi)重金屬殘留量高低順序?yàn)镃r>As>Pb>Cu>Hg(見圖2～4)，外源接種不同AMF混合菌劑對(duì)新根莖和老根莖內(nèi)重金屬殘留量均有一定的影響，與對(duì)照相比，S6處理對(duì)新根莖和老根莖內(nèi)Pb殘留量的調(diào)控效果最佳，其下降幅度分別為7.53%～46.58%和11.95%～75.87%；S1和S6處理對(duì)新根莖內(nèi)Cu殘留量的調(diào)控效果最佳，S6和S7處理對(duì)老根莖內(nèi)Cu殘留量的調(diào)控效果最佳。其中，S6處理下降幅度分別為33.37%～77.51%和36.05%～68.59%；S4和S8處理對(duì)新根莖內(nèi)As殘留量的調(diào)控效果最佳，S3、S5、和S9處理對(duì)老根莖內(nèi)As殘留量的調(diào)控效果最佳；S1、S6和S9處理對(duì)新根莖內(nèi)Hg殘留量的調(diào)控效果最佳，S5、S6、S7和S8處理對(duì)老根莖內(nèi)Hg殘留量的調(diào)控效果最佳，其中，S6處理下降幅度分別為20.99%～45.43%和27.18%～61.89%；S2、S3和S6處理對(duì)新根莖內(nèi)Cr殘留量的調(diào)控效果最佳，S3、S4、S5和S6處理對(duì)老根莖內(nèi)Cr殘留量的調(diào)控效果最佳，其中，S6處理下降幅度分別為16.10%～42.03%和7.25%～78.69%。

圖2 叢枝菌根真菌對(duì)滇重樓新根莖和老根莖內(nèi)Pb和Cu殘留量的影響

圖3 叢枝菌根真菌對(duì)滇重樓新根莖和老根莖內(nèi)As和Hg殘留量的影響

圖4 叢枝菌根真菌對(duì)滇重樓新根莖和老根莖內(nèi)Cr殘留量的影響

從重金屬殘留量來看，不同時(shí)期接種不同AMF混合菌劑后，滇重樓新根莖和老根莖內(nèi)重金屬殘留量普遍低于對(duì)照。其中，T1期和T3期CK的老根莖內(nèi)As殘留量依次為2.03 mg/kg和3.93 mg/kg，T3期CK以及T4期S1、S2和CK的老根莖內(nèi)Hg殘留量依次為264.62、223.05、209.63和243.02 μg/kg，根據(jù)《中國(guó)藥典》和《藥用植物及制劑進(jìn)出口綠色行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)》限量標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定，上述處理的老根莖內(nèi)As和Hg重金屬殘留量均不符合限量標(biāo)準(zhǔn)，除T3期S5處理的老根莖Cr殘留量符合限量標(biāo)準(zhǔn)外，其余處理的Cr殘留量均不符合限量標(biāo)準(zhǔn)，這可能與 AMF種間差異以及菌種間協(xié)同作用有關(guān)，不同菌種或不同AMF混合菌劑對(duì)重金屬的敏感性不同，接種AMF混合菌劑促進(jìn)了滇重樓對(duì)某種重金屬的吸收，但無一致規(guī)律，具體原因有待進(jìn)一步深入研究。

2.4 叢枝菌根真菌對(duì)滇重樓根莖內(nèi)重金屬富集系數(shù)的影響

滇重樓根莖內(nèi)重金屬富集系數(shù)可以反映宿主植物富集土壤重金屬的能力，從表3的結(jié)果來看，Cr各處理的BCF均小于0.1，這說明滇重樓對(duì)Cr的吸收強(qiáng)烈貧化；Cu前期(T1和T2)各處理的BCF介于0.5～1.5之間，后期(T3和T4)各處理的BCF均小于0.5，這說明滇重樓對(duì)Cu的吸收隨著生長(zhǎng)時(shí)期的延長(zhǎng)而逐漸貧化；As和Hg各處理的BCF均大于3.0，這說明滇重樓對(duì)As和Hg的吸收強(qiáng)烈富集。可見，滇重樓對(duì)重金屬元素的吸收具有選擇性，尤其是對(duì)As和Hg表現(xiàn)出強(qiáng)烈富集作用，對(duì)Cr表現(xiàn)出相對(duì)富集作用。

表3 叢枝菌根真菌對(duì)滇重樓根莖內(nèi)重金屬富集系數(shù)的影響

2.5 滇重樓根莖土壤中重金屬間相關(guān)性分析

滇重樓種植基地土壤中的重金屬元素間存在不同程度的相關(guān)性(見表4)，土壤中Pb殘留量與Hg之間呈極顯著正相關(guān)(R=0.629)，Cu殘留量與Cr之間呈顯著正相關(guān)(R=0.511)，這說明種植基地土壤中以上兩種重金屬元素之間存在相互促進(jìn)吸收的關(guān)系；Cu殘留量與Hg之間呈顯著負(fù)相關(guān)(R=-0.335)。這說明種植基地土壤中Cu和Hg之間存在相互抑制吸收的關(guān)系。

表4 滇重樓根際土壤中重金屬元素間相關(guān)分析

2.6 滇重樓根莖中重金屬間相關(guān)性分析

重金屬元素在滇重樓生長(zhǎng)過程中的積累可能存在協(xié)同或競(jìng)爭(zhēng)兩種效應(yīng)，不同生長(zhǎng)時(shí)期表現(xiàn)出不同的變化規(guī)律(見表5)，就老根莖而言，Pb與Cu、As和Cr之間呈極顯著正相關(guān)，其相關(guān)系數(shù)依次為0.527、0.753和0.414；Cu與Cr之間呈極顯著正相關(guān)，其相關(guān)系數(shù)為0.455，As與Hg和Cr之間呈極顯著正相關(guān)，其相關(guān)系數(shù)依次為0.487和0.500，Hg與Cr之間呈顯著正相關(guān)，其相關(guān)系數(shù)為0.338，這說明滇重樓老根莖對(duì)重金屬元素的吸收具有顯著的協(xié)同作用。就新根莖而言，Pb與Cr之間呈極顯著正相關(guān)，其相關(guān)系數(shù)為0.482，As與Hg之間呈極顯著正相關(guān)，其相關(guān)系數(shù)為0.542，這說明滇重樓新根莖對(duì)Pb與Cr、As與Hg的吸收具有顯著的協(xié)同作用；As與Cr之間呈極顯著負(fù)相關(guān)，其相關(guān)系數(shù)為-0.484，Hg與Cr之間呈顯著負(fù)相關(guān)，其相關(guān)系數(shù)為-0.369，這說明滇重樓新根莖對(duì)As與Cr、Hg與Cr的吸收具有顯著的競(jìng)爭(zhēng)作用。總之，滇重樓老根莖對(duì)重金屬元素的吸收作用明顯高于新根莖。

表5 滇重樓根莖中重金屬元素間相關(guān)分析

3 討論與結(jié)論

3.1 叢枝菌根真菌對(duì)滇重樓根際土壤中重金屬殘留量的影響

菌根真菌可以通過雙向養(yǎng)分循環(huán)來促進(jìn)藥用植物的生長(zhǎng)發(fā)育，提高藥用植物的適應(yīng)性，菌根植物可以將葉片中合成的有機(jī)物通過AMF大量地輸送到根系中，同時(shí)根際土壤中的礦質(zhì)元素(重金屬)也可以通過AMF輸入到植物組織中，以此來調(diào)控植物組織內(nèi)礦質(zhì)元素(重金屬)含量[8,20]，故外源接種AMF是降低中藥材重金屬殘留量的主要微生物修復(fù)有效策略之一[21]。本研究發(fā)現(xiàn)，接種AMF混合菌劑可以不同程度地減少根際土壤中重金屬的殘留量，其中，S4處理對(duì)土壤中Pb殘留量的調(diào)控效果最佳，S1處理對(duì)土壤中Cu殘留量的調(diào)控效果最佳，S6處理對(duì)土壤中As、Hg和Cr殘留量的調(diào)控效果最佳，這說明AMF菌絲體對(duì)重金屬的吸附潛力不同，并且不同真菌菌絲體對(duì)各金屬離子的吸附能力也不同，其不同原因主要是不同AMF分泌的蛋白質(zhì)、氨基酸、有機(jī)酸等有機(jī)物不同，這些分泌的有機(jī)物能夠與不同的重金屬離子螯合，進(jìn)而降低根際土壤中重金屬的生物可利用性或可移動(dòng)性，從而減輕重金屬的毒害。再者，從重金屬殘留量來看，滇重樓根際土壤中Pb、Hg和Cr的殘留量超過中國(guó)土壤元素背景值，這說明AMF混合菌劑對(duì)滇重樓根際土壤中重金屬元素的吸收具有差異性和很強(qiáng)的生物吸附潛力，導(dǎo)致菌根化的滇重樓根際土壤中Pb、Hg和Cr元素存在不同程度的累積和富集。

3.2 叢枝菌根真菌對(duì)滇重樓須根和根莖中重金屬殘留量的影響

植物對(duì)重金屬的積累和忍耐是一個(gè)復(fù)雜過程，不同植物往往利用不同的適應(yīng)機(jī)制來積累或者排斥重金屬，進(jìn)而維持自身的生長(zhǎng)發(fā)育[11]，而外源接種AMF可以有效地減輕或避免中藥材中重金屬的殘留已是不爭(zhēng)的事實(shí)[1,9,10,22]。本研究發(fā)現(xiàn)，外源接種AMF混合菌劑可以不同程度地促進(jìn)滇重樓須根內(nèi)重金屬殘留量的增加，因?yàn)轫毟膳cAMF首先建立良好的共生關(guān)系，形成菌根真菌，致使根外菌絲增加了根部與根際土壤直接的接觸面積，加快了菌絲內(nèi)聚磷酸鹽與重金屬的結(jié)合形成“過濾機(jī)制”，促進(jìn)須根內(nèi)重金屬殘留量的增加[22]。本研究發(fā)現(xiàn)，外源接種AMF可以顯著降低滇重樓新根莖和老根莖內(nèi)重金屬的殘留量，這與Zhang等[2]的研究結(jié)果相一致，根莖作為滇重樓的主要藥用部位，其重金屬主要來源于兩個(gè)方面，一是來自根部的轉(zhuǎn)移，二是根莖表面生長(zhǎng)的部分須根所吸收的重金屬部分沉積在根莖表皮，但在人工栽培過程中，藥農(nóng)主要的采收目標(biāo)是主根，而導(dǎo)致大量的須根被遺留在土壤中；再者，新根莖和老根莖的整體代謝活動(dòng)較慢，并且AMF可以直接通過螯合作用使重金屬積聚于真菌中，故使滇重樓老根莖和新根莖內(nèi)重金屬殘留量普遍低于對(duì)照。從滇重樓根部重金屬殘留量來看，滇重樓須根內(nèi)重金屬殘留量順序?yàn)锳s>Pb>Hg>Cu>Cr，滇重樓新根莖和老根莖內(nèi)重金屬殘留量順序?yàn)镃r>As>Pb>Cu>Hg，可見，同一植物不同器官對(duì)重金屬的吸收能力不同。參照《中國(guó)藥典》和《藥用植物及制劑進(jìn)出口綠色行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)》限量標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定，本研究中所有處理的老根莖內(nèi)As和Hg重金屬殘留量均不符合限量標(biāo)準(zhǔn)，除T3期S5處理的老根莖Cr殘留量符合限量標(biāo)準(zhǔn)外，其余處理的Cr殘留量均不符合限量標(biāo)準(zhǔn)，這可能與AMF種間差異以及菌種間協(xié)同作用有關(guān)，不同菌種或不同混合菌劑對(duì)重金屬的敏感性不同，接種AMF促進(jìn)了滇重樓對(duì)某種重金屬的吸收，但無一致規(guī)律，具體原因有待進(jìn)一步深入研究。

3.3 叢枝菌根真菌對(duì)滇重樓根莖中重金屬富集系數(shù)的影響

重金屬富集系數(shù)是描述重金屬在生物體內(nèi)累積趨勢(shì)的重要指標(biāo)，表明了重金屬在植物體內(nèi)的富集情況。野菊花對(duì)Cd的富集作用較強(qiáng)，富集系數(shù)為2.72，故野菊花栽培過程中需要注意土壤及環(huán)境中Cd的殘留量，避免野菊花對(duì)Cd的過度富集導(dǎo)致藥材中Cd超標(biāo)[23]。本研究發(fā)現(xiàn)，滇重樓對(duì)As和Hg的BCF均大于3.0，這說明滇重樓對(duì)As和Hg的富集作用較強(qiáng)，人工栽培滇重樓過程中根際土壤易出現(xiàn)Hg和Cr累積和富集的情況，致使部分滇重樓根莖中Hg和Cr殘留量出現(xiàn)超標(biāo)情況，所以在滇重樓中藥材生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范(GAP)基地建設(shè)中應(yīng)嚴(yán)格控制其栽培土壤性質(zhì)，選擇合適的AMF菌株進(jìn)行混合，這為構(gòu)建高效優(yōu)質(zhì)的滇重樓種植體系提供了一條新的技術(shù)途徑。

綜上所述，近明球囊霉、沙荒球囊霉、透明盾巨孢囊霉、美麗盾巨孢囊霉、巨大巨孢囊霉和球狀巨孢囊霉6種單株AMF配制成的混合菌劑(S6)對(duì)滇重樓根際土壤、須根及根莖內(nèi)重金屬殘留量的調(diào)控效果最佳。而AMF對(duì)重金屬的吸附作用往往受諸多因素的影響(如宿主植物的種類、土壤肥力、土壤pH等)，再者不同真菌在菌絲生長(zhǎng)、侵染能力及磷運(yùn)輸效率方面也存在差異，所以在生產(chǎn)實(shí)踐中應(yīng)用AMF時(shí)要考慮到這些方面。