張海燕 張冬云 吳紅芳

(南陽醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校 1第一附屬醫(yī)院病理科，河南 南陽 473000；2病理教研室)

食管癌多發(fā)于食管黏膜上皮及腺體，具有較高的發(fā)病率〔1，2〕。根據(jù)組織學(xué)分類，其可分為食管鱗狀細(xì)胞癌和腺癌，其中前者在我國占比90%〔3〕。目前，針對食管鱗狀細(xì)胞癌的主要治療方式仍以外科手術(shù)為主，患者5年生存率仍較低，為26.2%～49.4%，尤其是對于老年患者來說，由于此類患者體質(zhì)和營養(yǎng)較差，故5年生存率更低，研究指出TNM分期對評估老年患者預(yù)后準(zhǔn)確性很低〔4，5〕。因此，尋找一種有效評估老年食管鱗狀細(xì)胞癌患者預(yù)后的方法，對制定治療方案及術(shù)后隨訪均具有重要意義。葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白(GRP)78是內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激時所產(chǎn)生的一類應(yīng)激蛋白，有研究顯示〔6〕，GRP78高表達可能是影響胃癌患者預(yù)后不良的標(biāo)志物之一；此外，研究顯示〔7〕GRP78高表達與食管癌的發(fā)生有關(guān)。基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)-2能夠使腫瘤細(xì)胞突破基底膜以侵襲鄰近組織，促進腫瘤微血管的形成，因而其與腫瘤的發(fā)生密切相關(guān)〔8〕。酪氨酸蛋白激酶(PTK)7與胰腺癌腫瘤分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，故其高表達可能提示預(yù)后不良〔9〕。CerbB-2是細(xì)胞膜上的一種蛋白，相關(guān)研究顯示CerbB-2高表達患者預(yù)后較差〔10〕。本研究旨在評估以上指標(biāo)聯(lián)合檢測對老年食管癌患者的預(yù)測價值。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2015年1月至2016年1月南陽醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校第一附屬醫(yī)院收治食管鱗狀細(xì)胞癌患者180例，其中男102例，女78例；年齡60～80歲，平均(70.23±4.32)歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)經(jīng)病理學(xué)確診為食管鱗狀細(xì)胞癌；(2)均為首次確診，且進行手術(shù)治療；(3)年齡≥60歲；(4)患者及家屬簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)合并其他惡性腫瘤；(2)手術(shù)前經(jīng)過放化療治療；(3)合并免疫系統(tǒng)疾病者；(4)隨訪資料不完整者。收集所有患者的腫瘤組織，并隨機收集100例癌旁組織。

1.2檢測方法 癌組織用甲醛固定、脫水、浸蠟，石蠟包埋，連續(xù)切片厚度為4 μm。在二甲苯中脫蠟、濃度梯度乙醇溶液水化后，用3%H2O2溶液室溫處理10 min后用磷酸鹽緩沖液漂洗3次，每次5 min，在120℃中加熱3 min完成抗原修復(fù)。根據(jù)試劑盒說明書添加GRP78、MMP-2、PTK7及CerbB-2一抗，于4℃下孵育12 h后加入二抗在室溫下溫育10 min，加入二氨基聯(lián)苯胺(DAB)復(fù)染5 min。

1.3結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn) 隨機選取5個視野，結(jié)合染色強度和陽性細(xì)胞比例進行評分。GRP78和MMP-2判定標(biāo)準(zhǔn)〔11，12〕：陽性細(xì)胞占比：≤5%為0分，6%～25% 1分，26%～50% 2分，51%～75% 3分，>75% 4分；著色深度：不著色為0分，淺黃色1分，棕黃色2分，棕褐色3分，兩項相乘所得，分?jǐn)?shù)≤3分為陰性，>3分為陽性。PTK7判定標(biāo)準(zhǔn)〔13〕：按染色面積分0～4分，染色強度分0～4分，兩項相乘，分?jǐn)?shù)≤2分為陰性，>3分為陽性。CerbB-2判定標(biāo)準(zhǔn)〔14〕：陽性細(xì)胞占比：<30% 1分，30%～70% 2分，>70% 3分；著色深度和兩項相乘分?jǐn)?shù)判定同GRP78和MMP-2。

1.4統(tǒng)計學(xué)分析 采用SPSS22.0軟件進行χ2檢驗；采用MedCalc軟件繪制受試者工作特征(ROC)曲線評估GRP78、MMP-2、PTK7及CerbB-2預(yù)后價值，計算曲線下面積(AUC)。

2 結(jié) 果

2.1食管鱗狀細(xì)胞癌組織和癌旁組織中GRP78、MMP-2、PTK7及CerbB-2表達 食管鱗狀細(xì)胞癌組織中GRP78、MMP-2、PTK7及CerbB-2陽性表達率均明顯高于癌旁組織(P<0.001)，見表1。

表1 食管鱗狀細(xì)胞癌組織和癌旁組織中GRP78、MMP-2、PTK7及CerbB-2陽性表達〔n(%)〕

2.2食管鱗狀細(xì)胞癌組織中GRP78、MMP-2、PTK7及CerbB-2陽性表達與臨床病理參數(shù)的關(guān)系 GRP78和MMP-2陽性表達與分化程度、臨床分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P<0.05)，PTK7和CerbB-2陽性表達與臨床分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P<0.05)，見表2。

表2 GRP78、MMP-2、PTK7及CerbB-2陽性表達與食管鱗狀細(xì)胞癌患者臨床病理參數(shù)的關(guān)系(n)

2.3食管鱗狀細(xì)胞癌術(shù)后5年生存率影響因素 隨訪至2020年12月底，死亡118例，生存62例，GRP78、MMP-2、PTK7及CerbB-2陰性表達患者5年生存率均明顯高于陽性表達患者〔20例(54.05%)vs 42例(29.37%)、χ2=7.931,P=0.005;30例(47.62%) vs 32例(27.35%)、χ2=7.450,P=0.006;24例(45.28%)vs 38例(29.92%)、χ2=3.908,P=0.048;16例(53.33%)vs 46例(30.67%)、χ2=5.688,P=0.017〕。

2.4GRP78、MMP-2、PTK7及CerbB-2聯(lián)合檢測評估患者預(yù)后 四項聯(lián)合的AUC最大，CerbB-2靈敏度最高，MMP-2特異度最高，見表3和圖1。

表3 GRP78、MMP-2、PTK7及CerbB-2聯(lián)合檢測評估患者預(yù)后〔%(n/N)〕

圖1 GRP78、MMP-2、PTK7及CerbB-2聯(lián)合檢測評估患者預(yù)后的ROC曲線

3 討 論

隨著分子生物學(xué)的發(fā)展，很多學(xué)者發(fā)現(xiàn)了與食管癌有關(guān)的生物學(xué)指標(biāo)，GRP78是一種免疫球蛋白重鏈結(jié)合蛋白，常常定位于真核生物細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜上，可參與蛋白質(zhì)折疊轉(zhuǎn)運、維持內(nèi)環(huán)境等生理過程，有研究顯示GRP78能夠在某種程度上降低細(xì)胞對殺傷性T細(xì)胞的敏感度以阻止細(xì)胞凋亡，此外還能通過降低細(xì)胞毒性T細(xì)胞對腫瘤殺傷力以促進腫瘤細(xì)胞增殖〔15，16〕。MMPs是一類參與細(xì)胞外基質(zhì)和基底膜降解的蛋白水解酶，其可參與腫瘤浸潤、轉(zhuǎn)移等，其中MMP-2是MMPs中的明膠酶，其可降解基底膜蛋白等成分，在腫瘤新生血管中也發(fā)揮重要作用〔17〕。PTK7是一種具有7個免疫球蛋白樣結(jié)構(gòu)域的細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域，是假激酶的成員之一，有研究顯示PTK7會在食管癌患者中過表達，參與腫瘤的增殖和遷移〔13，18〕。CerbB-2基因是一種癌基因，主要定位于人體染色體17q21，編碼產(chǎn)物是糖蛋白，其具有酪氨酸激酶活性，其與表皮生長因子受體相似，故能夠與表皮生長因子配體相結(jié)合以促進腫瘤細(xì)胞的增殖和分裂，是預(yù)后不良的一個重要指標(biāo)〔19〕。

本研究提示GRP78、MMP-2、PTK7及CerbB-2可能參與食管癌惡性程度的發(fā)生。GRP78、MMP-2、PTK7及CerbB-2陽性表達促進腫瘤分化、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及較高的臨床分期，此研究結(jié)果與多項研究結(jié)果一致〔12，14，20，25〕。此外，本研究結(jié)果提示GRP78、MMP-2、PTK7及CerbB-2陽性患者預(yù)后較差，因此對于呈陽性患者而言，應(yīng)該給予更為積極的輔助放化療。GRP78、MMP-2、PTK7及CerbB-2聯(lián)合檢測對食管鱗狀細(xì)胞癌患者具有較高的預(yù)測價值。