張喜鳳，梁憲斌，向 梅，張維真 (鄭州市第三人民醫(yī)院腫瘤內(nèi)科，河南 鄭州 450000)

食管癌為臨床多發(fā)消化道惡性腫瘤，發(fā)病率和病死率均較高[1-2]。外科手術(shù)為臨床治療食管癌的重要措施，可有效切除病變組織，但針對臨床分期較晚、發(fā)生肌層浸潤及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者，經(jīng)手術(shù)治療后難以取得滿意效果，且復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)較高[3-4]。因此，如何對食管癌予以早期明確診斷成為研究熱點(diǎn)。隨分子生物技術(shù)不斷發(fā)展，腫瘤相關(guān)基因于惡性腫瘤中的研究已成臨床焦點(diǎn)，檢測相關(guān)癌基因及抑癌基因表達(dá)和其表達(dá)情況對食管癌患者的影響，對早期診斷食管癌、評估預(yù)后極為重要[5-6]。p53屬抑癌基因類型，臨床多項(xiàng)研究均已證實(shí)其在惡性腫瘤疾病發(fā)生、進(jìn)展中具有重要作用，且可對其生物學(xué)行為直接產(chǎn)生影響[7-8]。Ⅱ型拓?fù)洚悩?gòu)酶(topoisomerase type Ⅱ，TOPOⅡ)為調(diào)節(jié)DNA構(gòu)象動(dòng)態(tài)改變的重要核酶，為腫瘤細(xì)胞增殖的特異性標(biāo)志物；P-糖蛋白(P-glycoprotein，PGP)是多藥耐藥基因所編碼的跨膜糖蛋白類型，其表達(dá)水平增高通常表明病灶對相應(yīng)化療藥物存在耐藥性，同時(shí)提示預(yù)后效果不佳[9-10]。本研究選取鄭州市第三人民醫(yī)院收治的213例食管癌患者，探討其p53、TOPOⅡ、PGP表達(dá)情況。

1 資料與方法

1.1 一般資料選取鄭州市第三人民醫(yī)院2018年12月至2020年9月收治的213例食管癌患者設(shè)為研究組、21例食管良性腫瘤患者設(shè)為對照組。研究組：男143例，女70例；年齡39～76(57.13±5.65)歲；臨床分期：Ⅰ+Ⅱ期114例，Ⅲ+Ⅳ期99例；肌層浸潤情況：<1/2肌層浸潤85例，≥1/2肌層浸潤128例；低分化106例，中分化64例，高分化43例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移116例，淋巴結(jié)無轉(zhuǎn)移97例。對照組：男13例，女8例；年齡36～73(56.87±5.08)歲；疾病類型：息肉瘤3例，食管血管瘤2例，乳頭狀瘤6例，食管平滑肌瘤10例。2組基本臨床資料比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2 選取標(biāo)準(zhǔn)食管癌納入標(biāo)準(zhǔn)：1)經(jīng)病理檢查確診；2)Ⅰ～Ⅳ期；3)知情同意本研究；4)采取手術(shù)治療。排除標(biāo)準(zhǔn)：1)合并腎肝功能重度障礙；2)合并血液系統(tǒng)病變；3)合并全身性重度感染性疾??；4)合并其他腫瘤；5)存在認(rèn)知功能障礙或神經(jīng)系統(tǒng)病變，無法順利配合完成本研究。

1.3 方法2組均采取手術(shù)治療，術(shù)中取病變組織制成石蠟切片，然后常規(guī)進(jìn)行免疫組化染色。依據(jù)p53、TOPOⅡ、PGP陽性數(shù)目占比評估，占比≤10%、11%～50%、51%～75%、>75%分別計(jì)1～4分；依據(jù)染色強(qiáng)度，無色、淡黃、棕黃、黑色、褐色分別計(jì)0～3分，兩項(xiàng)相乘不足3分為陰性(-)，3～5分呈弱陽性(+)，6～9分呈中陽性(++)，9分以上呈強(qiáng)陽性(+++)。

1.4 觀察指標(biāo)比較觀察2組p53、TOPOⅡ、PGP陽性表達(dá)情況。統(tǒng)計(jì)分析研究組不同淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、不同臨床分期、不同肌層浸潤情況、不同分化程度患者p53、TOPOⅡ、PGP陽性表達(dá)情況。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS 25.0對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計(jì)數(shù)資料用百分?jǐn)?shù)表示，比較用χ2檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 2組p53、TOPOⅡ、PGP陽性表達(dá)情況比較研究組p53(57.28%)、TOPOⅡ(78.40%)、PGP(60.56%)陽性表達(dá)率高于對照組(4.76%、9.52%、4.76%)，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=21.142，P<0.001；χ2=45.206，P<0.001；χ2=24.106，P<0.001)。見表1。

表1 2組p53、TOPOⅡ、PGP陽性表達(dá)情況比較 n(%)

2.2 有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者p53、TOPOⅡ、PGP陽性表達(dá)情況比較有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者p53(75.00%)、TOPOⅡ(89.66%)、PGP(80.17%)陽性表達(dá)率高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者(36.08%、64.95%、37.11%)，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=32.696，P<0.001；χ2=19.044，P<0.001；χ2=41.008，P<0.001)。見表2。

表2 有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者p53、TOPOⅡ、PGP陽性表達(dá)情況比較 n(%)

2.3 不同臨床分期患者p53、TOPOⅡ、PGP陽性表達(dá)情況比較Ⅲ+Ⅳ期食管癌患者p53(80.81%)、TOPOⅡ(95.96%)、PGP(84.85%)陽性表達(dá)率均高于Ⅰ+Ⅱ期患者(36.84%、63.16%、39.47%)，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=41.855，P<0.001；χ2=33.670，P<0.001；χ2=45.675，P<0.001)。見表3。

表3 不同臨床分期患者p53、TOPOⅡ、PGP陽性表達(dá)情況比較 n(%)

2.4 不同肌層浸潤情況患者p53、TOPOⅡ、PGP陽性表達(dá)情況比較≥1/2肌層浸潤者p53(72.66%)、TOPOⅡ(95.31%)、PGP(75.00%)陽性表達(dá)率高于<1/2肌層浸潤患者(34.12%、52.94%、38.82%)，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=31.003，P<0.001；χ2=54.160，P<0.001；χ2=27.989，P<0.001)。見表4。

表4 不同肌層浸潤情況患者p53、TOPOⅡ、PGP陽性表達(dá)情況比較 n(%)

2.5 不同分化程度患者p53、TOPOⅡ、PGP陽性表達(dá)情況比較不同分化程度食管癌患者p53、TOPOⅡ、PGP陽性表達(dá)情況比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=1.452，P=0.484；χ2=3.659，P=0.161；χ2=3.877，P=0.144)。見表5。

表5 不同分化程度患者p53、TOPOⅡ、PGP陽性表達(dá)情況比較 n(%)

3 討論

惡性腫瘤發(fā)病、進(jìn)展及演變?yōu)槎嗖襟E、多因素參與的一個(gè)復(fù)雜生物學(xué)過程，且與原癌基因活化和抑癌基因喪失活性具有密切相關(guān)性[11-13]。研究[14-15]指出，p53抑癌基因的突變或丟失致使其表達(dá)產(chǎn)物p53蛋白功能發(fā)生異常，促使食管癌發(fā)生、進(jìn)展，故明確其機(jī)制極為重要。本研究結(jié)果顯示，研究組p53陽性表達(dá)率高于對照組，且在不同淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、肌層浸潤及臨床分期患者中存在顯著差異。野生型p53通過調(diào)節(jié)細(xì)胞周期、促使細(xì)胞分化及細(xì)胞凋亡，維持細(xì)胞遺傳穩(wěn)定性，但突變型p53則會喪失上述生物學(xué)功能，并造成細(xì)胞突變，增加腫瘤形成風(fēng)險(xiǎn)。同時(shí)，相關(guān)研究[16-17]表明，野生型p53半衰期較短，而突變型p53半衰期較長，且具有較高穩(wěn)定性，因此臨床可通過免疫組化等方式檢測出突變型p53，并準(zhǔn)確判斷p53基因異常。另有研究[18]發(fā)現(xiàn)，食管癌組織內(nèi)p53呈異常高表達(dá)狀態(tài)，但正常食管組織內(nèi)p53則無表達(dá)或呈低表達(dá)，提示p53基因突變后編碼出不具備功能的p53，其喪失促使細(xì)胞分化及凋亡、調(diào)控細(xì)胞周期的功能，無法抑制癌變細(xì)胞轉(zhuǎn)化，致使癌變細(xì)胞較早發(fā)生轉(zhuǎn)移、浸潤程度較高等。

近年來，臨床對腫瘤多耐藥基因研究不斷深入，對腫瘤耐藥性認(rèn)知取得進(jìn)展，其中PGP屬多耐藥性蛋白產(chǎn)物，其陽性表達(dá)情況和細(xì)胞耐藥程度高度相關(guān)[19-20]。PGP屬轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白ATP結(jié)合家族，其主要分布于具備多耐藥細(xì)胞膜上，部分表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)。研究[21]表明，PGP是一個(gè)跨膜藥泵蛋白，其分子內(nèi)不僅存在和藥物結(jié)合的多個(gè)位點(diǎn)，且還有結(jié)合于ATP的位點(diǎn)，能結(jié)合于多種藥物，并通過分解ATP提供能量形式把擴(kuò)散至細(xì)胞的阿霉素、生物堿類及長春新堿等親脂類藥物泵出細(xì)胞外，以此降低細(xì)胞中藥物濃度，造成細(xì)胞耐藥。同時(shí)，腫瘤細(xì)胞對化療藥物耐藥性，部分是一開始即對其產(chǎn)生耐藥，其余則是于化療后誘導(dǎo)產(chǎn)生，但兩者均具備相同生物學(xué)基礎(chǔ)，即PGP所介導(dǎo)耐藥[22-23]。此外，PGP還可間接或直接參與細(xì)胞分子代謝及增殖、分化等調(diào)控，抵抗caspase依賴性凋亡，于細(xì)胞凋亡中發(fā)揮重要調(diào)節(jié)作用。而DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶為催化DNA拓?fù)洚悩?gòu)改變的一種酶系，可分為TOPOⅠ及TOPOⅡ，其中TOPOⅡ基因發(fā)生點(diǎn)突變后可改變其特異性氨基酸序列，造成TOPOⅡ發(fā)生質(zhì)與量變化，對TOPOⅡ核藥物、DNA間結(jié)合造成直接影響，并抑制DNA裂解，最終引起耐藥[24]。研究[25]指出，以TOPOⅡ作靶點(diǎn)的藥物主要包括鬼臼霉素類及蒽環(huán)類抗生素，如玫瑰樹堿、VP16、多柔比星及新霉素等，TOPOⅡ所介導(dǎo)耐藥和細(xì)胞中藥物靶酶活性變化及DNA修復(fù)具有相關(guān)性，而化療是否敏感與TOPOⅡ表達(dá)情況相關(guān)，若TOPOⅡ表達(dá)異常，則會造成腫瘤對抗腫瘤藥物發(fā)生耐藥。

本研究還發(fā)現(xiàn)，研究組TOPOⅡ、PGP陽性表達(dá)率也高于對照組，并隨臨床分期、肌層浸潤等變化而變化，故結(jié)合上述研究認(rèn)為，食管癌患者p53、TOPOⅡ、PGP陽性表達(dá)情況發(fā)生異常，且其表達(dá)異常與食管癌病灶侵襲、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移關(guān)系密切，臨床可根據(jù)p53、TOPOⅡ、PGP陽性表達(dá)情況分析食管癌臨床分期、肌層浸潤等情況，還可參照上述指標(biāo)表達(dá)水平判斷疾病耐藥性，并依據(jù)評估結(jié)果調(diào)節(jié)用藥方案，保證治療有效性、安全性。

綜上所述，食管癌患者p53、TOPOⅡ、PGP陽性表達(dá)情況異常增高，且隨淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、肌層浸潤及臨床分期增高，其陽性表達(dá)率越高，臨床可通過測定p53、TOPOⅡ、PGP陽性表達(dá)情況評估食管癌病情程度、耐藥性，為臨床制定、調(diào)整治療方案提供一定參考依據(jù)。