尹洪雷，戴金蘭，程立軍，涂滿娣，周 磊，俞凌云，陳學(xué)燦

（1.榕城海關(guān)綜合技術(shù)服務(wù)中心，福建 福清 350300；2.福州海關(guān)技術(shù)中心，福建 福州 350003；3.天津海關(guān)，天津 300041；4.成都海關(guān)技術(shù)中心，四川 成都 610041）

苯胺類物質(zhì)因?yàn)楹小狽H官能團(tuán)，具有較強(qiáng)的質(zhì)子給予能力，其本身能與橡膠中的自由基反應(yīng)，阻止自由基對(duì)橡膠分子鏈的破壞；同時(shí)苯胺類物質(zhì)反應(yīng)生成的中間產(chǎn)物不僅結(jié)構(gòu)穩(wěn)定，而且具有很強(qiáng)的自由基捕獲能力，與自由基反應(yīng)可生成穩(wěn)定產(chǎn)物，阻止自由基進(jìn)一步反應(yīng)。因此，苯胺類物質(zhì)被作為橡膠加工中性能優(yōu)異的抗氧老化劑，對(duì)氧、臭氧、熱老化、疲勞老化以及變價(jià)金屬離子等都有優(yōu)良的防護(hù)效果，被廣泛應(yīng)用于橡膠制品中。

多數(shù)苯胺類化合物是由苯胺或乙基苯胺酚衍生物合成的，其中會(huì)殘留少量N-乙基苯胺。N-乙基苯胺可經(jīng)呼吸道吸入或經(jīng)皮膚吸收進(jìn)入人體，其毒性與苯胺相似，能在血液中形成高鐵血紅蛋白，造成人體組織缺氧，引起中樞神經(jīng)系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)及其他臟器的損壞[1-3]。含有N-乙基苯胺的廢棄橡膠會(huì)污染水體和土壤，影響水生生物的生長和繁殖[4-6]。當(dāng)水體中的污染物達(dá)到一定濃度時(shí)，水生物會(huì)引起一系列中毒反應(yīng)，如行為異常、生理功能紊亂、組織細(xì)胞病變，直至死亡。目前ISO/TR 16178：2012《鞋類 鞋類和鞋類部件中潛存的關(guān)鍵物質(zhì)》的清單中將N-乙基苯胺分為第4類（高度懷疑對(duì)穿著者有危害的物質(zhì)）或第5類（懷疑對(duì)穿著者有危害的物質(zhì)）。

雖然已經(jīng)有一些苯胺含量的檢測(cè)方法，用來檢測(cè)紡織品、飲用和環(huán)境水、工作場所、汽油和化妝品中的苯胺含量[7-15]，但是國內(nèi)外暫時(shí)還沒有橡膠中的苯胺類物質(zhì)含量檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)方法。為了保護(hù)消費(fèi)者的身體健康和生命安全及應(yīng)對(duì)國外技術(shù)壁壘，有必要制訂橡膠中的苯胺類物質(zhì)含量的相關(guān)檢測(cè)方法。

本工作研究氣相色譜法測(cè)定橡膠中的苯胺類物質(zhì)含量。

1 實(shí)驗(yàn)

1.1 試劑

苯胺（標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)）、N-乙基苯胺（標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)）、鄰苯二胺（標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)）和N，N-二乙基對(duì)苯二胺（標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)），美國CATO公司產(chǎn)品；無水乙醇（優(yōu)級(jí)純）、二氯甲烷（優(yōu)級(jí)純）、甲醇（優(yōu)級(jí)純）和丙酮（優(yōu)級(jí)純），國藥集團(tuán)有限公司產(chǎn)品。

1.2 主要儀器

DC 300型渦旋振蕩器，杭州瑞誠儀器有限公司產(chǎn)品；Agilent 7890A型氣相色譜儀，美國安捷倫儀器公司產(chǎn)品。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 提取溶劑的選擇

準(zhǔn)確稱取試樣2.0 g（無特別說明，試樣顆粒的長度×寬度為3 mm×3 mm），加入10 mL提取溶劑，在25 ℃下渦旋振蕩10 min后再用微波提取20 min，用制備的固相萃取柱凈化，將凈化液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至0.5 mL左右，用正己烷定容至2.0 mL，測(cè)定目標(biāo)物苯胺、N-乙基苯胺、鄰苯二胺和N，N-二乙基對(duì)苯二胺含量。分別考察提取溶劑乙醇、二氯甲烷、甲醇和丙酮的提取效果。

1.3.2 提取方式選擇

準(zhǔn)確稱取試樣2.0 g，加入甲醇10 mL，在25℃下分別考察索氏提?。?40 min）、超聲提?。?0 min）、振蕩提?。?0 min）方式對(duì)橡膠中N-乙基苯胺的提取效果。用聚-β-環(huán)糊精固相萃取柱凈化，將凈化液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至0.5 mL左右，用正己烷定容至2.0 mL，測(cè)定目標(biāo)物。

為進(jìn)一步優(yōu)化提取方式，考察了渦旋振蕩20 min、渦旋振蕩10 min加超聲提取20 min和超聲提取30 min對(duì)目標(biāo)物含量測(cè)定結(jié)果的影響。

1.3.3 提取次數(shù)優(yōu)化

準(zhǔn)確稱取試樣2.0 g，加入甲醇10 mL，在25 ℃下渦旋振蕩10 min加超聲提取20 min，過濾后收集濾液，用制備的固相萃取柱凈化，將凈化液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至0.5 mL左右，用正己烷定容至2.0 mL，測(cè)定目標(biāo)物含量；在濾渣中加入10 mL甲醇，重復(fù)提取操作，測(cè)定提取液中目標(biāo)物含量；再次在濾渣中加入10 mL甲醇，重復(fù)上述操作，測(cè)定提取液中目標(biāo)物含量。

1.3.4 提取溫度優(yōu)化

準(zhǔn)確稱取試樣2.0 g，加入甲醇10 mL，分別在20，25，30，35，40，45和50 ℃下渦旋振蕩10 min加超聲提取20 min，用聚-β-環(huán)糊精固相萃取柱凈化，將凈化液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至0.5 mL左右，用正己烷定容至2.0 mL，測(cè)定目標(biāo)物含量。

1.3.5 超聲提取時(shí)間優(yōu)化

準(zhǔn)確稱取試樣2.0 g，加入甲醇10 mL，在25 ℃下分別渦旋振蕩10 min加超聲提取10，20，30，40，50和60 min，用聚-β-環(huán)糊精固相萃取柱凈化，將凈化液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至0.5 mL左右，用正己烷定容至2.0 mL，測(cè)定目標(biāo)物含量。

1.3.6 試樣顆粒大小

將制備的樣品（厚度3 mm）裁剪成長度和寬度分別為1 mm×3 mm，2 mm×3 mm，3 mm×3 mm和5 mm×3 mm的1#—4#試樣顆粒。稱取2.0 g試樣，加入甲醇10 mL，在25 ℃下渦旋振蕩10 min加超聲提取20 min，用聚-β-環(huán)糊精固相萃取柱凈化，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)凈化液至0.5 mL左右，用正己烷定容到2.0 mL，測(cè)定目標(biāo)物含量。

1.4 檢測(cè)方法準(zhǔn)確性

1.4.1 檢出限和標(biāo)準(zhǔn)曲線

配制質(zhì)量濃度為0.05 mg·L-1的4種目標(biāo)物標(biāo)準(zhǔn)溶液，在優(yōu)化的儀器條件下，通過測(cè)定目標(biāo)物的信噪比，以3倍噪聲計(jì)算檢測(cè)限，檢出低限以10倍信噪比計(jì)算。

苯胺標(biāo)準(zhǔn)溶液質(zhì)量濃度分別為13，26，52，104，130和208 μg·mL-1；N-乙 基 苯 胺 標(biāo) 準(zhǔn) 溶液 質(zhì) 量 濃 度 分 別 為25，50，100，200，250和400 μg·mL-1；鄰苯二胺和N，N-二乙基對(duì)苯二胺標(biāo)準(zhǔn)溶液質(zhì)量濃度分別為10，20，40，80，100和160 μg·mL-1，在優(yōu)化的儀器條件下制作苯胺含量（Y）-標(biāo)準(zhǔn)溶液質(zhì)量濃度（X）標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.4.2 加標(biāo)回收率

在4種不同的試樣中加入3種梯度濃度的苯胺類衍生物，加入10 mL甲醇，在25 ℃下渦旋振蕩10 min加超聲提取20 min，過濾并收集濾液；加入10 mL甲醇至濾渣，重復(fù)上述操作步驟，將2次的濾液合并，用制備的固相萃取柱凈化，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至0.5 mL左右，用正己烷定容到2.0 mL，在優(yōu)化儀器條件下測(cè)定目標(biāo)物含量。

1.4.3 樣品測(cè)定

在優(yōu)化條件下進(jìn)行樣品中目標(biāo)物含量測(cè)定。

2 結(jié)果與討論

2.1 提取條件的優(yōu)化

2.1.1 提取溶劑

不同提取溶劑對(duì)苯胺類物質(zhì)的提取效果對(duì)比如圖1所示。從圖1可以看出，相比于二氯甲烷、乙醇和丙酮，甲醇對(duì)于4種目標(biāo)物都有很高的提取效率，因此可以選取甲醇作為提取溶劑。

2.1.2 提取方式

不同提取方式的苯胺類物質(zhì)含量測(cè)定結(jié)果對(duì)比如圖2所示。從圖2可以看出，超聲提取效果最好、振蕩提取效果最差，索氏提取效果居中，而其提取時(shí)間最長。結(jié)合實(shí)驗(yàn)室條件和提取效率，選取振蕩提取和超聲提取為提取目標(biāo)物的主要方式。

優(yōu)化提取方式的目標(biāo)物含量測(cè)定結(jié)果對(duì)比如圖3所示。從圖3可以看出，3種提取方式測(cè)定目標(biāo)物含量的結(jié)果都很好，旋渦振蕩提取效率最高，考慮到實(shí)驗(yàn)室操作的效率，選取渦旋振蕩（10 min）加超聲提?。?0 min）的提取方式。

2.1.3 提取次數(shù)

不同提取次數(shù)的目標(biāo)物含量測(cè)定結(jié)果對(duì)比如圖4所示。從圖4可以看出，經(jīng)過2次提取后，已經(jīng)提取出目標(biāo)物總量的90%以上，因此采取2次提取。

2.1.4 提取溫度

不同提取溫度下目標(biāo)物含量測(cè)定結(jié)果對(duì)比如圖5所示。從圖5可以看出：隨著提取溫度的升高，苯胺、N-乙基苯胺、鄰苯二胺和N，N-二乙基對(duì)苯二胺的含量測(cè)定結(jié)果都有不同程度的減??；20～30 ℃提取溫度范圍內(nèi)目標(biāo)物含量測(cè)定結(jié)果的穩(wěn)定性較好?？紤]到實(shí)驗(yàn)室的操作性，提取溫度選取20～30 ℃。

2.1.5 超聲提取時(shí)間

不同超聲提取時(shí)間下目標(biāo)物含量測(cè)定結(jié)果對(duì)比如圖6所示。從圖6可以看出：隨著超聲提取時(shí)間的延長，苯胺、N-乙基苯胺、鄰苯二胺和N，N-二乙基對(duì)苯二胺含量測(cè)定結(jié)果均先增大后減?。辉诔曁崛r(shí)間為20 min時(shí)，目標(biāo)物含量測(cè)定結(jié)果最大。因此選取超聲提取時(shí)間為20 min。

2.1.6 試樣顆粒大小

不同試樣顆粒大小的目標(biāo)物含量測(cè)定結(jié)果對(duì)比見圖7。在4種試樣顆粒尺寸情況下，苯胺、N-乙基苯胺、鄰苯二胺和N，N-二乙基對(duì)苯二胺含量的檢測(cè)結(jié)果相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）分別為3.25%，4.74%，2.81%和3.34%。從圖7可以看出，試樣顆粒大小對(duì)于測(cè)定結(jié)果沒有顯著影響。為了提高制樣效率，采用5 mm×3 mm試樣顆粒尺寸即可。

2.2 色譜條件優(yōu)化

2.2.1 色譜柱的選擇

固定相為質(zhì)量分?jǐn)?shù)5%二苯基聚硅氧烷加質(zhì)量分?jǐn)?shù)95%二甲基聚硅氧烷的HP-5，DB-5，SPE-5和AT-5色譜柱均能使目標(biāo)物很好地分離，采用HP-5色譜柱的典型氣相色譜如圖8所示。在分離30 min內(nèi)，分析計(jì)算各目標(biāo)物的典型色譜峰面積，4種目標(biāo)物的質(zhì)量濃度分別為104，200，80和80 mg·L-1。

2.2.2 升溫程序

考察柱箱的升溫程序?qū)δ繕?biāo)物的分離效果，初始溫度在50 ℃下保持2 min，隨后優(yōu)化階升溫度，分別以4，10和15 ℃·min-1的升溫速率階升到170 ℃，然后以40 ℃·min-1的升溫速率階升到280℃，保持2 min。

結(jié)果表明，各階升溫下，對(duì)目標(biāo)物都能夠很好地分離?？紤]保留時(shí)間及試驗(yàn)的時(shí)效性，試驗(yàn)選擇4 ℃·min-1作為階升1的升溫速率階升到170℃，再以40 ℃·min-1的升溫速率階升到220 ℃。色譜柱升溫程序見表1。

2.3 方法的準(zhǔn)確性

2.3.1 檢出限和標(biāo)準(zhǔn)曲線

方法的標(biāo)準(zhǔn)曲線線性方程和檢出限見表2。從表2可以看出，各目標(biāo)物測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性相關(guān)因數(shù)均大于0.998，線性相關(guān)性良好。

表2 方法的標(biāo)準(zhǔn)曲線線性方程和檢出限Tab.2 Standard curve linear equations and detection limits of methods

2.3.2 加標(biāo)回收率

目標(biāo)物加標(biāo)回收率見表3。由表3可見，各目標(biāo)物的加標(biāo)回收率在89.00%～110.51%范圍內(nèi)，RSD均在1.61%～9.94%范圍內(nèi)，符合一般檢測(cè)的精密度要求。

表3 目標(biāo)物加標(biāo)回收率（n＝6）Tab.3 Spiked recoveries of target objects（n＝6）

2.3.3 樣品測(cè)定

樣品測(cè)定結(jié)果見表4。由表4可見，樣品測(cè)定的RSD為4.91%～10.7%，符合一般檢測(cè)的精密度要求。

表4 樣品測(cè)定結(jié)果（n＝6）Tab.4 Sample test results（n＝6） mg·kg-1

3 結(jié)論

（1）采用固相萃取-氣相色譜法測(cè)定橡膠中苯胺、N-乙基苯胺、鄰苯二胺和N，N-二乙基對(duì)苯二胺，優(yōu)化測(cè)定步驟為：準(zhǔn)確稱取2.0 g試樣，加入10 mL乙醇，在25～30 ℃渦旋振蕩10 min，再超聲提取20 min，過濾，收集濾液，重復(fù)提取操作1次，2次濾液合并，用制備的固相萃取柱凈化，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至約0.5 mL，用正己烷定容至2 mL，用孔徑為0.45 μm有機(jī)相濾膜過濾；采用HP-5色譜柱，在初始溫度50 ℃保持2 min后，以4 ℃·min-1速率升溫至170 ℃并保持5 min，再以40 ℃·min-1速率升溫至280 ℃并保持2 min的升溫程序下進(jìn)行濾液的氣相色譜測(cè)試。

（2）在優(yōu)化提取條件下，苯胺、N-乙基苯胺、鄰苯二胺和N，N-二乙基對(duì)苯二胺的測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性相關(guān)因數(shù)均大于0.998，檢出限分別為0.005，0.260，0.005和0.005 mg·kg-1，加 標(biāo)回收率為89.00%～110.51%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.61%～9.94%。