黃劍鋒
延平區(qū)動物疫病預防控制中心,福建南平 353000
口蹄疫是豬、牛、羊等主要家畜和其他家養(yǎng)、野生偶蹄動物共患的一種急性、熱性、高度接觸性傳染病,易感動物達70 多種。臨床特征是在口腔黏膜、蹄部和乳房皮膚發(fā)生水皰性疹。該病傳播途徑多、速度快,曾多次在世界范圍內(nèi)暴發(fā)流行,造成巨大政治、經(jīng)濟損失。鑒于此,世界動物衛(wèi)生組織(OIE)將其列為A類傳染病之首。O型口蹄疫為全世界流行最廣的一個血清型,我國流行的口蹄疫主要為O、A、C三型及ZB型(云南保山型)。犢牛需通過母源抗體及后續(xù)疫苗免疫來獲得抵御病毒的能力,而母源抗體又會直接影響疫苗免疫效果的好壞,因此了解犢牛體內(nèi)母源抗體的消長規(guī)律可以準確地掌握疫苗免疫的最佳時機,為犢牛提供有效保護。本文選擇福建省南平市延平區(qū)的2 個規(guī)模奶牛場,對40 頭犢牛的母源抗體、免疫抗體進行持續(xù)監(jiān)測,掌握其消長規(guī)律,以建立適合該場犢牛的口蹄疫疫苗常規(guī)免疫程序,同時探索延平區(qū)現(xiàn)階段廣泛應用的口蹄疫疫苗的抗體產(chǎn)生時間和免疫持續(xù)有效性,建立有針對性的免疫程序,為控制口蹄疫疫情提供科學依據(jù)。
選擇在延平區(qū)12 家規(guī)?;膛鲋芯哂写硇訟場和B場母牛及犢牛各20 頭。
1.2.1 疫苗
A場常年免疫中牧實業(yè)有限公司蘭州生物藥廠生產(chǎn)的口蹄疫O型-A型二價滅活疫苗,批號:2007005;B場常年免疫內(nèi)蒙金宇寶靈生物制品有限公司口蹄疫O型-A型二價滅活疫苗,批號:20137019。
1.2.2 試驗器材
一次性5 mL采血器、酶標儀、低速離心機、1.5 mL離心管。
1.2.3 檢測試劑
試劑盒由蘭州獸醫(yī)研究所生產(chǎn),批號:20210107103-4。
隨機在A、B場各選取犢牛20 頭及對應母牛20 頭,在出生當天、4 周齡、6 周齡、9 周齡、12 周齡檢測母源抗體水平,根據(jù)母源抗體的消減情況確定首免、二免時間(首免的時間以母源抗體合格率低于50%確定,首免后以免疫抗體合格率低于50%確定進行二免),免疫劑量參照各試驗廠家產(chǎn)品使用說明書[3]。
犢牛分別在出生當天、4 周齡、6 周齡、9 周齡、12 周齡和首免后的3 周、4 周、6 周和二免后的4 周、8 周、12 周各進行1 次抽血檢測;采集血樣、分離血清,進行抗體測定,根據(jù)檢測結果制定免疫時間。
母牛采用尾靜脈采血,采血時舉起牛尾,在尾根10 cm左右中點凹陷處消毒后垂直進針采血,每頭牛采血不少于3 mL。結束后,消毒止血;犢牛采用頸靜脈采血,將犢牛頭部左側(cè)保定,在采血部位下方,壓迫靜脈血管,使其充盈,如水管狀,觸摸有波動感,在進針部位,剪毛、消毒,與皮膚成45°角進針,見血流出后即可采集血樣,每頭牛采血不少于3 mL。結束后,消毒止血[1]。
將采好的牛血清垂直靜置2~3 h(主要視環(huán)境溫度而定,溫度越高時間越短),采血器中有血清析出后,用1.5 mL離心管分裝,個別無血清析出或分裝時有血細胞混入的,采用低速離心機4000 r/min,離心2~3 min,取上清液,分裝并做好標記,填寫完整采樣單。采血應在飼喂完成后,有飲水的情況下進行,避免出現(xiàn)血清蛋白凍[2]。
O型抗體(母源)免疫合格率判定,根據(jù)抗體試劑盒說明書的判定標準:病毒抗原對照4 孔,去掉最高和最低OD值,計算剩余兩孔的平均OD值,再除以2,即得到50%對照值,該值為臨界值,表示阻斷50%反應的對照OD值。
ELISA抗體效價與免疫動物攻毒保護關系:牛、羊抗體效價≥(1∶128),99%以上保護;抗體效價在(1∶90)~(1∶22)之間,50%保護;抗體效價≤(1∶16),不保護。根據(jù)《延平區(qū)動物疫病監(jiān)測與流行病學調(diào)查計劃(2021—2025年)》文件,口蹄疫血清學監(jiān)測使用液相阻斷ELSIA試驗抗體效價≥(1∶128),判為合格;抗體效價<(1∶128),判為不合格,存欄家畜的抗體合格率≥70%時,判定為群體免疫合格[4](表1)。
表1 口蹄疫O型抗體效價判定
從表2中看出,A場產(chǎn)后當天口蹄疫O型抗體效價合格率達100%,B場產(chǎn)后當天口蹄疫O型抗體效價合格率達95%。
表2 口蹄疫O型抗體檢測結果
從表3中看出,A場犢??谔阋逴型母源抗體合格率4~12 周分別為(100%、90%、65%、50%);B場犢??谔阋逴型母源抗體合格率4~12 周分別為(95%、75%、55%)。根據(jù)試驗要求,在9周齡時對B場的試驗組犢牛進行首次免疫,12周齡對A場的試驗組犢牛進行首次免疫[5]。
表3 犢牛在不同周齡時口蹄疫O型母源抗體檢測結果
從表4中看出,A場犢牛首免3~6周免疫抗體合格率分別為(85%、75%、55%);B場犢牛首免3 周免疫抗體合格率為28%。B場犢牛有2 頭因腹瀉淘汰退出試驗組,根據(jù)試驗要求,A場于首免后6 周開始二免,B場首免后3 周開始二免。
從表6中看出,A場犢牛首免4~12周免疫抗體合格率分別為(95%、95%、90%);B場犢牛首免4~12周免疫抗體合格率分別為(100%、100%、94%)。
表6 犢牛二免后4~12周口蹄疫O型抗體檢測結果
A場母牛產(chǎn)后當天18 頭口蹄疫免疫抗體效價在(1∶256)以上,2 頭為(1∶128);B場母牛產(chǎn)后當天2 頭母牛免疫抗體效價為(1∶1024),17 頭在(1∶256)~(1∶128)之間,1 頭為(1∶64),由于母源抗體不穩(wěn)定,同時采樣和檢測、飼養(yǎng)狀況及犢牛個體差異等,影響了犢牛母源抗體效價維持情況,使母源抗體效價B場沒有達到A場的維持效果[6]。
表5 犢牛首免后3~6周口蹄疫O型抗體檢測結果
在B場中使用的是金宇寶靈生物制品有限公司生產(chǎn)的疫苗,根據(jù)疫苗使用說明書要求首免后21 日齡是需要進行二免,所以B場首免后3周口出現(xiàn)蹄疫免疫抗體合格率不理想是有可能的,同時疫苗免疫在操作中是否出現(xiàn)失誤,也是其中關鍵因素。因此,在養(yǎng)殖場疫苗免疫過程中,有效的免疫操作,是否出現(xiàn)漏免,無效免的情況,也是至關緊要的[7]。
從此次試驗結果來看,犢牛何時進行首免,應根據(jù)各場免疫、飼養(yǎng)、個體情況而定,首先應考慮到母牛的免疫時間,免疫抗體效果在產(chǎn)前是否達到可保護的范圍,應考慮在產(chǎn)前對其進行抗體檢測,并進行適當?shù)难a免,確保提供足夠的母源抗體;其次在首免前對犢牛的個體差異、飼養(yǎng)和體質(zhì)狀況等綜合情況進行評估,可考慮在免疫前進行一次群體抗體檢測后,再確定首次免疫時間[8]。
根據(jù)此次試驗結果,對A場的犢牛免疫程序設計為:犢牛出生后12 周開始首免,首免后第6周開始2 免,以后每4 個月免疫1 次;B場的犢牛免疫程序設計為:犢牛出生后9 周開始首免,首免后第3周開始2 免,以后每4 個月免疫1 次。通過隨后對A、B兩場犢牛的兩次口蹄疫免疫抗體抽檢結果表明,重新設計后的免疫程序是有效的,能較好的對兩場犢牛提供免疫保護。