黃劍鋒

延平區(qū)動物疫病預(yù)防控制中心，福建南平 353000

0 引言

口蹄疫是豬、牛、羊等主要家畜和其他家養(yǎng)、野生偶蹄動物共患的一種急性、熱性、高度接觸性傳染病，易感動物達(dá)70 多種。臨床特征是在口腔黏膜、蹄部和乳房皮膚發(fā)生水皰性疹。該病傳播途徑多、速度快，曾多次在世界范圍內(nèi)暴發(fā)流行，造成巨大政治、經(jīng)濟(jì)損失。鑒于此，世界動物衛(wèi)生組織（OIE）將其列為A類傳染病之首。O型口蹄疫為全世界流行最廣的一個血清型，我國流行的口蹄疫主要為O、A、C三型及ZB型（云南保山型）。犢牛需通過母源抗體及后續(xù)疫苗免疫來獲得抵御病毒的能力，而母源抗體又會直接影響疫苗免疫效果的好壞，因此了解犢牛體內(nèi)母源抗體的消長規(guī)律可以準(zhǔn)確地掌握疫苗免疫的最佳時機(jī)，為犢牛提供有效保護(hù)。本文選擇福建省南平市延平區(qū)的2 個規(guī)模奶牛場，對40 頭犢牛的母源抗體、免疫抗體進(jìn)行持續(xù)監(jiān)測，掌握其消長規(guī)律，以建立適合該場犢牛的口蹄疫疫苗常規(guī)免疫程序，同時探索延平區(qū)現(xiàn)階段廣泛應(yīng)用的口蹄疫疫苗的抗體產(chǎn)生時間和免疫持續(xù)有效性，建立有針對性的免疫程序，為控制口蹄疫疫情提供科學(xué)依據(jù)。

1 試驗動物和材料

1.1 試驗動物

選擇在延平區(qū)12 家規(guī)?；膛鲋芯哂写硇訟場和B場母牛及犢牛各20 頭。

1.2 試驗材料

1.2.1 疫苗

A場常年免疫中牧實業(yè)有限公司蘭州生物藥廠生產(chǎn)的口蹄疫O型-A型二價滅活疫苗，批號：2007005；B場常年免疫內(nèi)蒙金宇寶靈生物制品有限公司口蹄疫O型-A型二價滅活疫苗，批號：20137019。

1.2.2 試驗器材

一次性5 mL采血器、酶標(biāo)儀、低速離心機(jī)、1.5 mL離心管。

1.2.3 檢測試劑

試劑盒由蘭州獸醫(yī)研究所生產(chǎn)，批號：20210107103-4。

2 試驗方法

2.1 試驗原則

隨機(jī)在A、B場各選取犢牛20 頭及對應(yīng)母牛20 頭，在出生當(dāng)天、4 周齡、6 周齡、9 周齡、12 周齡檢測母源抗體水平，根據(jù)母源抗體的消減情況確定首免、二免時間（首免的時間以母源抗體合格率低于50%確定，首免后以免疫抗體合格率低于50%確定進(jìn)行二免），免疫劑量參照各試驗廠家產(chǎn)品使用說明書[3]。

犢牛分別在出生當(dāng)天、4 周齡、6 周齡、9 周齡、12 周齡和首免后的3 周、4 周、6 周和二免后的4 周、8 周、12 周各進(jìn)行1 次抽血檢測；采集血樣、分離血清，進(jìn)行抗體測定，根據(jù)檢測結(jié)果制定免疫時間。

2.2 采樣方法

母牛采用尾靜脈采血，采血時舉起牛尾，在尾根10 cm左右中點(diǎn)凹陷處消毒后垂直進(jìn)針采血，每頭牛采血不少于3 mL。結(jié)束后，消毒止血；犢牛采用頸靜脈采血，將犢牛頭部左側(cè)保定，在采血部位下方，壓迫靜脈血管，使其充盈，如水管狀，觸摸有波動感，在進(jìn)針部位，剪毛、消毒，與皮膚成45°角進(jìn)針，見血流出后即可采集血樣，每頭牛采血不少于3 mL。結(jié)束后，消毒止血[1]。

2.3 血清制備

將采好的牛血清垂直靜置2～3 h（主要視環(huán)境溫度而定，溫度越高時間越短），采血器中有血清析出后，用1.5 mL離心管分裝，個別無血清析出或分裝時有血細(xì)胞混入的，采用低速離心機(jī)4000 r/min，離心2～3 min，取上清液，分裝并做好標(biāo)記，填寫完整采樣單。采血應(yīng)在飼喂完成后，有飲水的情況下進(jìn)行，避免出現(xiàn)血清蛋白凍[2]。

2.4 判定標(biāo)準(zhǔn)

O型抗體（母源）免疫合格率判定，根據(jù)抗體試劑盒說明書的判定標(biāo)準(zhǔn)：病毒抗原對照4 孔，去掉最高和最低OD值，計算剩余兩孔的平均OD值，再除以2，即得到50%對照值，該值為臨界值，表示阻斷50%反應(yīng)的對照OD值。

ELISA抗體效價與免疫動物攻毒保護(hù)關(guān)系：牛、羊抗體效價≥（1∶128），99%以上保護(hù)；抗體效價在（1∶90）～（1∶22）之間，50%保護(hù)；抗體效價≤（1∶16），不保護(hù)。根據(jù)《延平區(qū)動物疫病監(jiān)測與流行病學(xué)調(diào)查計劃（2021—2025年）》文件，口蹄疫血清學(xué)監(jiān)測使用液相阻斷ELSIA試驗抗體效價≥（1∶128），判為合格；抗體效價＜（1∶128），判為不合格，存欄家畜的抗體合格率≥70%時，判定為群體免疫合格[4]（表1）。

表1 口蹄疫O型抗體效價判定

3 結(jié)果

3.1 產(chǎn)后當(dāng)天母牛與犢牛的抗體結(jié)果

從表2中看出，A場產(chǎn)后當(dāng)天口蹄疫O型抗體效價合格率達(dá)100%，B場產(chǎn)后當(dāng)天口蹄疫O型抗體效價合格率達(dá)95%。

表2 口蹄疫O型抗體檢測結(jié)果

3.2 母源抗體消漲情況

從表3中看出，A場犢?？谔阋逴型母源抗體合格率4～12 周分別為（100%、90%、65%、50%）；B場犢牛口蹄疫O型母源抗體合格率4～12 周分別為（95%、75%、55%）。根據(jù)試驗要求，在9周齡時對B場的試驗組犢牛進(jìn)行首次免疫，12周齡對A場的試驗組犢牛進(jìn)行首次免疫[5]。

表3 犢牛在不同周齡時口蹄疫O型母源抗體檢測結(jié)果

3.3 首免后抗體消漲情況

從表4中看出，A場犢牛首免3～6周免疫抗體合格率分別為（85%、75%、55%）；B場犢牛首免3 周免疫抗體合格率為28%。B場犢牛有2 頭因腹瀉淘汰退出試驗組，根據(jù)試驗要求，A場于首免后6 周開始二免，B場首免后3 周開始二免。

3.4 二免后抗體消漲情況

從表6中看出，A場犢牛首免4～12周免疫抗體合格率分別為（95%、95%、90%）；B場犢牛首免4～12周免疫抗體合格率分別為（100%、100%、94%）。

表6 犢牛二免后4～12周口蹄疫O型抗體檢測結(jié)果

4 討論

4.1 母源抗體對犢年的影響

A場母牛產(chǎn)后當(dāng)天18 頭口蹄疫免疫抗體效價在（1∶256）以上，2 頭為（1∶128）；B場母牛產(chǎn)后當(dāng)天2 頭母牛免疫抗體效價為（1∶1024），17 頭在（1∶256）～（1∶128）之間，1 頭為（1∶64），由于母源抗體不穩(wěn)定，同時采樣和檢測、飼養(yǎng)狀況及犢牛個體差異等，影響了犢牛母源抗體效價維持情況，使母源抗體效價B場沒有達(dá)到A場的維持效果[6]。

表5 犢牛首免后3～6周口蹄疫O型抗體檢測結(jié)果

4.2 B場首免后時間維持較短的原因

在B場中使用的是金宇寶靈生物制品有限公司生產(chǎn)的疫苗，根據(jù)疫苗使用說明書要求首免后21 日齡是需要進(jìn)行二免，所以B場首免后3周口出現(xiàn)蹄疫免疫抗體合格率不理想是有可能的，同時疫苗免疫在操作中是否出現(xiàn)失誤，也是其中關(guān)鍵因素。因此，在養(yǎng)殖場疫苗免疫過程中，有效的免疫操作，是否出現(xiàn)漏免，無效免的情況，也是至關(guān)緊要的[7]。

4.3 如何更好的確定首免時間的建議

從此次試驗結(jié)果來看，犢牛何時進(jìn)行首免，應(yīng)根據(jù)各場免疫、飼養(yǎng)、個體情況而定，首先應(yīng)考慮到母牛的免疫時間，免疫抗體效果在產(chǎn)前是否達(dá)到可保護(hù)的范圍，應(yīng)考慮在產(chǎn)前對其進(jìn)行抗體檢測，并進(jìn)行適當(dāng)?shù)难a(bǔ)免，確保提供足夠的母源抗體；其次在首免前對犢牛的個體差異、飼養(yǎng)和體質(zhì)狀況等綜合情況進(jìn)行評估，可考慮在免疫前進(jìn)行一次群體抗體檢測后，再確定首次免疫時間[8]。

5 結(jié)論

根據(jù)此次試驗結(jié)果，對A場的犢牛免疫程序設(shè)計為：犢牛出生后12 周開始首免，首免后第6周開始2 免，以后每4 個月免疫1 次；B場的犢牛免疫程序設(shè)計為：犢牛出生后9 周開始首免，首免后第3周開始2 免，以后每4 個月免疫1 次。通過隨后對A、B兩場犢牛的兩次口蹄疫免疫抗體抽檢結(jié)果表明，重新設(shè)計后的免疫程序是有效的，能較好的對兩場犢牛提供免疫保護(hù)。