歐秀玲，蔡擴(kuò)軍 ，徐 敏

1 新疆華博檢測(cè)技術(shù)有限公司，新疆烏魯木齊 8300002 新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)學(xué)院，新疆烏魯木齊 8300523 烏魯木齊市動(dòng)物疾病控制與診斷中心，新疆烏魯木齊 8300634 烏魯木齊市奶業(yè)協(xié)會(huì)，新疆烏魯木齊 830063

0 引言

金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus，SA）是一種普遍存在于外界環(huán)境中的致病菌[1]，既對(duì)食品衛(wèi)生安全及人類健康造成嚴(yán)重的威脅[2]，也可引起哺乳動(dòng)物的乳房炎，使產(chǎn)奶量和奶品質(zhì)下降[3]。近年來，隨著生駝乳中多種生物學(xué)活性物質(zhì)被不斷發(fā)現(xiàn)，駝乳的醫(yī)學(xué)保健功能得到了人們的認(rèn)可，駝乳的需求量激增，駱駝養(yǎng)殖數(shù)量迅速增加，帶動(dòng)了駱駝產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。但駝乳與其他動(dòng)物乳的飲用方式不同，當(dāng)?shù)啬撩褚话悴唤?jīng)煮沸，而將生駝乳直接發(fā)酵成酸駝乳飲用，因此，對(duì)生駝乳中致病微生物的研究具有重要的公共衛(wèi)生學(xué)意義。本研究對(duì)養(yǎng)殖環(huán)節(jié)生駝乳中的金黃色葡萄球菌進(jìn)行分離與鑒定，并對(duì)其耐藥性進(jìn)行分析，為保證生駝乳的質(zhì)量安全提供參考。

1 材料與方法

1.1 主要試劑

7.5%氯化鈉肉湯，北京陸橋技術(shù)股份有限公司；金黃色葡萄球菌顯色培養(yǎng)基，法國(guó)科瑪嘉CHROMagar公司；大豆酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基（TSA），美國(guó)BD公司；藥敏片，杭州濱和微生物試劑有限公司；革蘭氏染色液，珠海貝索生物技術(shù)有限公司。

1.2 主要儀器

全自動(dòng)微生物檢定儀（VITEK2）及配套的微生物生化鑒定卡，法國(guó)梅里埃公司；生物安全柜，上海力申科學(xué)儀器有限公司；顯微鏡，賽默飛世爾科技公司；恒溫?fù)u床（TH2-92B），上海博訊醫(yī)療生物儀器股份有限公司；恒溫培養(yǎng)箱（BPC-250F），上海一恒科學(xué)儀器有限公司；電子天平（FA2104N），上海精密科學(xué)儀器有限公司。

1.3 金黃色葡萄球菌的分離、鑒定

1.3.1 樣品采集

對(duì)駝乳乳頭進(jìn)行消毒，棄去前三把奶，用無菌采樣袋采集300 mL生駝乳，放入含有冰袋的運(yùn)輸箱，低溫運(yùn)輸至實(shí)驗(yàn)室。

1.3.2 檢驗(yàn)程序

參考《GB 4789.10—2016食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn)》金黃色葡萄球菌檢驗(yàn)制定檢驗(yàn)程序[4]。具體見圖1。

圖1 金黃色葡萄球菌檢驗(yàn)程序

1.3.3 操作步驟

（1）樣品的處理及增菌

量取25 mL生駝乳于225 mL 7.5%氯化鈉肉湯中，振蕩混勻，（36±1）℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)18 ～24 h。

（2）分離

用無菌接種環(huán)取培養(yǎng)好的增菌液，連續(xù)劃線接種于科馬嘉金黃色葡萄球菌顯色培養(yǎng)基，并觀察菌落生長(zhǎng)、形態(tài)、顯色情況。

（3）純化

從金黃色葡萄球菌顯色培養(yǎng)基上輕輕挑取一個(gè)目標(biāo)菌落，再次劃線接種于大豆酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基（TSA）平板上進(jìn)行純化。

（4）革蘭氏染色鏡檢

從大豆酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基（TSA）平板上挑取疑似菌落涂片固定，按照革蘭氏染色液試劑盒說明書中初染、媒染、脫色、復(fù)染等四個(gè)步驟進(jìn)行革蘭氏染色，并用顯微鏡鏡檢。

（5）全自動(dòng)微生物鑒定儀進(jìn)行生化鑒定

根據(jù)革蘭氏染色情況，挑取TSA平板上的疑似菌落，選擇革蘭氏陽性細(xì)菌鑒定卡，用VITEK-2全自動(dòng)微生物鑒定儀進(jìn)行鑒定。

2 結(jié)果

2.1 金黃色葡萄球菌的分離、鑒定

2.1.1 顯色培養(yǎng)基上菌落顏色及形態(tài)

金黃色葡萄球菌在科馬嘉金黃色葡萄球菌顯色培養(yǎng)基上呈現(xiàn)粉紅色光滑菌落，如圖2。

圖2 金黃色葡萄球菌在顯色培養(yǎng)基上的菌落形態(tài)

2.1.2 革蘭氏染色鏡檢

從平板上挑取疑似菌落進(jìn)行革蘭氏染色，染色結(jié)果顯示，金黃色葡萄球菌為革蘭氏陽性菌，顯微鏡下呈葡萄狀排列，無芽胞，無莢膜，直徑為0.5 ～1.0 μm（4×100 倍，圖3）。

圖3 金黃色葡萄球菌鏡檢

2.1.3 VITEK-2全自動(dòng)微生物鑒定儀進(jìn)行生化鑒定

利用VITEK-2全自動(dòng)微生物鑒定儀對(duì)可疑菌落進(jìn)行鑒定，結(jié)果顯示，共鑒定出的8 株陽性金黃色葡萄球菌；生化結(jié)果顯示：分離陽性菌株對(duì)精氨酸雙水解酶1、β-D-半乳糖苷酶、磷酸酶、焦谷氨酸芳胺酶、多粘菌素B耐受、D-半乳糖、L-乳酸鹽等生化反應(yīng)呈陽性，對(duì)磷脂酰磷脂酶C、D-木糖、α-葡萄糖苷酶、環(huán)式胡精、α-甘露糖苷酶等生化反應(yīng)呈陰性（表1）。

表1 金黃色葡萄球菌全自動(dòng)微生物鑒定儀生化鑒定結(jié)果

2.2 藥敏試驗(yàn)結(jié)果

對(duì)分離的8 株金黃色葡萄球菌菌株利用紙片擴(kuò)散法進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，結(jié)果顯示，8 株菌株對(duì)青霉素耐藥率達(dá)75%；對(duì)氧氟沙星敏感率最高，可達(dá)100%；對(duì)頭孢哌酮鈉、環(huán)丙沙星敏感性較高，敏感率可達(dá)87.5%；對(duì)鏈霉素、卡那霉素、阿莫西林、頭孢唑啉和頭孢西丁，四環(huán)素、氯霉素、頭孢噻肟、林可霉素、苯唑西林、慶大霉素較敏感，敏感率在37.5 %～75.0 %之間。見表2。

表2 金黃色葡萄球菌的藥敏試驗(yàn)

3 討論和結(jié)論

駝乳被譽(yù)為“沙漠白金”，具有獨(dú)特的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和功能。目前對(duì)駝乳的研究主要集中于其功能的研究和其有益菌的分離與鑒定。蔡瑞麗[5]和王瑞[6]的研究中均發(fā)現(xiàn)駝乳可防治2型糖尿??；徐德洲等[7]的研究發(fā)現(xiàn)，駝乳還對(duì)急性酒精肝損傷有一定的防治功效；努爾古麗·熱合曼[8]從酸駝乳中可分離出優(yōu)勢(shì)的乳酸菌株；任冬艷等[9]利用常規(guī)分離結(jié)合16s rRNA測(cè)序技術(shù)也分離和鑒定出駝乳中的乳酸桿菌菌株。

金黃色葡萄球菌是引起駱駝乳房炎的主要病原菌之一，危害駱駝健康，降低駝乳的產(chǎn)量和品質(zhì)[10]。本研究對(duì)駝乳中分離的金黃色葡萄球菌進(jìn)行耐藥性分析發(fā)現(xiàn)，與牛乳中分離的金黃色葡萄球菌相比，其耐藥性較低，可能與駱駝平時(shí)很少用藥有關(guān)[11]。藥敏試驗(yàn)表明，青霉素耐藥率最高，氧氟沙星、環(huán)丙沙星、頭孢哌酮鈉、頭孢唑啉、頭孢西丁、頭孢噻肟敏感性較高，可用于本地區(qū)由金黃色葡萄球菌引起駱駝乳房炎的治療。