魏 野, 馬亞南, 張傳玲

(江蘇省徐州市兒童醫(yī)院 檢驗(yàn)科, 江蘇 徐州, 221000)

兒童、青少年和成人1型糖尿病(T1DM)患者可表現(xiàn)出低骨密度、骨折和骨折延遲愈合[1-2]。堿性磷酸酶(ALP)、Ⅰ型前膠原氨基末端肽(PINP)、脫氧吡啶啉(DPD)可作為特異性骨轉(zhuǎn)換生物標(biāo)志物[3-4]。T1DM引起的骨骼結(jié)構(gòu)改變涉及多種機(jī)制，包括高血糖引起的鈣和維生素D代謝改變、骨骼中Ⅰ型膠原的糖基化、胰島素樣生長因子-1水平降低、骨髓脂質(zhì)沉積以及氧化應(yīng)激水平增加等[5]。糖尿病患者的高血糖水平可通過調(diào)控線粒體中活性氧的產(chǎn)生、葡萄糖自氧化、多元醇通路代謝途徑、晚期糖基化終產(chǎn)物的形成，增加氧化應(yīng)激水平[6]。此外，活性氧可通過增加脂質(zhì)過氧化的最終產(chǎn)物丙二醛(MDA)增高脂質(zhì)過氧化水平。目前，關(guān)于T1DM患兒骨轉(zhuǎn)換指標(biāo)與氧化應(yīng)激指標(biāo)關(guān)系的研究報道較少。本研究探討T1DM患兒骨轉(zhuǎn)換標(biāo)志物ALP、PINP、DPD水平與氧化應(yīng)激指數(shù)谷胱甘肽、超氧化物歧化酶(SOD)、MDA之間的關(guān)系，現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2020年1月—2021年12月徐州市兒童醫(yī)院收治的68例T1DM患兒作為研究對象(T1DM組,n=68), 進(jìn)行橫斷面研究。另選擇同期性別、年齡相匹配的68例健康體檢兒童和青少年作為對照(對照組,n=68)。納入標(biāo)準(zhǔn): 年齡<18歲者; 符合世界衛(wèi)生組織關(guān)于T1DM的診斷標(biāo)準(zhǔn)[7]者; 資料完整，依從性高者。排除標(biāo)準(zhǔn): 腎病、肝病、甲狀腺或甲狀旁腺功能不全，以及自身免疫性疾病等慢性疾病者; 潰瘍性結(jié)腸炎、克羅恩病等胃腸道吸收障礙性疾病者; 近6個月接受類固醇等可能影響骨骼的藥物的患者; 有骨折史者; 近6個月服用過抗氧化劑者。本研究符合2013年修訂的《世界醫(yī)學(xué)協(xié)會赫爾辛基宣言》要求。

1.2 方法

記錄入組兒童和青少年性別、年齡、身高、體質(zhì)量、病程等臨床資料。體質(zhì)量指數(shù)(BMI)=體質(zhì)量(kg)/身高(m)2。

1.3 觀察指標(biāo)

采集入組兒童和青少年清晨空腹尿液5～10 mL, 1 500轉(zhuǎn)/min離心10 min, 分離上清液。采集入組兒童和青少年清晨空腹肘靜脈血3～5 mL, 4 000轉(zhuǎn)/min 離心20 min, 分離血清、血漿?？崭寡?FBG)采用己糖激酶法檢測。糖化血紅蛋白(HbA1c)采用高效液相色譜法檢測。血清ALP使用Olympus AU 5400型全自動生化分析儀以酶聯(lián)免疫吸附法且按照試劑盒(abcam, 貨號ab83369)說明書要求檢測。血漿PINP采用酶聯(lián)免疫吸附法，按照試劑盒(廣東固康，貨號FC007)說明書要求檢測。尿DPD使用拜耳ACS180SE全自動化學(xué)發(fā)光分析儀以酶聯(lián)免疫吸附法且按照試劑盒(eBioscience, 貨號hz-H2020c)說明書要求檢測，以肌酐矯正。血漿SOD、血清谷胱甘肽采用酶聯(lián)免疫吸附法，按照試劑盒(abcam, 貨號ab65354)說明書要求檢測。血漿MDA采用比色法，按照試劑盒(bioMerieux, 貨號REF252562)說明書要求檢測。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析

2 結(jié) 果

2.1 一般臨床資料比較

2組在性別、年齡、身高、體質(zhì)量、BMI方面比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05); T1DM組FBG、HbA1c高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(t=19.681,P<0.001;t=19.934,P<0.001)。見表1。

表1 2組一般臨床資料比較

2.2 骨轉(zhuǎn)換指標(biāo)和氧化應(yīng)激指標(biāo)比較

2組在ALP方面比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(t=0.331,P=0.741); T1DM組PINP、谷胱甘肽、SOD低于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(t=15.273,P<0.001;t=16.110,P<0.001;t=7.067,P<0.001), T1DM組DPD、MDA高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(t=7.702,P<0.001;t=10.164,P<0.001)。見表2。

表2 2組骨轉(zhuǎn)換指標(biāo)和氧化應(yīng)激指標(biāo)比較

2.3 T1DM患兒PINP、DPD與氧化應(yīng)激指標(biāo)的關(guān)系

針對T1DM患兒的Pearson相關(guān)性分析結(jié)果顯示, PINP與HbA1c、MDA呈負(fù)相關(guān)，與谷胱甘肽、SOD呈正相關(guān), DPD與HbA1c、MDA呈正相關(guān)，與谷胱甘肽、SOD呈負(fù)相關(guān)，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05或P<0.01); PINP、DPD與病程無相關(guān)性(P>0.05)。見表3。

表3 T1DM患兒PINP、DPD與氧化應(yīng)激指標(biāo)的關(guān)系

2.4 影響T1DM患兒PINP、DPD水平的因素

分別以T1DM患兒PINP、DPD水平為因變量，谷胱甘肽、SOD、MDA為自變量，以進(jìn)入概率α≤0.05、移出概率α≥0.10進(jìn)行多元線性回歸分析，結(jié)果顯示，谷胱甘肽、MDA是T1DM患兒PINP水平的影響因素(β=0.612,P=0.002;β=-4.055,P=0.038), 谷胱甘肽是T1DM患兒DPD水平的影響因素(β=-0.103,P=0.018)。見表4。

表4 影響T1DM患兒PINP、DPD水平的因素

3 討 論

骨轉(zhuǎn)換生物標(biāo)志物ALP、PINP、DPD等具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、穩(wěn)定性好等優(yōu)點(diǎn)，近年來在T1DM患者中得到廣泛應(yīng)用。骨轉(zhuǎn)換生物標(biāo)志物能反映骨吸收和骨形成的具體變化，是骨骼健康的重要標(biāo)志。研究[8-9]證實(shí), T1DM患者骨轉(zhuǎn)換指標(biāo)與健康非糖尿病人群存在顯著差異。谷胱甘肽、SOD、MDA等氧化應(yīng)激標(biāo)志物水平增加作為T1DM患者骨骼結(jié)構(gòu)改變的機(jī)制之一，是臨床研究的熱點(diǎn)。T1DM患者的高血糖水平會增加機(jī)體氧化應(yīng)激水平，而氧化應(yīng)激會通過改變骨轉(zhuǎn)換狀態(tài)對骨骼產(chǎn)生負(fù)面影響。然而，關(guān)于兒童和青少年T1DM骨轉(zhuǎn)換指標(biāo)與氧化應(yīng)激指標(biāo)關(guān)系的相關(guān)研究較少。

本研究表明，兒童和青少年T1DM人群PINP水平顯著低于健康對照人群，與既往研究[10]報道一致。PINP水平的降低反映了T1DM患者骨形成的減少，這或許與胰島素樣生長因子-1對骨形成的刺激作用減弱有關(guān)[11]。此外，兒童和青少年T1DM人群ALP水平和健康對照人群無顯著差異，與相關(guān)研究[9]結(jié)果一致，但與李琪等[12]研究中糖尿病患者ALP水平高于對照組的結(jié)果相矛盾。上述ALP水平的變化差異可能是由于T1DM患者腸道或肝臟受累，而不是由于骨骼。研究[13]指出，骨轉(zhuǎn)換標(biāo)志物水平降低的原因是骨形成減少，與骨吸收增加無關(guān)。然而本研究發(fā)現(xiàn)，反映兒童和青少年T1DM人群骨吸收狀態(tài)的DPD水平顯著高于健康對照人群，與既往研究[9]結(jié)果一致，但與MIAZGOWSKI T等[14]的研究結(jié)果相矛盾，這可能與入組患兒年齡、BMI等一般臨床資料差異有關(guān)。本研究發(fā)現(xiàn)，兒童、青少年T1DM人群PINP與HbA1c呈負(fù)相關(guān), DPD與HbA1c呈正相關(guān)，與既往研究[15]結(jié)果一致。研究結(jié)果提示，更好的血糖控制可能有助于維持兒童和青少年T1DM人群的骨骼健康。本研究未發(fā)現(xiàn)糖尿病病程與PINP、DPD之間存在相關(guān)性，或許與納入人群病程較短有關(guān)。

本研究發(fā)現(xiàn)，兒童和青少年T1DM人群有顯著低水平的抗氧化指數(shù)(谷胱甘肽、SOD)和高水平的脂質(zhì)過氧化標(biāo)記物MDA水平，表明糖尿病患兒的氧化應(yīng)激狀態(tài)發(fā)生改變。兒童和青少年T1DM人群PINP與MDA呈負(fù)相關(guān)，與谷胱甘肽、SOD呈正相關(guān)。研究結(jié)果反映了氧化應(yīng)激對骨形成過程的負(fù)面影響，這與氧化應(yīng)激抑制成骨細(xì)胞分化、損害成骨細(xì)胞功能和增加成骨細(xì)胞凋亡，進(jìn)而影響骨形成密切相關(guān)[16]。此外，氧化應(yīng)激增加了晚期糖基化終產(chǎn)物水平，最終導(dǎo)致成骨細(xì)胞活性和增殖能力降低[17]。本研究顯示, DPD與MDA呈正相關(guān)，與谷胱甘肽、SOD呈負(fù)相關(guān)，提示氧化應(yīng)激在促進(jìn)兒童和青少年T1DM人群骨吸收中具有作用，其與氧化應(yīng)激可通過增加破骨細(xì)胞數(shù)量、激活前破骨細(xì)胞向破骨細(xì)胞分化、提高破骨細(xì)胞活性及增加骨吸收進(jìn)程有關(guān)[18]。本研究多元線性回歸分析發(fā)現(xiàn)，在T1DM患兒中，谷胱甘肽、MDA是PINP水平的影響因素; 谷胱甘肽是DPD水平的影響因素，與相關(guān)報道[9]一致，表明兒童和青少年T1DM人群氧化應(yīng)激指標(biāo)與骨轉(zhuǎn)換指標(biāo)密切相關(guān)，且氧化應(yīng)激會通過改變骨轉(zhuǎn)換指標(biāo)影響骨骼健康。但本研究為單中心、小樣本、橫斷面研究，還需展開多中心、大樣本的臨床研究深入驗(yàn)證。

綜上所述，兒童、青少年T1DM患者氧化應(yīng)激水平升高與骨轉(zhuǎn)換生物標(biāo)志物水平改變密切相關(guān)。因此，預(yù)防和治療兒童、青少年糖尿病性骨病，臨床應(yīng)著重考慮控制血糖、降低氧化應(yīng)激水平。