馮 冰，強建康，羅建強

心力衰竭是一種復(fù)雜的臨床綜合征，以心排血量和組織供血不足為主要特征，是各種心臟病的嚴重階段，發(fā)病率較高，5年存活率與惡性腫瘤相近[1-2]。心房顫動是嚴重的心房電活動紊亂，隨著年齡增長患病率升高。心力衰竭和心房顫動常同時存在，心房顫動發(fā)生時心房收縮功能喪失，導(dǎo)致心力衰竭[3-4]。微小RNA(microRNA，miRNA)是一種內(nèi)源性非編碼小分子RNA，可調(diào)節(jié)基因活動各個方面，參與早期胚胎發(fā)育、細胞增殖、凋亡等一系列分化進程。相關(guān)研究表明，miRNA與心力衰竭、心律失常、心肌病等多種心臟疾病的發(fā)生密切相關(guān)，且對心力衰竭病理過程具有重要的調(diào)節(jié)作用，涉及心肌肥大、心肌凋亡、心肌纖維化、心肌離子通道改變和心臟能量代謝異常等多方面，可能作為疾病診斷的新一代生物標志物；miR-31-5p是miRNA中一員，miR-31-5p表達水平下調(diào)可能與慢性心力衰竭發(fā)生有關(guān)[5-6]。胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白7(insulin-like growth factor-binding protein 7，IGFBP7)屬于胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白(insulin-like growth factor-binding protein，IGFBP)的家族成員。相關(guān)研究顯示，IGFBP7是心室肥厚和心力衰竭等疾病的生物標記物[7-8]。目前關(guān)于miR-31-5p、IGFBP7在心力衰竭合并心房顫動中作用的研究報道較少。本研究心力衰竭合并心房顫動病人血清miR-31-5p、IGFBP7表達水平變化及臨床意義，以期為心力衰竭合并心房顫動的臨床診療提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2018年9月—2020年9月于我院就診的心力衰竭合并心房顫動病人106例作為合并組，心力衰竭未合并心房顫動病人106例作為未合并組，另選擇同期于我院進行體檢的健康者106名作為對照組。根據(jù)紐約心臟病協(xié)會(NYHA)心功能分級，其中合并組心功能Ⅱ級25例，Ⅲ級52例，Ⅳ級29例；未合并組心功能Ⅱ級29例，Ⅲ級46例，Ⅳ級31例。病人納入標準：符合心力衰竭[9]、心房顫動[10]相關(guān)診斷標準；臨床資料完整；病人或家屬知情同意，并簽署知情同意書。排除標準：合并嚴重肝、腎功能不全病人；患有代謝性疾病病人；患有惡性腫瘤病人。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準通過，符合《赫爾辛基宣言》。

1.2 方法

1.2.1 主要試劑與儀器 RNA提取試劑盒(貨號15596-026)購自美國Invitrogen公司；反轉(zhuǎn)錄試劑盒(貨號ALH266-PTO)購自北京百奧萊博科技有限公司；miScript SYBR?Green qPCR Mix(貨號218073)購自德國QIAGEN公司；NanoDrop微量分光光度計、Applied Biosystems 實時熒光定量聚合鏈式反應(yīng)(RT-qPCR)儀購自賽默飛世爾科技(中國)有限公司；Allegra X-15R低溫高速離心機購自美國貝克曼庫爾特公司；卡盒式SpectraMax Paradigm多功能酶標儀購自美谷分子儀器(上海)有限公司；所有引物由上海生物工程股份有限公司合成。

1.2.2 樣品采集 所有研究對象入院時抽取空腹靜脈血3～5 mL，常溫下靜置，以2 500 r/min離心15 min，離心后分離上層血清，置于-80 ℃儲存待用。

1.2.3 血清miR-31-5p表達水平檢測 RT-qPCR檢測血清miR-31-5p表達水平。RNA提取試劑盒提取總RNA，紫外分光光度法鑒定RNA純度和完整性，逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA。RT-qPCR反應(yīng)體系20 μL：miScript SYBR?Green Mix 10 μL，cDNA 4.0 μL，正向、反向引物(10 μmol/L)各1 μL，ddH2O 4.0 μL。miR-31-5p正向引物為5′-GGAGGCAAGATGCTGGC-3′，反向引物為5′-GTGCGTGTCGTGGAGTC-3′。內(nèi)參U6正向引物為5′-GCTTCGGCAGCACATATACTAAAAT-3′，反向引物為5′-CGCTTCACGAATTTGCGTGTCAT-3′。RT-qPCR循環(huán)參數(shù)為92 ℃ 60 s；95 ℃ 30 s，56 ℃ 30 s，72 ℃ 30 s，40個循環(huán)。以2-△△CT法計算血清miR-31-5p相對表達量。

1.2.4 血清IGFBP7表達水平檢測 采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)檢測血清IGFBP7表達水平，嚴格按照IGFBP7 ELISA試劑盒(上海酶聯(lián)生物科技有限公司，貨號：ml022791)說明書進行實驗操作。

2 結(jié) 果

2.1 3組一般資料比較 合并組、未合并組及對照組年齡、男性比例、體質(zhì)指數(shù)(BMI)及吸煙比例比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。詳見表1。

表1 3組一般資料比較

2.2 3組血清miR-31-5p、IGFBP7表達水平比較 與對照組比較，合并組及未合并組血清miR-31-5p表達水平均降低，且合并組低于未合并組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；合并組及未合并組血清IGFBP7表達水平均升高，且合并組高于未合并組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。詳見表2。

表2 3組血清miR-31-5p、IGFBP7表達水平比較(±s)

2.3 不同心功能分級心力衰竭合并心房顫動病人血清miR-31-5p、IGFBP7水平比較 與Ⅱ級比較，Ⅲ級及Ⅳ級病人血清miR-31-5p表達水平均降低，且Ⅳ級低于Ⅲ級病人(P<0.05)；Ⅲ級及Ⅳ級病人血清IGFBP7表達水平均升高，且Ⅳ級病人高于Ⅲ級病人(P<0.05)。詳見表3。

表3 不同心功能分級心力衰竭合并心房顫動病人血清miR-31-5p、IGFBP7水平比較(±s)

2.4 心力衰竭合并心房顫動的影響因素分析 以心力衰竭血清miR-31-5p、IGFBP7水平分為miR-31-5p高表達(>0.78)和低表達(≤0.78)，IGFBP7高表達(>56.07 ng/mL)和低表達(≤56.07 ng/mL)。將上述指標納入自變量，以心力衰竭是否發(fā)生心房顫動為因變量，進行Logistic回歸分析，結(jié)果顯示，血清miR-31-5p低表達、血清IGFBP7高表達均為心力衰竭病人發(fā)生心房顫動的危險因素(P<0.05)。詳見表4。

表4 心力衰竭合并心房顫動的影響因素分析

2.5 血清miR-31-5p、IGFBP7對心力衰竭合并心房顫動的診斷價值 ROC曲線分析結(jié)果顯示，血清miR-31-5p診斷心力衰竭合并心房顫動的ROC曲線下面積(AUC)為0.833，95%CI[0.775，0.892]，截斷值為0.890，靈敏度為91.5%，特異度為70.8%；血清IGFBP7診斷心力衰竭合并心房顫動的AUC為0.902，95%CI[0.861，0.943]，截斷值為54.384 ng/mL，靈敏度為76.4%，特異度為91.5%；血清miR-31-5p聯(lián)合IGFBP7診斷心力衰竭合并心房顫動的AUC為0.941，95%CI[0.912，0.971]，靈敏度為83.0%，特異度為90.6%。詳見圖1。

圖1 血清miR-31-5p、IGFBP7診斷心力衰竭合并心房顫動的ROC曲線圖

3 討 論

心力衰竭是一種常見的臨床綜合征，主要病理特征為心排血量降低，心肌收縮能力下降和肺循環(huán)、體循環(huán)淤血等，多發(fā)生在心血管疾病的終末階段[11-12]。心房顫動是臨床常見的心律失常之一，指規(guī)則、有序的心房電活動喪失，代之快速、無序的心房顫動波，患病率為0.4%～1.0%。心力衰竭和心房顫動常同時存在，心房顫動發(fā)生率與心力衰竭嚴重程度呈正相關(guān)，心房顫動發(fā)生時心房喪失收縮功能，長期心率加快，導(dǎo)致或加重心力衰竭。心力衰竭時心臟泵血功能下降，心房內(nèi)血液淤積，心房增大、纖維化，傳導(dǎo)性和興奮性不均一，促使心房顫動發(fā)生和維持。心力衰竭導(dǎo)致離子通道重構(gòu)，引起心房傳導(dǎo)速度和不應(yīng)期改變，從而誘發(fā)心房顫動發(fā)生。心房顫動導(dǎo)致快速、不規(guī)則心室率，同時引起心肌缺血、基質(zhì)重構(gòu)等，進一步降低心肌功能[13-14]。心力衰竭合并心房顫動病人病死率高于單一疾病病人，但二者相互作用機制尚未明確。應(yīng)用血清標志物診斷心力衰竭和心房顫動是近年來研究熱點。

miRNA是一種由22～25個核苷酸組成的非編碼RNA，miRNA表達具有高度的細胞特異性和組織特異性，與動脈粥樣硬化、慢性心力衰竭等心血管疾病的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。miRNA可穩(wěn)定地存在于血清中，具有高度的敏感性與特異性，因此，血清miRNA檢測與分析被認為是一種特異性高、可操作性強的技術(shù)，在疾病的診斷和病情評估方面發(fā)揮著重要的作用。miRNA在心房顫動及心力衰竭的發(fā)病機制，國內(nèi)外研究主要集中在心肌細胞中的表達水平及調(diào)控機制[15-16]。miR-31-5p是miRNA中一員，李璐等[6]研究表明，慢性心力衰竭病人miR-31-5p表達水平下調(diào)，可能與慢性心力衰竭發(fā)生有關(guān)。關(guān)于心力衰竭合并心房顫動病人miR-31-5p水平的研究報道較少，本研究分析miR-31-5p是否成為評估心力衰竭合并心房顫動的一項新型生物指標。本研究結(jié)果顯示，與對照組比較，合并組及未合并組血清miR-31-5p表達水平均降低，且合并組低于未合并組；與Ⅱ級病人比較，Ⅲ級及Ⅳ級病人血清miR-31-5p表達水平均降低，且Ⅳ級病人低于Ⅲ級病人，表明miR-31-5p可能在心房顫動及心力衰竭發(fā)病機制中發(fā)揮重要的作用，參與心力衰竭合并心房顫動發(fā)生發(fā)展，且與心力衰竭合并心房顫動病人心功能分級密切相關(guān)。本研究中血清miR-31-5p低表達是影響心力衰竭病人心房顫動發(fā)生的危險因素，進一步說明血清miR-31-5p可能與心力衰竭病人心房顫動發(fā)生密切相關(guān)，miR-31-5p水平降低提示心力衰竭病人心房顫動發(fā)生風(fēng)險較高。進一步研究結(jié)果顯示，血清miR-31-5p診斷心力衰竭病人心房顫動的AUC為0.833，截斷值為0.890，靈敏度為91.5%，特異度為70.8%，表明血清miR-31-5p對心力衰竭病人發(fā)生心房顫動具有一定的診斷價值。血清miR-31-5p水平<0.890時，提示心力衰竭病人發(fā)生心房顫動的可能大，應(yīng)及早監(jiān)測和評估。

血清IGFBP7是G1期細胞周期阻滯的相關(guān)標志物，與細胞衰老密切相關(guān)，可高親和力地與胰島素樣生長因子(insulin like growth factor，IGF)結(jié)合，拮抗IGF與受體結(jié)合發(fā)揮作用，參與細胞增殖、凋亡、衰老和血管生成等多種生理過程[8，17]。IGFBP7在正常人中表達極低，有研究顯示，高水平IGFBP7通過血管內(nèi)皮細胞產(chǎn)生活性氧，造成炎癥級聯(lián)反應(yīng)，加速心肌細胞衰老，并可能參與心室重構(gòu)、心肌僵硬等病理生理過程，導(dǎo)致心肌舒張功能下降，甚至心力衰竭[17-18]。本研究結(jié)果顯示，對照組、未合并組及合并組血清IGFBP7表達水平依次升高，且心力衰竭合并心房顫動病人血清IGFBP7表達水平隨著心功能分級增加而升高，提示IGFBP7參與心肌細胞的衰老進程，引起心肌舒張功能下降，進而可能與心力衰竭病人心房顫動的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，且與心功能分級關(guān)系密切。進一步研究結(jié)果顯示，血清IGFBP7高表達是影響心力衰竭病人心房顫動發(fā)生的危險因素，且血清IGFBP7診斷心力衰竭合并心房顫動的AUC為0.902，截斷值為54.384 ng/mL，靈敏度為76.4%，特異度為91.5%，表明血清IGFBP7對心力衰竭合并心房顫動具有一定的診斷價值。血清IGFBP7>54.384 ng/mL時，提示發(fā)生心力衰竭合并心房顫動的可能大，可作為臨床早期診斷的輔助指標。本研究ROC曲線分析結(jié)果顯示，血清miR-31-5p聯(lián)合IGFBP7診斷心力衰竭合并心房顫動的AUC為0.941，靈敏度為83.0%，特異度為90.6%，由此表明miR-31-5p聯(lián)合IGFBP7對心力衰竭合并心房顫動的診斷價值更高。

綜上所述，心力衰竭合并心房顫動病人血清miR-31-5p表達水平較低，血清IGFBP7表達水平較高，miR-31-5p、IGFBP7均為心力衰竭病人心房顫動發(fā)生的影響因素，兩者具有一定的診斷價值，且miR-31-5p聯(lián)合IGFBP7診斷價值更高。由于本研究樣本量有限，且miR-31-5p、IGFBP7參與心力衰竭合并心房顫動的機制復(fù)雜，今后應(yīng)擴大樣本量，進一步探討心力衰竭合并心房顫動病人血清miR-31-5p、IGFBP7表達及具體作用機制。