張波（南寧中心血站,廣西 南寧 530007）

乙肝和梅毒居廣西乙類傳染病患者發(fā)病數(shù)前三位[1]，乙肝和梅毒是經(jīng)血傳播性疾病，作為無償獻(xiàn)血常規(guī)檢測(cè)項(xiàng)目得到了采供血機(jī)構(gòu)的高度重視。以膠體金法進(jìn)行乙型肝炎病毒表面抗原/梅毒螺旋體抗體的聯(lián)合檢測(cè)，不僅操作簡(jiǎn)單，而且不需要特殊檢測(cè)儀器和設(shè)備，在廣大獻(xiàn)血人群中進(jìn)行TP和HbsAg篩查時(shí)發(fā)揮了重要作用，有效減少了血液的浪費(fèi)[2]，但是在血液初篩過程中因?yàn)楦鞣N原因?qū)е乱腋魏兔范韭z的情況時(shí)有發(fā)生，不僅造成了血液的浪費(fèi)，還為血液安全埋下了隱患[3]。本文通過分析初篩環(huán)節(jié)TP和HbsAg漏檢的各項(xiàng)因素，探討初篩漏檢的主要原因并為減少血液浪費(fèi)和保障血液安全提供依據(jù)，報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1標(biāo)本來源 2021年7月-11月南寧市各獻(xiàn)血點(diǎn)成功獻(xiàn)血采集的血液標(biāo)本60521份。

標(biāo)本的保存：血液樣本用5ml的EDTA-K2真空采血管留取，2℃-8℃冰箱保存待用。

1.2儀器與試劑 STAR全自動(dòng)加樣系統(tǒng)，帝肯EVO全自動(dòng)加樣系統(tǒng)，F(xiàn)AME全自動(dòng)酶免分析儀，URANUS AE 368全自動(dòng)酶免分析儀。梅毒螺旋體抗體診斷試劑盒（酶聯(lián)免疫法）：北京萬泰生物藥業(yè)股份有限公司（WT）、上海科華生物工程股份有限公司（KH）生產(chǎn)。乙型肝炎病毒表面抗原診斷試劑盒（酶聯(lián)免疫法）：北京萬泰生物藥業(yè)股份有限公司（WT）、法國(guó)伯樂生物藥業(yè)股份有限公司（BL）生產(chǎn)。乙型肝炎病毒表面抗原/梅毒螺旋體抗體聯(lián)合檢測(cè)試劑（膠體金法）：英科新創(chuàng)（廈門）科技股份有限公司（試劑5）生產(chǎn)。所有使用試劑均經(jīng)質(zhì)檢合格，在有效期范圍內(nèi)。

1.3方法

1.3.1留取所有的標(biāo)本經(jīng)離心后（離心條件：離心力1600g，離心時(shí)間20min，離心溫度25℃）采用試劑1和試劑2進(jìn)行常規(guī)抗-TP ELISA檢測(cè)、試劑3和試劑4進(jìn)行常規(guī)抗-HbsAg ELISA檢測(cè)，將兩種試劑初、復(fù)檢測(cè)定的S/CO值≥1的反應(yīng)性標(biāo)本（陽性標(biāo)本）按照血液初篩要求用試劑5重新進(jìn)行檢測(cè)。吸取60-80μL血液標(biāo)本滴在加樣處，加樣15分鐘最終觀察并判斷結(jié)果。

1.3.2用唐山9.0血站血液信息管理系統(tǒng)導(dǎo)出反應(yīng)性標(biāo)本的血液初篩信息，包括采血點(diǎn)、檢測(cè)時(shí)間、檢測(cè)人員、獻(xiàn)血頻次、當(dāng)天采集人數(shù)等信息。

1.3.3統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 計(jì)數(shù)資料利用構(gòu)成比進(jìn)行統(tǒng)計(jì)描述，以[n(%)]表述，統(tǒng)計(jì)分析采用卡方檢驗(yàn)計(jì)算P值，以P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.160521份血液標(biāo)本經(jīng)酶聯(lián)免疫法檢測(cè)后TP和HbsAg反應(yīng)性標(biāo)本共112份，占所有經(jīng)血傳播疾病檢測(cè)項(xiàng)目237份不合格標(biāo)本的47.26%。其中HbsAg反應(yīng)性標(biāo)本60例、TP反應(yīng)性標(biāo)本52例。反應(yīng)性標(biāo)本用膠體金法檢測(cè)HbsAg陽性27例（45%）、陰性33例（55%）；TP陽性37例（71.15%）、陰性15例（28.85%）。不同S/CO值金標(biāo)法檢測(cè)陽性結(jié)果比例，χ2=24.772，P＜0.05，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見表1。

表1 金標(biāo)法再次檢測(cè)反應(yīng)性標(biāo)本漏檢情況[n(%)]

2.2外采、血屋和首次、重復(fù)獻(xiàn)血者反應(yīng)性標(biāo)本膠體金法檢測(cè)漏檢情況 膠體金法檢測(cè)TP和HbsAg陽性標(biāo)本和陰性標(biāo)本分別占總獻(xiàn)血人數(shù)的0.11%和0.08%。外采和血屋TP和HbsAg陽性占比，χ2=0.003，P＞0.05，差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。首次和重復(fù)獻(xiàn)血者陽性占比，χ2=4.253，P＜0.05，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見表2。

表2 外采、血屋和首次、重復(fù)獻(xiàn)血者反應(yīng)性標(biāo)本膠體金法檢測(cè)漏檢情況[n(%)]

2.3采血人數(shù)對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響情況 外采和血屋不同采血人數(shù)TP和HbsAg陽性占比，P＜0.05，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。血屋采血人數(shù)16人以上TP和HbsAg漏檢比例為32.81%，外采人數(shù)超過100人時(shí)TP和HbsAg漏檢比例為45.31%，見表3。

表3 血屋和外采不同采血人數(shù)漏檢情況[n(%)]

2.4不同工齡和初篩時(shí)間段漏檢情況 工齡5-10年TP和HbsAg漏檢率分別為51.35%和51.85%。初篩時(shí)間分段統(tǒng)計(jì)TP漏檢各時(shí)間段無明顯差異。HbsAg漏檢9-12時(shí)占比較高，為59.26%，見表4。

表4 不同工齡和初篩時(shí)間段漏檢情況

2.5采血人數(shù)同陽性漏檢標(biāo)本判斷時(shí)間對(duì)比情況 0-5分鐘的39例陽性漏檢標(biāo)本中26例（66.67%）是在采集量大情形發(fā)生。10-15分鐘顯示結(jié)果有8例（12.5%），見表5。

表5 采血人數(shù)與結(jié)果顯示時(shí)間情況

3 討論

乙型肝炎病毒表面抗原/梅毒螺旋抗體聯(lián)合檢測(cè)試劑采用膠體金免疫層析技術(shù)同時(shí)測(cè)定全血、血清或血漿中乙型肝炎病毒表面抗原和梅毒抗體，操作簡(jiǎn)單，檢測(cè)快速、特異度高而且肉眼可判斷結(jié)果[4]，聯(lián)合試劑的應(yīng)用在獻(xiàn)血前經(jīng)血傳播疾病篩查中發(fā)揮了重要的作用。而且通過再次用膠體金法試驗(yàn)驗(yàn)證仍然有15例TP和33例HbsAg陽性漏檢，漏檢率為0.08%，酶聯(lián)免疫法檢測(cè)S/CO值＞10時(shí)膠體金法檢出率較高，而S/CO值＜10時(shí)膠體金法檢出率較低，甚至S/CO值＜5時(shí)只有3例TP顯示陽性（表1），說明膠體金法檢測(cè)TP和HbsAg有一定的漏檢比例，主要是因?yàn)槟z體金試劑靈敏度有限，其需要較高濃度的標(biāo)記，而且直徑較大的膠體金顆粒才有較高的靈敏度[5]，此外，層析速度過快也可導(dǎo)致對(duì)照線很快顯色，檢測(cè)線顯色不明顯出現(xiàn)假陰性的結(jié)果而出現(xiàn)漏檢[6]。提示生產(chǎn)廠家要采用高親和力和高特異性的材料制備試劑，提高試劑靈敏度和穩(wěn)定性。TP和HbsAg的漏檢同時(shí)提示，雖然在血液初篩環(huán)節(jié)已經(jīng)進(jìn)行了TP和HbsAg的檢測(cè)，初篩結(jié)果合格也只是說明初篩結(jié)果符合獻(xiàn)血標(biāo)準(zhǔn)，并不能作為疾病檢測(cè)的依據(jù)。此外，在獻(xiàn)血者健康檢查過程中應(yīng)該重視獻(xiàn)血者健康宣教并且認(rèn)真履行告知義務(wù)，讓獻(xiàn)血者明白無償獻(xiàn)血不能作為化驗(yàn)血液的途徑，不安全的血液會(huì)危害患者的生命和健康，獻(xiàn)血者捐獻(xiàn)具有傳染性的血液會(huì)給受血者帶來危險(xiǎn)，應(yīng)承擔(dān)對(duì)受血者的道德責(zé)任。獻(xiàn)血者如果認(rèn)為已捐獻(xiàn)的血液可能存在安全隱患，應(yīng)當(dāng)盡快告知血站[7]。同時(shí)工作人員在血液及標(biāo)本的處理過程中都應(yīng)該做好個(gè)人防護(hù)，不能因?yàn)楂I(xiàn)血者血液初篩合格就放松防備，應(yīng)當(dāng)謹(jǐn)慎地對(duì)待每一份血液和標(biāo)本，嚴(yán)格按照操作規(guī)程進(jìn)行操作，減少職業(yè)暴露的風(fēng)險(xiǎn)[8]。

既往已經(jīng)在我站成功獻(xiàn)血并且血液檢測(cè)結(jié)果合格的獻(xiàn)血者再次來獻(xiàn)血的，血液初篩時(shí)不再重復(fù)進(jìn)行TP和HbsAg項(xiàng)目的檢測(cè)，導(dǎo)致本研究中重復(fù)獻(xiàn)血者有8例HbsAg和2例TP陽性標(biāo)本漏檢，漏檢率為0.016%。目前部分采供血機(jī)構(gòu)在血液初篩環(huán)節(jié)對(duì)所有獻(xiàn)血者進(jìn)行乙肝/梅毒項(xiàng)目檢測(cè)，這在一定程度上減少了不合格血液的浪費(fèi)，但是會(huì)增加初篩檢測(cè)時(shí)間成本和材料成本。血液初篩環(huán)節(jié)TP和HbsAg膠體金法檢測(cè)陽性標(biāo)本漏檢64例，占比0.11%，這在獻(xiàn)血屋和外采獻(xiàn)血人數(shù)分類統(tǒng)計(jì)中可以看出，漏檢受獻(xiàn)血場(chǎng)所影響不大，但是隨著獻(xiàn)血人數(shù)的增加，漏檢比例增加明顯，采血人數(shù)在15人以內(nèi)時(shí)漏檢比例較低（3.13%），隨著獻(xiàn)血人數(shù)的增加，尤其是外采采血人數(shù)超過100人時(shí)，漏檢比例增幅明顯（45.31%）。說明隨著獻(xiàn)血者增加，工作量明顯增加，在工作人員不足的情況下，為了提高工作效率、加快工作進(jìn)度，在初篩加樣還有觀察時(shí)間上會(huì)大打折扣[9]。膠體金法5分鐘能夠檢出陽性結(jié)果39例中捐血屋31人以上獻(xiàn)血的8例、外采100人以上獻(xiàn)血的18例，占比66.67%。一方面提示血站要根據(jù)血液采集計(jì)劃合理安排工作人員，采集任務(wù)超出工作能力范圍時(shí)，需及時(shí)增補(bǔ)工作人員，以保障優(yōu)質(zhì)的服務(wù)質(zhì)量和血液檢測(cè)質(zhì)量，避免工作人員長(zhǎng)期高強(qiáng)度作業(yè)導(dǎo)致漏檢或者差錯(cuò)事故的發(fā)生。另一方面則是膠體金法5分鐘能夠檢出陽性結(jié)果39例中有13例是在采血量不大的情況下漏檢，說明工作人員日常工作質(zhì)量存在問題，應(yīng)該加大培訓(xùn)力度，在常規(guī)工作下要保持嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ鲬B(tài)度和高度的責(zé)任心。64例陽性漏檢標(biāo)本中，8例是在10-15分鐘內(nèi)出現(xiàn)陽性結(jié)果，提示檢測(cè)人員要嚴(yán)格按照加樣量和時(shí)間觀察要求操作，確保血液初篩結(jié)果的準(zhǔn)確性。S/CO值＞10仍然有17例漏檢（15.18%），說明工作中要注意試劑的保存，防止受潮、避免空氣中暴露時(shí)間過長(zhǎng)，做到隨用隨加，確保試劑的有效和正確使用[10]。工作人員工齡和初篩時(shí)間的統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示，工齡5-10年陽性漏檢率較高，主要原因?yàn)楣ぷ饕欢螘r(shí)間后積累了一定的工作經(jīng)驗(yàn)，雖然初篩操作熟練程度提高，動(dòng)作更加麻利，但是此時(shí)更加容易出現(xiàn)麻痹大意，暴露出工作中不注意細(xì)節(jié)、工作嚴(yán)謹(jǐn)性不夠等問題，從而出現(xiàn)誤判、漏判導(dǎo)致漏檢現(xiàn)象發(fā)生。這也提示血站在對(duì)員工的培訓(xùn)中不僅要加強(qiáng)新員工培訓(xùn)和考核，同時(shí)對(duì)有一定工作經(jīng)驗(yàn)的員工也要進(jìn)行崗位技能的再培訓(xùn)、再學(xué)習(xí)，從而達(dá)到糾偏目的，讓各項(xiàng)操作和技能更趨成熟。

綜上所述，膠體金法檢測(cè)TP和HbsAg在血液初篩環(huán)節(jié)的應(yīng)用價(jià)值明顯，但是仍然存在一定的漏檢比例，這提示一方面要按照要求保存和使用試劑，保證試劑的靈敏性和特異性，另一方面要做好初篩環(huán)節(jié)的關(guān)鍵點(diǎn)控制，加強(qiáng)工作人員職業(yè)技能培訓(xùn)，提高工作人員的質(zhì)量意識(shí)和血液安全意識(shí)，保障獻(xiàn)血場(chǎng)所人員配備，可以進(jìn)一步降低TP和HbsAg漏檢率。