高愛春

宮頸癌是全球女性中第3 個(gè)常見的惡性腫瘤， 僅次于乳腺癌和結(jié)直腸癌，也是癌癥死亡的第4 大原因［1］。目前由于晚期診斷，宮頸癌病人的預(yù)后仍然不能令人滿意［2］。因此，對于宮頸癌迫切需要尋找新的治療策略。隨著生物療法的提出及應(yīng)用，在癌癥治療上取得了一定的進(jìn)展。生物療法又稱細(xì)胞免疫療法，是利用無毒副作用的天然物質(zhì)，一方面直接抑制癌細(xì)胞增殖，阻止腫瘤的生長；另一方面，激活大量的免疫細(xì)胞，靶向攻擊腫瘤細(xì)胞，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡，最終達(dá)到治療腫瘤的目的［3］。復(fù)方苦參注射液是一種具有廣譜抗腫瘤的、廣泛應(yīng)用于臨床的中藥制劑，目前研究顯示，其可減輕宮頸癌病人放化療的毒副作用［4］。復(fù)方苦參注射液能夠直接殺傷腫瘤細(xì)胞，而且能夠增強(qiáng)機(jī)體免疫功能，對宮頸癌等惡性腫瘤的治療具有良好的應(yīng)用前景［5-6］。但復(fù)方苦參注射液對宮頸癌細(xì)胞凋亡的研究目前鮮有報(bào)道。人白細(xì)胞抗原G（HLA-G）由人白細(xì)胞抗原（HLA）家族基因編碼，目前多項(xiàng)研究證實(shí)，HLA-G在多種惡性腫瘤中異常表達(dá)，與病人的預(yù)后不良和對免疫療法的抗性相關(guān)［7-9］。HLA-G 基因的過表達(dá)能夠促進(jìn)宮頸癌細(xì)胞增殖、侵襲和遷移，阻礙細(xì)胞凋亡，促進(jìn)宮頸癌進(jìn)展［10］。因此本實(shí)驗(yàn)于2018 年7月至2019 年8 月以復(fù)方苦參注射液處理人宮頸癌海拉細(xì)胞，探討其對海拉細(xì)胞凋亡的影響以及對HLA-G基因表達(dá)調(diào)控作用。

1 材料與方法

1.1 材料人宮頸癌海拉細(xì)胞（美國ATCC 公司）；RPMI-1640 培養(yǎng)基、胰蛋白酶（美國HyClone 公司）；復(fù)方苦參注射液（山西振東集團(tuán)金晶制藥有限公司）；人膽囊收縮素/縮膽囊素八肽（CCK-8）試劑（美國Sigma 公司）；胎牛血清（杭州四季青生物工程材料有限公司）；Trizol 提取試劑盒、逆轉(zhuǎn)錄試劑盒、熒光定量PCR 檢測試劑盒（日本TaKaRa 公司）；凋亡檢測試劑盒（南京建成生物工程研究所）；二喹啉甲酸（BCA）蛋白濃度檢測試劑盒（碧云天生物技術(shù)研究所）；聚偏二氟乙烯（PVDF）膜（美國Abcam 公司）；電化學(xué)發(fā)光法（ECL）檢測試劑盒（北京百泰克生物技術(shù)有限公司）；轉(zhuǎn)化生長因子β1（TGF-β1）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）和白細(xì)胞介素-4（IL-4）試劑盒（北京雅安達(dá)生物技術(shù)有限公司）；B 細(xì)胞淋巴瘤-2（Bcl-2）抗體、Bcl-2 相關(guān)X 蛋白（Bax）抗體、活化胱天蛋白酶-3（cleaved-caspase-3）抗體、HLA-G 抗體和二抗（美國CST公司）。

1.2 細(xì)胞培養(yǎng)人宮頸癌海拉細(xì)胞接種于含10%胎牛血清RPMI-1640 培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中，置5%二氧化碳、37 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，每天觀察細(xì)胞生長狀態(tài)，及時(shí)更換新鮮的培養(yǎng)基，待細(xì)胞生長密度達(dá)90%時(shí)，將細(xì)胞用0.25%的胰蛋白酶消化，進(jìn)行傳達(dá)培養(yǎng)，取對數(shù)生長期的海拉細(xì)胞進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

1.3 實(shí)驗(yàn)分組實(shí)驗(yàn)設(shè)為四組，每組設(shè)置3 個(gè)復(fù)孔，分別為0、100、200、500 mL/L 復(fù)方苦參注射液組（濃度梯度設(shè)定根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果）。將對數(shù)增殖期的海拉細(xì)胞接種于96 孔板中，置37 ℃培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)，24 h 后棄去原培養(yǎng)基，其中0 mL/L 復(fù)方苦參注射液組加入含等體積的二甲基亞砜的培養(yǎng)基，其余各組分別加入含終濃度為100、200、500 mL/L復(fù)方苦參注射液的培養(yǎng)基。將各組海拉細(xì)胞置37 ℃培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)48 h。

1.4 CCK-8法檢測各組海拉細(xì)胞干預(yù)48 h后，分別向每孔細(xì)胞中加入10 μL CCK-8 試劑，輕輕混勻，置37 ℃培養(yǎng)箱中繼續(xù)孵育4 h，用酶標(biāo)儀檢測每孔細(xì)胞吸光度，波長為450 nm。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3 次，取均值，以測得的吸光度反映細(xì)胞增殖能力。

1.5 平板克隆形成實(shí)驗(yàn)各組處于對數(shù)生長期的海拉細(xì)胞以200/皿接種于60 mm 的培養(yǎng)皿中，于37 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)14 d 左右，皿中出現(xiàn)肉眼可見的細(xì)胞克隆時(shí)終止培養(yǎng)，除去培養(yǎng)上清液，以磷酸緩沖鹽溶液（PBS）浸洗2 次，用多聚甲醛（40 g/L）固定15 min，然后使用Giemsa 染色15 min，洗去染液，空氣中干燥，在倒置顯微鏡下觀察并計(jì)數(shù)≥50 個(gè)細(xì)胞克隆數(shù)，計(jì)算克隆形成率，克隆形成率=（克隆形成數(shù)/200）×100%。

圖1 流式細(xì)胞儀檢測不同濃度復(fù)方苦參注射液干預(yù)組宮頸癌海拉細(xì)胞凋亡情況

1.6 流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞周期各組海拉細(xì)胞處理48 h后，收集并以0.25%的胰蛋白酶消化細(xì)胞，用PBS 洗滌細(xì)胞2次，離心去上清，調(diào)整細(xì)胞濃度為1×106個(gè)/毫升，向細(xì)胞中添加碘化丙啶（PI）染液，置冰上避光染色30 min，加入等體積的PBS，使用流式細(xì)胞儀檢測各組細(xì)胞周期比例。

1.7 流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡收集處理48 h 后各組海拉細(xì)胞，用不含乙二胺四乙酸的0.25%的胰蛋白酶消化細(xì)胞，用預(yù)冷的PBS洗滌細(xì)胞，離心棄上清，分別向各組細(xì)胞中添加結(jié)合緩沖液500 μL，制成1×106個(gè)/毫升的單細(xì)胞懸液，再依次加入膜聯(lián)蛋白V-異硫氰酸熒光素（Annexin V-FITC）和PI 各5 μL，避光反應(yīng)15 min，1 h內(nèi)上流式細(xì)胞儀檢測。

1.8 酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）檢測不同濃度的復(fù)方苦參注射液干預(yù)海拉細(xì)胞48 h 后，收集細(xì)胞培養(yǎng)上清液，采用ELISA 檢測上清液中TGF-β1、TNF-α 和IL-4 含量。參照ELISA 說明書進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作，后續(xù)在酶標(biāo)儀450 nm 波長處檢測，實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，計(jì)算樣品中TGF-β1、TNF-α和IL-4含量。

1.9 實(shí)時(shí)熒光定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（qRTPCR）檢測海拉細(xì)胞經(jīng)不同濃度的復(fù)方苦參注射液干預(yù)48 h 后，收集細(xì)胞，以Trizol 提取細(xì)胞中總RNA，使用逆轉(zhuǎn)錄試劑盒合成互補(bǔ)DNA（cDNA），調(diào)整cDNA 濃度，使用熒光定量PCR 檢測試劑盒進(jìn)行擴(kuò)增，反應(yīng)條件為：95 ℃預(yù)變性5 min，95 ℃變性30 s，60 ℃退火20 s，72 ℃延伸15 s，共40個(gè)循環(huán)。反應(yīng)結(jié)束后分析熔煉曲線，得出Ct 值，以甘油醛-3-磷酸脫氫酶（GAPDH）為內(nèi)參，采用2-ΔΔCt法計(jì)算各組海拉細(xì)胞中HLA-G mRNA 相對表達(dá)水平。HLA-G 引物：正向5’-GAGGAGACACGGAACACCAAG-3’；反向5’-GTCGCAGCCAATCATCCACT-3’。GAPDH引物：正 向5’-GTGAAGCAGGCGTCGGA-3’；反 向5’-AGCCCCAGCGTCAAAGG-3’。

1.10 蛋白質(zhì)印跡法檢測不同濃度的復(fù)方苦參注射液干預(yù)海拉細(xì)胞48 h 后，分別收集各組細(xì)胞，添加細(xì)胞裂解液，冰上裂解30 min，離心提取細(xì)胞中總蛋白。采用BCA 法對蛋白定量后，蛋白樣品與加樣緩沖液按比例混合，加熱致蛋白變性，采用100 g/L的十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳，電泳結(jié)束后采用濕轉(zhuǎn)法將凝膠上的蛋白轉(zhuǎn)移至PVDF 膜上。在50 g/L 脫脂奶粉中封閉1 h，添加一抗（抗Bax 1∶500稀釋，抗Bcl-2 1∶500稀釋，抗cleaved-caspase-3 1∶800 稀釋，抗HLA-G 1∶500 稀釋），4 ℃過夜孵育。等滲緩沖鹽溶液（TBST）洗膜15 min×3次，加入二抗1∶3 000 稀釋，室溫孵育1 h，TBST 洗膜15 min×3 次，化學(xué)發(fā)光，顯影，定影，以凝膠成像系統(tǒng)掃描拍照。以GAPDH 進(jìn)行標(biāo)定，采用Image J 軟件分析各蛋白條帶灰度值，計(jì)算各組細(xì)胞中目的蛋白表達(dá)水平。

1.11 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法計(jì)量數(shù)據(jù)均以± s 表示，以軟件SPSS 21.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，采用單因素方差分析比較多組間差異，多組間的兩兩比較采用SNK-q 檢驗(yàn)，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 復(fù)方苦參注射液對人宮頸癌海拉細(xì)胞增殖抑制的影響與0 mL/L 復(fù)方苦參注射液組比較，各復(fù)方苦參注射干預(yù)組細(xì)胞吸光度均降低（P＜0.05），克隆形成率明顯下降（P＜0.05），且具有劑量依賴性（P＜0.05）。提示復(fù)方苦參注射可明顯抑制宮頸癌海拉細(xì)胞的增殖。見表1。

2.2 復(fù)方苦參注射液可阻滯海拉細(xì)胞周期進(jìn)程與0 mL/L比，100、200、500 mL/L組G0/G1期細(xì)胞比例明顯升高，S 期細(xì)胞比例明顯降低（P＜0.05），G2/M 期細(xì)胞比例無變化（P＞0.05）。提示復(fù)方苦參注射液能夠阻滯宮頸癌海拉細(xì)胞周期進(jìn)程。見表2。

2.3 復(fù)方苦參注射液可誘導(dǎo)海拉細(xì)胞凋亡0、100、200、500 mL/L 復(fù)方苦參注射液組細(xì)胞凋亡率分 別 為（6.02±0.35）% 、（14.38±1.06）% 、（20.62±1.57）%、（31.84±2.11）%（F=173.96，P＜0.001）；與0mL/L 比，100、200、500 mL/L 組細(xì)胞凋亡率升高（P＜0.05），且隨濃度的升高而升高（P＜0.05）。提示復(fù)方苦參注射液能夠呈濃度依賴性的誘導(dǎo)宮頸癌海拉細(xì)胞凋亡。見圖1。

表1 不同濃度復(fù)方苦參注射液干預(yù)組對人宮頸癌海拉細(xì)胞增殖的影響/± s

表1 不同濃度復(fù)方苦參注射液干預(yù)組對人宮頸癌海拉細(xì)胞增殖的影響/± s

注：①與0 mL/L 比，P＜0.05。②與100 mL/L 比，P＜0.05。③與200 mL/L比，P＜0.05。

組別0 mL/L 100 mL/L 200 mL/L 500 mL/L F值P值重復(fù)次數(shù)3 3 3 3吸光度2.43±0.11 1.97±0.08①1.41±0.08①②0.92±0.04①②③205.65＜0.001克隆形成率/%40.26±3.12 33.97±2.06①27.42±2.18①②19.84±2.03①②③40.44＜0.001

表2 不同濃度復(fù)方苦參注射液干預(yù)組對宮頸癌海拉細(xì)胞周期的影響/± s

表2 不同濃度復(fù)方苦參注射液干預(yù)組對宮頸癌海拉細(xì)胞周期的影響/± s

注：①與0 mL/L 比，P＜0.05。②與100 mL/L 比，P＜0.05。③與200 mL/L比，P＜0.05。

組別0 mL/L 100 mL/L 200 mL/L 500 mL/L F值P值重復(fù)次數(shù)3 3 3 3 G0/G1期69.02±2.06 75.98±2.13①80.24±2.07①②86.21±2.42①②③33.33＜0.001 S期23.86±1.17 19.33±1.02①13.49±0.88①②7.21±0.82①②③162.94＜0.001 G2/M期7.12±0.61 6.69±0.79 6.27±0.71 6.58±0.69 0.75 0.551

2.4 復(fù)方苦參注射液對海拉細(xì)胞中Bax、Bcl-2 和cleaved-caspase-3 蛋白表達(dá)的影響與0 mL/L 比，復(fù)方苦參注射液處理的海拉細(xì)胞中Bax 和cleavedcaspase-3 蛋白表達(dá)水平上調(diào)（P＜0.05），Bcl-2 蛋白表達(dá)水平下調(diào)（P＜0.05），且具有劑量依賴性（P＜0.05）。表明復(fù)方苦參注射液可誘導(dǎo)Bax 蛋白表達(dá)，激活胱天蛋白酶（caspase）-3蛋白，抑制Bcl-2蛋白表達(dá)。見圖2，表3。

圖2 蛋白質(zhì)印跡法檢測不同濃度復(fù)方苦參注射液干預(yù)組海拉細(xì)胞中Bax、Bcl-2和cleaved-caspase-3蛋白水平

表3 不同濃度復(fù)方苦參注射液干預(yù)組海拉細(xì)胞中Bax、Bcl-2和cleaved-caspase-3蛋白水平比較/± s

表3 不同濃度復(fù)方苦參注射液干預(yù)組海拉細(xì)胞中Bax、Bcl-2和cleaved-caspase-3蛋白水平比較/± s

注：Bcl-2 為B 細(xì)胞淋巴瘤-2，Bax 為Bcl-2 相關(guān)X 蛋白，cleavedcaspase-3為活化胱天蛋白酶-3。①與0 mL/L 比，P＜0.05。②與100 mL/L 比，P＜0.05。③與200 mL/L比，P＜0.05。

組別0 mL/L 100 mL/L 200 mL/L 500 mL/L F值P值重復(fù)次數(shù)3333 Bcl-2 0.54±0.04 0.46±0.05①0.31±0.04①②0.17±0.02①②③58.60＜0.001 Bax 0.23±0.02 0.41±0.03①0.58±0.05①②0.82±0.07①②③87.58＜0.001 cleaved-caspase-3 0.12±0.02 0.44±0.05①0.79±0.08*&1.20±0.11①②③123.41＜0.001

2.5 復(fù)方苦參注射液對培養(yǎng)上清液中TGF-β1、TNF-α和IL-4含量的影響與0 mL/L 比，復(fù)方苦參注射液處理的海拉細(xì)胞上清液中TGF-β1 和IL-4 含量明顯降低（P＜0.05），TNF-α 含量明顯升高（P＜0.05）。提示復(fù)方苦參注射液可抑制細(xì)胞分泌TGFβ1和IL-4，促進(jìn)TNF-α的分泌。見表4。

表4 不同濃度復(fù)方苦參注射液干預(yù)組海拉細(xì)胞培養(yǎng)上清液中TGF-β1、TNF-α和IL-4含量比較/± s

表4 不同濃度復(fù)方苦參注射液干預(yù)組海拉細(xì)胞培養(yǎng)上清液中TGF-β1、TNF-α和IL-4含量比較/± s

注：TGF-β1為轉(zhuǎn)化生長因子β1，TNF-α 為腫瘤壞死因子-α，IL-4為白細(xì)胞介素-4。①與0 mL/L 比，P＜0.05。②與100 mL/L 比，P＜0.05。③與200 mL/L比，P＜0.05。

組別0 mL/L 100 mL/L 200 mL/L 500 mL/L F值P值重復(fù)次數(shù)3333 TGF-β1/（μg/L）56.24±4.88 31.16±2.62①19.51±1.76①②6.62±0.46①②③157.37＜0.001 TNF-α/（ng/L）1.21±0.11 1.92±0.21①3.21±0.34①②4.26±0.40①②③66.45＜0.001 IL-4/（ng/L）3.53±0.36 2.82±0.25①1.89±0.28①②1.26±0.19①②③40.04＜0.001

2.6 復(fù)方苦參注射液對海拉細(xì)胞中HLA-G 基因表達(dá)的影響與0 mL/L 比，復(fù)方苦參注射液處理的海拉細(xì)胞中HLA-G mRNA 和蛋白表達(dá)降低（P＜0.05），且具有劑量依賴關(guān)系。說明復(fù)方苦參注射液能夠抑制海拉細(xì)胞中HLA-G基因的表達(dá)。見圖3，表5。

3 討論

圖3 蛋白質(zhì)印跡法檢測不同濃度復(fù)方苦參注射液干預(yù)組海拉細(xì)胞中HLA-G蛋白水平

表5 不同濃度復(fù)方苦參注射液干預(yù)組海拉細(xì)胞中人白細(xì)胞抗原G（HLA-G）mRNA和蛋白表達(dá)水平比較/± s

表5 不同濃度復(fù)方苦參注射液干預(yù)組海拉細(xì)胞中人白細(xì)胞抗原G（HLA-G）mRNA和蛋白表達(dá)水平比較/± s

注：①與0 mL/L 比，P＜0.05。②與100 mL/L 比，P＜0.05。③與200 mL/L比，P＜0.05。

組別0 mL/L 100 mL/L 200 mL/L 500 mL/L F值P值重復(fù)次數(shù)3333 HLA-G mRNA 1.00±0.10 0.46±0.04①0.31±0.03①②0.20±0.02①②③503.30＜0.001 HLA-G蛋白0.23±0.02 0.17±0.02①0.11±0.01①②0.04±0.01①②③79.50＜0.001

復(fù)方苦參注射液具有多種抗癌活性成分，如苦參堿、脫氧苦參堿、氧化苦參堿及土茯苓等多種天然物質(zhì)，具有抗癌、抗炎、清熱利濕等多種藥理學(xué)作用。近年來，復(fù)方苦參注射液誘導(dǎo)膀胱癌細(xì)胞、非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞、肝癌等細(xì)胞凋亡的文獻(xiàn)較多［11-13］。因此，復(fù)方苦參注射液已成為抗腫瘤藥物的研究方向之一。本實(shí)驗(yàn)證實(shí)，復(fù)方苦參注射液能夠抑制人宮頸癌海拉細(xì)胞的增殖，且呈劑量依賴性，阻滯細(xì)胞周期，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。說明復(fù)方苦參注射液能夠抑制海拉細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，具有較好的抗宮頸癌的作用。細(xì)胞凋亡蛋白caspase-3 激活形式為cleaved-caspase-3，激活后執(zhí)行凋亡功能，誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生凋亡［14］。Bax 屬于Bcl-2 基因家族中促凋亡基因，Bax 基因過表達(dá)能夠拮抗Bcl-2 的表達(dá)，導(dǎo)致細(xì)胞趨于死亡［15］。本實(shí)驗(yàn)中復(fù)方苦參注射液干預(yù)的海拉細(xì)胞中caspase-3 激活增多，Bax 表達(dá)水平升高，Bcl-2 的表達(dá)水平下降，提示復(fù)方苦參注射液通過調(diào)控凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)誘導(dǎo)海拉細(xì)胞發(fā)生凋亡。

多項(xiàng)研究證實(shí)，復(fù)方苦參注射液能夠調(diào)節(jié)免疫細(xì)胞的表達(dá)，增強(qiáng)機(jī)體免疫功能，改善腫瘤微環(huán)境，間接抑制腫瘤細(xì)胞增殖，殺傷腫瘤細(xì)胞［16-17］。復(fù)方苦參注射液能夠增強(qiáng)結(jié)腸癌、乳腺癌、宮頸癌等病人的免疫功能，延長病人生存時(shí)間［18-20］。報(bào)道指出，HLA-G 在腫瘤組織中呈高表達(dá)，且在相鄰的正常組織中很少發(fā)現(xiàn)，這表明HLA-G 與腫瘤生長和進(jìn)展關(guān)系密切［21-22］。多項(xiàng)證據(jù)表明腫瘤細(xì)胞中HLA-G的上調(diào)參與癌癥免疫編輯的每個(gè)階段，包括清除、平衡和逃避［23-24］。數(shù)據(jù)顯示，HLA-G 在宮頸癌組織和細(xì)胞中呈高表達(dá)，發(fā)揮免疫耐受的作用［25］。本研究發(fā)現(xiàn)復(fù)方苦參注射液干預(yù)的宮頸癌海拉細(xì)胞中HLAG 表達(dá)水平下調(diào)，提示復(fù)方苦參注射液增強(qiáng)細(xì)胞免疫功能與抑制HLA-G基因的表達(dá)相關(guān)。

在腫瘤免疫中，復(fù)方苦參注射液可改善T 淋巴細(xì)胞亞群和自然殺傷細(xì)胞，在平衡Th1/Th2 細(xì)胞因子中發(fā)揮重要作用［26］。Th1 細(xì)胞主導(dǎo)機(jī)體免疫功能，TNF-α 主要由Th1 類細(xì)胞分泌，IL-4 主要由Th2類細(xì)胞分泌。有研究顯示，HLA-G 與TNF-α、IL-4和IL-10 共同參與先兆子癇中存在的Th1/Th2 細(xì)胞因子失衡與缺乏免疫調(diào)節(jié)特征相關(guān)，導(dǎo)致母親和胎兒之間的免疫耐受受損［27］。研究指出，阻斷HLA-G 導(dǎo)致結(jié)核性胸腔積液中T細(xì)胞分泌的γ干擾素和TNFα 含量增加［28］。本實(shí)驗(yàn)檢測結(jié)果顯示，IL-4 含量明顯降低，TNF-α 含量明顯升高，提示淋巴細(xì)胞向Th1移動(dòng)，說明復(fù)方苦參注射液通過抑制HLA-G 的表達(dá)逆轉(zhuǎn)Th1/Th2 失衡增強(qiáng)細(xì)胞免疫功能，與上述研究相符。TGF-β1 是一種由活化的T 淋巴細(xì)胞或B 淋巴細(xì)胞產(chǎn)生的細(xì)胞生長轉(zhuǎn)化調(diào)節(jié)因子，在腫瘤細(xì)胞中大量表達(dá)。目前報(bào)道顯示，復(fù)方苦參注射液通過抑制TGF-β1 的表達(dá)抑制腫瘤細(xì)胞的增殖［29］。本實(shí)驗(yàn)中復(fù)方苦參注射液處理后，TGF-β1 含量降低，提示復(fù)方苦參注射液可能通過調(diào)控TGF-β1 的表達(dá)進(jìn)而負(fù)調(diào)控HLA-G參與細(xì)胞免疫調(diào)節(jié)。

綜上，復(fù)方苦參注射液能夠有效誘導(dǎo)宮頸癌海拉細(xì)胞凋亡，其作用機(jī)制可能與抑制HLA-G 基因表達(dá)進(jìn)而增強(qiáng)免疫細(xì)胞對腫瘤細(xì)胞的殺傷作用有關(guān)。復(fù)方苦參注射液成分復(fù)雜，究竟何種成分發(fā)揮主導(dǎo)作用需進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)進(jìn)行論證，且目前只在單一細(xì)胞株中進(jìn)行探究尚顯不足，后續(xù)實(shí)驗(yàn)將在多個(gè)細(xì)胞株及動(dòng)物模型中進(jìn)一步驗(yàn)證。

（本文圖1見插圖9-2）