張永濤，王鵬飛，李德嫻，鄒家浩，王廣，袁宇欣，余夢琦，陳璐，李廣

（1.西北農(nóng)林科技大學(xué)動物科技學(xué)院，楊凌 712100；2.涇陽縣動物衛(wèi)生監(jiān)督所，涇陽 713799）

FSH（促卵泡激素）是垂體前葉嗜堿性細(xì)胞分泌的一種激素，成分為糖蛋白，在動物體內(nèi)呈脈沖式分泌，主要作用為促進(jìn)卵泡顆粒層細(xì)胞增生分化和卵泡成熟。FSH在雄性動物中的主要作用是促進(jìn)曲細(xì)精管成熟，調(diào)節(jié)精子的生成[1,2]。二氫吡啶（Dilludine）是一種具有部分天然抗氧化劑作用的新型多功能添加劑，可抑制脂類化合物的過氧化過程，形成肝保護(hù)層；具有改變血清中的某些激素水平、促進(jìn)畜禽生長發(fā)育、提高繁殖性能、增強(qiáng)免疫功能的作用，而且其代謝完全、幾乎無殘留[3～5]。李克驢等人飼喂種公牛試驗結(jié)果表明，二氫吡啶可提高精子活力16.6%、頂體完整率18.7%、射精量12.9%，而精子畸形率下降37.20%[4]。陳菊芳等報道，在兔顆粒飼料中添加0.025%二氯吡啶能明顯提高公兔精液品質(zhì)和母兔的秋季受胎率[5]。關(guān)中奶山羊是目前世界上最為優(yōu)秀的奶山羊品種之一，具有體型結(jié)實勻稱、遺傳性能穩(wěn)定、產(chǎn)奶量高、奶質(zhì)優(yōu)良、適應(yīng)性強(qiáng)等特點。如何提高良種奶山羊精液品質(zhì)，提高優(yōu)良公畜的利用率并降低繁殖成本，對人工授精技術(shù)的推廣以及奶山羊良種化進(jìn)程有很大的推動作用。為此，本試驗采用FSH和二氫吡啶以及二者聯(lián)合使用，觀察其對關(guān)中奶山羊種公羊精液品質(zhì)、精子形態(tài)變化的影響。

1 材料與方法

1.1 試驗設(shè)計

在陜西省某奶山羊場選取年齡、膘情、體重相近的成年種公羊36只，隨機(jī)分為4組，每組3個重復(fù)，每個重復(fù)3只羊。對照組公羊飼喂基礎(chǔ)日糧，試驗1組在基礎(chǔ)日糧中添加二氫吡啶（劑量為每日每頭50mg，國產(chǎn)），試驗2組采用減量注射FSH（國產(chǎn)），第1天40U/只，第2天20U/只，第3天10U/只，試驗3組二氫吡啶和FSH同時使用，劑量與上兩組相同。試驗于2021年9月初進(jìn)行，到10月底結(jié)束，為期2個月，此時期為奶山羊最佳配種時間。

1.2 飼養(yǎng)管理

試驗動物入欄前使用聚維酮碘徹底消毒，試驗期間，奶山羊公羊每日飼喂3次（07:00、12:00以及17:00），自由采食飲水，飼養(yǎng)管理按照常規(guī)進(jìn)行?；A(chǔ)日糧參照“NY/T816-2004”配制，苜蓿干草50%、玉米30%、豆粕12.5%、麩皮5%、小蘇打0.5%、預(yù)混料2%；營養(yǎng)水平：粗蛋白質(zhì)12.64%，中性洗滌纖維25.13%，酸性洗滌纖維11.21%，粗灰分6.07%。預(yù)試期15d，正試期90d。

1.3 精液處理

將通過顯微鏡檢查合格的精液用2mmol/LGSH的稀釋劑等溫稀釋，放入4℃冰箱冷藏2h。第一次平衡完成后，在4℃操作臺內(nèi)進(jìn)行第二次等溫稀釋，然后繼續(xù)在4℃冰箱中平衡2h。平衡完成后，將精液裝入0.25mL的細(xì)管中，按照特定的冷凍程序?qū)囟葟?℃降到-140℃。然后將細(xì)管浸入-196℃的液氮中以完成冷凍過程；解凍時將樣品在38℃水浴中解凍35s，取樣進(jìn)行精子檢測。

1.4 測定指標(biāo)及方法

1.4.1 精液品質(zhì)：分別于試驗前1周、試驗后第1～8周，按照常規(guī)精液品質(zhì)評定方法對射精量、密度、精子活力進(jìn)行評定。

1.4.2 精子形態(tài)學(xué)觀察：于試驗后第8周，每組隨機(jī)選3只羊，每只羊平均涂片3張，分別對其原精和解凍精液經(jīng)姬姆薩染液染色后，置于1 600倍油鏡下，每片觀察300個精子，計算各種畸形比率。

1.5 數(shù)據(jù)處理

本次試驗數(shù)據(jù)采用Excel2010進(jìn)行分類統(tǒng)計，使用SPSS26.0軟件進(jìn)行方差分析，獨立樣本t檢驗比較組間差異顯著性。試驗結(jié)果以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 FSH、二氫吡啶對關(guān)中奶山羊射精量、密度、精子活力的影響

由表1及圖1～3可見，隨著試驗時間的延長，四個組的公羊射精量、密度及活力都有上升的趨勢（P＞0.05），試驗1組、試驗2組及試驗3組精子密度顯著高于對照組（P＜0.05），其射精量與精子活力極顯著高于對照組（P＜0.01），試驗2組與對照組間在第6周后精子活力差異不顯著（P＞0.05）。對試驗的指標(biāo)分析表明，試驗中使用FSH和二氫吡啶以及二者聯(lián)合使用，均能提高關(guān)中奶山羊的射精量、密度及活力，但是在日糧添加二氫吡啶以及二者聯(lián)合使用，對關(guān)中奶山羊的射精量、密度及活力提升效果更加明顯，其效果更好。

表1 FSH、二氫吡啶對關(guān)中奶山羊公羊射精量、密度、精子活力的影響

圖1 不同試驗期精子活力的變化趨勢

圖2 不同試驗期射精量的變化趨勢

圖3 不同試驗期精液密度的變化趨勢

2.2 FSH、二氫吡啶對關(guān)中奶山羊精子形態(tài)的影響

由表2可見，試驗1、2、3組原精中頭部畸形率、變形或缺損率、膨大率、屈折率、尾部膨大、曲折率、雙尾率顯著低于對照組（P＜0.05），其頭過大或過小率、頂體缺損率、斷頭率、斷尾率與對照組間差異不顯著（P＞0.05）；解凍精液與原精則表現(xiàn)為一致的變化規(guī)律（r=0.998）。對精子形態(tài)方面的試驗指標(biāo)分析表明，試驗中使用FSH和二氫吡啶以及二者聯(lián)合使用對降低原精的頭部畸形率、變形或缺損率、膨大率等形態(tài)指標(biāo)的影響效果明顯，但對原精的過大或過小率、頂體缺損率、斷頭率、斷尾率沒有明顯效果，而且解凍后的精液在形態(tài)方面的影響效果與原精的影響效果一致。

表2 FSH、二氫吡啶對關(guān)中奶山羊精子形態(tài)的影響 單位：%

3 討論與結(jié)論

二氫吡啶的化學(xué)全名為2，6-二甲基-3，5-二乙脂基-1，4-二氫吡啶，是一種抗氧化維生素穩(wěn)定劑及家畜促生長劑。其具有能抑制體內(nèi)生物膜的氧化，提高生物膜中6-磷酸葡萄糖酶的活性，穩(wěn)定組織細(xì)胞的作用[6～8]。有報道指出，二氫吡啶與NADPH有關(guān)的復(fù)合氧化酶系及微粒體酶有關(guān)。二氫吡啶進(jìn)入動物機(jī)體內(nèi)的抗氧化作用可能是通過隔斷微粒體電子輸送NADPH酶的活性抑制脂類化合物的過氧化過程，清除所形成的自由基[9,10]。鄒曉庭等[7]報道，二氫吡啶能顯著提高血清SOD活性，SOD是機(jī)體內(nèi)超氧自由基的主要清除劑，可抑制脂類化合物的過氧化過程。鄒曉庭等[7]、武現(xiàn)軍等[8]都證實二氫吡啶可顯著提高血清甲狀腺激素（T3）水平，T3對機(jī)體的正常生長發(fā)育以及維持正常生殖有重要的作用，可促進(jìn)器官、組織的分化，并對生長激素有“允許作用”。二氫吡啶還可提高下丘腦、腺垂體中cAMP的含量，促進(jìn)體內(nèi)多種蛋白質(zhì)的合成，從而促進(jìn)畜禽的生長發(fā)育[7,8]。李克驢飼喂種公牛試驗結(jié)果表明，二氫吡啶可提高精子活力16.6%、頂體完整率18.7%、射精量12.9%，而精子畸形率下降37.20%[4]。陳菊芳等報道，在兔顆粒飼料中添加0.025%二氫吡啶能明顯提高公兔精液品質(zhì)和母兔的秋季受胎率。在綿羊日糧中添加0.01%的二氫吡啶，公羊采精量提高13.75%、精子密度提高8.53%，精子總數(shù)提高39.6%[5]。

FSH是垂體前葉嗜堿性細(xì)胞分泌的一種激素，成分為糖蛋白，主要作用為促進(jìn)卵泡成熟。促卵泡激素可促進(jìn)卵泡顆粒層細(xì)胞增生分化，并促進(jìn)整個卵巢長大[9]。而其作用于睪丸曲細(xì)精管則可促進(jìn)精子形成。在本試驗中關(guān)中奶山羊公羊使用FSH與二氫吡啶對提高原精精子活力和射精量效果極顯著（P＜0.01），試驗1組、試驗2組及試驗3組精子密度顯著高于對照組（P＜0.05），這與李克驢等、陳菊芳等用二氫吡啶飼喂公畜的試驗結(jié)果相一致。單純使用FSH對關(guān)中奶山羊公羊精液品質(zhì)與對照組間在第6周后精子活力差異不顯著（P＞0.05）。使用FSH、二氫吡啶或二者聯(lián)合使用均可顯著提高關(guān)中奶山羊精液品質(zhì)，極顯著提高鮮精與凍精活力，降低精子畸形率。