孟偉偉，盧小娟，廖水新

（深圳市寶安區(qū)石巖人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣東深圳 518108）

甲狀腺激素是調(diào)節(jié)人體代謝功能的一種內(nèi)分泌激素，能夠直接參與機(jī)體代謝和相關(guān)生理活動，還可促進(jìn)胎兒發(fā)育[1]。然而，妊娠早期孕婦因受體內(nèi)性激素波動及自身免疫相關(guān)影響，體內(nèi)甲狀腺功能有可能出現(xiàn)紊亂，嚴(yán)重時可導(dǎo)致高血壓、糖尿病、流產(chǎn)等[2]。葉酸也是妊娠期孕婦所需的重要營養(yǎng)素，孕婦葉酸攝入不足會導(dǎo)致胎兒出現(xiàn)先天性心臟病、唇腭裂等缺陷，及先兆流產(chǎn)、早產(chǎn)等不良妊娠結(jié)局[3]。亞甲基四氫葉酸還原酶（MTHFR）是葉酸代謝的關(guān)鍵酶，而MTHFR基因第677位點(diǎn) C-T的突變可以降低 MTHFR 活性，導(dǎo)致葉酸代謝障礙。且有研究證實(shí)MTHFR基因多態(tài)性可影響妊娠期孕婦體內(nèi)糖代謝，增加妊娠期糖尿病的風(fēng)險(xiǎn)[4]，而臨床有關(guān)MTHFR基因多態(tài)性與妊娠女性早期甲狀腺功能紊亂的發(fā)生報(bào)道較少?；诖耍狙芯刻接憣毎驳貐^(qū)妊娠早期甲狀腺功能紊亂與MTHFR基因多態(tài)性的相關(guān)性，旨在為進(jìn)一步探討女性妊娠早期甲狀腺功能紊亂危險(xiǎn)因素提供依據(jù)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料選取2021年1月至2022年1月深圳市寶安區(qū)石巖人民醫(yī)院收治的妊娠早期甲狀腺功能紊亂的80 例孕婦為紊亂組，另選取同期院內(nèi)檢查甲狀腺功能正常的60例孕婦為正常組作為研究對象進(jìn)行回顧性分析。紊亂組孕婦年齡22～35歲，平均年齡（27.39±2.59）歲；孕周3～11周，平均孕周（7.59±1.96）周；初產(chǎn)婦50例，經(jīng)產(chǎn)婦30例。正常組孕婦年齡23～35歲，平均年齡（27.59±2.24）歲；孕周3～11周，平均孕周（7.39±1.87）周；初產(chǎn)婦28例，經(jīng)產(chǎn)婦32例。兩組孕婦的一般資料比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），組間具有可比性。本研究經(jīng)深圳市寶安區(qū)石巖人民醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)。診斷標(biāo)準(zhǔn)：紊亂組孕婦參照《妊娠和產(chǎn)后甲狀腺疾病診治指南（第2版）》[5]中妊娠早期甲狀腺功能紊亂的診斷標(biāo)準(zhǔn)。納入標(biāo)準(zhǔn)：①年齡22～35周歲，孕周＜12周；②均為單胎妊娠。排除標(biāo)準(zhǔn)：①妊娠前確診為甲狀腺功能紊亂者；②合并嚴(yán)重肝、腎、肺等疾病者；③合并妊娠期糖尿病者；④有不良孕產(chǎn)史者。

1.2 檢測方法①檢測孕婦甲狀腺功能指標(biāo)。抽取孕婦空腹靜脈血5 mL，采用化學(xué)發(fā)光法檢測血清游離三碘甲腺原氨酸（FT3）、游離甲狀腺素（FT4）和促甲狀腺激素（TSH）水平，試劑由羅氏集團(tuán)提供。②MTHFR基因多態(tài)性檢測[6]：對MTHFR基因多態(tài)性的 C677T位點(diǎn)進(jìn)行檢測。收集孕婦空腹靜脈血2 mL，EDTA 抗凝，保存7 d內(nèi)提取DNA。DNA濃度經(jīng)測定在5～50 ng/μL為宜。PCR擴(kuò)增：取50 μL DNA提取液置于1.5 mL離心管中，加入50 μL 外周血，吹打混勻后95 ℃加熱5 min。加入200 μL無水乙醇，振蕩至出現(xiàn)絮狀的沉淀物后倒入吸附柱 CB3（奧地利格雷那公司）中，以 12000 r/min 離心30 s，吸附柱 CB3 再次放回原來的收集管中，以 12000 r/min 離心 2 min后，放置約 3 min，使吸附材料中的漂洗液得到徹底晾干。將吸附柱 CB3 放入 1.5 mL 離心管中，室溫下放置 5 min，然后以12000 r/min 離心 2 min，將溶液全部收集到離心管中，留取上清液備用。每個反應(yīng)體系總體積25 μL，包含濃度為10～100 ng/μL 的DNA模板2 μL，PCR反應(yīng)液22 μL，反應(yīng)酶1 μL。反應(yīng)條件為50 ℃ 2 min，95 ℃3 min，隨后進(jìn)行10個循環(huán)的擴(kuò)增（95 ℃ 10 s，56 ℃ 30 s，60 ℃ 30 s），再進(jìn)行35個循環(huán)的擴(kuò)增（95 ℃ 10 s，56 ℃ 30 s，60 ℃ 30 s）。反應(yīng)結(jié)束后在熒光定量PCR儀（上海博奧派克生物科技有限公司，型號：ABI7500型）上讀取樣品孔中的終點(diǎn)熒光，利用分析軟件確定各個樣本的基因分型結(jié)果。基因頻率= 基因型數(shù)/ 檢測總數(shù)×100%；基因型突變率=突變基因型人數(shù)/ 檢測總數(shù)檢測×100%。

1.3 觀察指標(biāo)①比較兩組患者基本指標(biāo)。包括妊娠史、妊娠前體質(zhì)量指數(shù)（BMI）、貧血史。②比較兩組孕婦MTHFR C677T基因型分布和等位基因頻率。③比較兩組孕婦甲狀腺功能指標(biāo)。包括FT3、FT4、TSH。④比較紊亂組不同基因型孕婦的甲狀腺功能指標(biāo)。⑤分析妊娠早期甲狀腺功能紊亂發(fā)生的相關(guān)因素。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，計(jì)量資料以（±s）表示，組間比較行獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，多組間比較采用方差分析，兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以[例(%)]表示，組間比較行χ2檢驗(yàn)；多因素分析采用非條件Logistic逐步回歸分析。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組孕婦基本指標(biāo)比較兩組孕婦妊娠史比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），紊亂組孕婦有貧血史、妊娠前BMI＜18.5 kg/m2或＞24.0 kg/m2患者占比明顯高于正常組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表1。

表1 兩組孕婦基本指標(biāo)比較 [例(%)]

2.2 兩組孕婦MTHFR C677T基因型分布和等位基因頻率比較紊亂組孕婦MTHFR基因C677T位點(diǎn)C等位基因頻率占比明顯低于正常組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；紊亂組孕婦MTHFR基因C677T位點(diǎn)TT、TC基因型頻率占比明顯高于正常組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表2。

表2 兩組孕婦MTHFR C677T基因型分布和等位基因頻率比較 [例(%)]

2.3 兩組孕婦甲狀腺功能指標(biāo)比較紊亂組孕婦TSH水平明顯高于正常組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；兩組孕婦FT3、FT4水平比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見表3。

表3 兩組孕婦甲狀腺功能指標(biāo)比較（±s）

表3 兩組孕婦甲狀腺功能指標(biāo)比較（±s）

注：FT3：游離三碘甲腺原氨酸；FT4：游離甲狀腺素；TSH：促甲狀腺激素。

組別 例數(shù) FT3(pmol/L) FT4(pmol/L) TSH(mIU/L)紊亂組 80 13.21±2.34 8.49±2.46 3.05±1.22正常組 60 12.62±2.39 8.56±2.12 1.77±0.52 t值 1.463 1.463 7.619 P值 ＞0.05 ＞0.05 ＜0.05

2.4 紊亂組不同基因型孕婦的甲狀腺功能指標(biāo)比較紊亂組TT基因型、CT基因型孕婦TSH水平高于CC基因型孕婦，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；不同基因型孕婦FT3、FT4水平比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見表4。

表4 紊亂組不同基因型孕婦的甲狀腺指標(biāo)比較（±s）

表4 紊亂組不同基因型孕婦的甲狀腺指標(biāo)比較（±s）

注：FT3：游離三碘甲腺原氨酸；FT4：游離甲狀腺素；TSH：促甲狀腺激素。

基因型 例數(shù) FT3(pmol/L) FT4(pmol/L) TSH(mIU/L)TT 29 4.62±0.78 8.36±1.23 3.67±0.42 CT 34 4.87±0.63 7.76±1.35 3.21±0.40 CC 17 5.02±0.81 8.46±1.43 2.37±0.45 F值 1.818 2.289 51.834 P值 ＞0.05 ＞0.05 ＜0.05

2.5 妊娠早期甲狀腺功能紊亂發(fā)生的多因素Logistic分析以妊娠早期甲狀腺功能紊亂發(fā)生作為因變量，將以上差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（孕前BMI、貧血史、MTHFR基因C677T位點(diǎn)基因型）作為自變量，并對其進(jìn)行賦值，妊娠前BMI（18.5～24.0 kg/m2＝0，＜18.5 kg/m2或＞24.0 kg/m2＝1）、貧血史（無＝0，有＝1）、MTHFR基因C677T位點(diǎn)基因型（CC＝0，TT、TC＝1）。經(jīng)多因素Logistic回歸分析證實(shí)，妊娠前BMI＜18.5 kg/m2或＞24.0 kg/m2、有貧血史、MTHFR基因C677T位點(diǎn)是影響妊娠早期甲狀腺功能紊亂發(fā)生的危險(xiǎn)因素（P＜0.05），見表5。

表5 妊娠早期甲狀腺功能紊亂發(fā)生的多因素Logistic分析

3 討論

甲狀腺功能紊亂為妊娠早期常見的并發(fā)癥，可增加流產(chǎn)、早產(chǎn)、先兆子癇和甲狀腺功能亢進(jìn)危象的發(fā)生率，同時也會增加胎兒甲狀腺功能減退、智力低下的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)。對妊娠早期甲狀腺功能紊亂進(jìn)行早期預(yù)測和干預(yù)，可能會降低其發(fā)生率[7]。路娜等[8]研究顯示，MTHFR基因多態(tài)性與甲狀腺疾病形成有關(guān)。而MTHFR是葉酸代謝的主要酶類，當(dāng)其基因發(fā)生突變，會直接影響葉酸代謝過程中甲硫氨酸循環(huán)的過程。張菘等[9]研究發(fā)現(xiàn)，MTHFR基因677處C-T的突變是導(dǎo)致MTHFR的酶活性下降的主要原因。

本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，紊亂組孕婦MTHFR基因C677T位點(diǎn)C等位基因頻率占比及TT、TC基因型頻率占比明顯高于正常組；同時，本研究發(fā)現(xiàn)，紊亂組孕婦TSH水平明顯高于正常組，CT及TT基因型孕婦TSH水平較CC基因型孕婦更高，而不同基因型孕婦FT3、FT4水平比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。這提示妊娠早期甲狀腺功能紊亂的孕婦MTHFR基因多態(tài)性分布與正常孕婦相比存在一定差異，TT基因型孕婦TSH水平整體偏高。此項(xiàng)結(jié)果雖然與過往研究存在一定差異，但也在一定程度上說明證實(shí)了該基因突變可能與導(dǎo)致甲狀腺激素的異常存在一定關(guān)系。雖然過往有關(guān)研究中無專項(xiàng)針對MTHFR基因與甲狀腺功能紊亂發(fā)病的研究，但結(jié)合吳云等[10]研究結(jié)果來看，葉酸、半胱氨酸異常都能造成甲狀腺代謝異常，而MTHFR是葉酸代謝的主要酶類，因此，MTHFR基因突變造成的葉酸活性變化也可影響甲狀腺功能[11]。

本研究證實(shí)，妊娠前BMI＜18.5 kg/m2或＞24.0 kg/m2、有貧血史、MTHFR基因C677T位點(diǎn)突變是影響妊娠早期甲狀腺功能紊亂發(fā)生的危險(xiǎn)因素。孕期相關(guān)激素分泌水平的變化及孕期對甲狀腺激素需求增加等均是導(dǎo)致母體內(nèi)分泌功能紊亂的主要因素，而母體BMI指標(biāo)異常與有貧血史會直對自身激素分泌造成影響。但MTHFR基因突變直接對母體葉酸代謝活性產(chǎn)生影響，葉酸代謝與同型半胱氨酸代謝密切相關(guān)，葉酸代謝異常能引起同高半胱氨酸血癥，而機(jī)體內(nèi)長期處在高半胱氨酸水平，會使機(jī)體產(chǎn)生氧自由基、炎癥因子，從而損傷孕婦免疫功能；而妊娠早期甲狀腺功能紊亂的發(fā)病機(jī)制之一是自身免疫損傷，因此MTHFR基因突變在引起半胱氨酸血癥的同時也可能引發(fā)甲狀腺功能紊亂。

綜上所述，MTHFR基因C677T位點(diǎn)多態(tài)性與妊娠早期甲狀腺功能紊亂發(fā)生相關(guān)。因此，女性在備妊娠前可進(jìn)行MTHFR基因C677T多態(tài)性檢測以對妊娠早期甲狀腺功能進(jìn)行初步判斷，妊娠后加強(qiáng)甲狀腺功能監(jiān)測并作對應(yīng)處理。