宋瑩瑩，白 鈺，徐清華，王國明，郭暢冰，謝麗娟，徐芳菲*

（吉林人參研究院·吉林長春·130033）

二硫代氨基甲酸酯類農(nóng)藥(DTCs)主要包括代森類、福美類、丙森類[1-2]三類。該類藥劑在中藥材生產(chǎn)中被廣泛應(yīng)用，其具有高效、低毒的特點，對人、畜、植物安全，對疫病、霜霉病、炭疽病、葉斑病等有很好的防治效果。常用的DTCs類殺菌劑主要包括代森鋅、代森鈉、福美雙、福美鋅、福美鐵等[3-5]。

人參（Panax ginseng C.A.Mey.），五加科人參屬多年生草本植物，在我國被譽為“百草之王”，已有數(shù)千年的藥用和保健歷史，也是我國主要出口藥材[6]，其安全問題也逐漸引起重視。人參因其生長周期長，易受病害的侵襲，DTCs類農(nóng)藥被應(yīng)用人參病害防治方面，結(jié)果使人參中其殘留量增高。2017年世界衛(wèi)生組織國際癌癥研究機構(gòu)公布：DTCs類農(nóng)藥代謝產(chǎn)物亞乙基硫脲（ETU）有3類致癌物，對整個大氣環(huán)境和人的身體健康均有潛在的威脅[7-10]。因此，我們有必要確定一種方法對其殘留量進(jìn)行監(jiān)測。

通過查找文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)，目前，針對檢測DTCs類農(nóng)藥殘留的方法已經(jīng)建立了很多種[11]，但這些方法多是針對水果、蔬菜、糧食、茶葉等作物，對人參中DTCs類殘留測定的文獻(xiàn)報道很少，也沒有適用于其檢測的標(biāo)準(zhǔn)。故本文針對在高溫、強酸、密閉條件下，DTCs類農(nóng)殘能被分解生成二硫化碳的特點[12-13]，對人參中DTCs類殘留量的測定進(jìn)行了研究，分析其測定過程中的影響因素，建立了一個合理、可靠的檢測方法。該方法不僅在人參實際檢測中有良好的應(yīng)用，對我國整個人參產(chǎn)業(yè)的監(jiān)管也起到了重要的意義[14]。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

氣相色譜儀（Agilent 8890，美國）：配ECD檢測器；頂空自動進(jìn)樣器（Agilent 7697A，美國）；DE-100g型中藥粉碎機（浙江紅景天）；SQP型電子天平（賽多利斯）；頂空樣品瓶（20mL）。

二水合氯化亞錫（AR，國藥集團(tuán)）；濃硫酸（GR，國藥集團(tuán)）、濃鹽酸（GR，廣州化學(xué)試劑廠）；抗壞血酸（AR，天泰精細(xì)化學(xué)品有限公司）；水為超純水；正己烷（HPLC，F(xiàn)isher）；丙酮（AR，科密歐）；丙酮（HPLC，禹王）。

二硫化碳標(biāo)準(zhǔn)溶液（北京壇墨質(zhì)檢科技有限公司，濃度5000μg/mL，批號A1912354）。

1.2 溶液的配置

1.2.1 氯化亞錫-硫酸溶液

稱取二水合氯化亞錫15 g，用硫酸溶液（1+4）溶解，置于1 L容量瓶中，并定容至刻度。

1.2.2 二硫化碳標(biāo)準(zhǔn)溶液

準(zhǔn)確吸取二硫化碳標(biāo)準(zhǔn)溶液（濃度5000μg/mL）2.00 mL于10mL容量瓶中，用正己烷定容至刻度，得1000μg/mL二硫化碳儲備液。

吸取二硫化碳儲備液1mL于10mL容量瓶中，并用正己烷稀釋至刻度，即得濃度為100μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液。分別取100μg/mL濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液0.005、0.01、0.02、0.05、0.1、0.2mI于各10mL的容量瓶中，分別得到濃度為0.05、0.1、0.2、0.5、1.0、2.0μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液。

1.3 色譜條件

1.3.1 氣相色譜條件

HP-50+色譜柱（30m×0.53mm×1.0μm）（美國Agi-Lent）；載氣：氮氣，純度大于99.995%；進(jìn)樣口溫度：200℃，分流進(jìn)樣，分流比：5∶1；檢測器溫度：300℃，尾吹流量（N2）：30 mL/min；升溫程序：初始柱溫為50℃，保持2 min，以2℃/min的速率升溫至60℃，保持3min，以10℃/min的速率升溫至120℃，保持3min；載氣（N2）流速2.0mL/min；進(jìn)樣量：1mL。

1.3.2 自動-頂空進(jìn)樣器條件

加熱箱溫度：80℃；定量環(huán)溫度：90℃；傳輸線溫度：100℃；GC循環(huán)時間：28 min，樣品瓶平衡時間：30min，進(jìn)樣時間：0.5 min；樣品瓶體積：20 mL。

1.4 樣品前處理及測定法

在高溫、強酸、密閉條件下，DTCs類農(nóng)殘被分解，定量釋放出二硫化碳，用氣相色譜測定二硫化碳含量，計算出樣品中二硫代氨基甲酸酯的含量[15]。

稱取已粉碎的人參樣品（過三號篩），約1g，精密稱定，置20 mL頂空樣品瓶中，加入蒸餾水1mL，加入抗壞血酸0.03 g，然后加氯化亞錫-硫酸溶液4.0 mL，立即將密封鋁蓋用壓蓋器封口。手動振搖，然后將其置于頂空樣品盤上進(jìn)行測定，用保留時間進(jìn)行定性，峰面積外標(biāo)法定量。

1.5 方法學(xué)考察

1.5.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作

分別吸取標(biāo)準(zhǔn)工作液0.05、0.1、0.2、0.5、1.0、2.0 μg/mL各1.0 mL于頂空樣品瓶中，加蒸餾水1mL，加入抗壞血酸0.03 g，再加入氯化亞錫-硫酸溶液4.0 mL，立即將密封鋁蓋用壓蓋器封口。手動振搖后，將其置于頂空樣品盤上進(jìn)行測定。氣體進(jìn)樣1.0mL于GC-ECD中分析，以二硫化碳的濃度為橫坐標(biāo)(X)，相對應(yīng)的峰面積為縱坐標(biāo)(Y)，繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。

1.5.2 精密度試驗

取標(biāo)準(zhǔn)溶液（0.10μg/mL）6份，每份1mL，分別放在頂空瓶中，連續(xù)進(jìn)樣6針，記錄各譜圖中的峰面積。

1.5.3 準(zhǔn)確度試驗

精密稱取人參樣品平行6份，每份1g（精密稱定），分別加入二硫化碳標(biāo)準(zhǔn)溶液0.10μg/mL各1mL，按1.4方法處理后，在1.3儀器條件下測定，記錄各譜圖中的峰面積，計算各試樣的含量。

2 結(jié)果與討論

2.1 樣品前處理條件的選擇與優(yōu)化

2.1.1 酸化介質(zhì)的選擇

在樣品的反應(yīng)過程中，鹽酸被大多文獻(xiàn)和標(biāo)準(zhǔn)方法中用作酸化介質(zhì)，但經(jīng)試驗發(fā)現(xiàn)，由于濃鹽酸在常溫下就易揮發(fā)，在高溫條件下，更易于揮發(fā)，且揮發(fā)的酸蒸氣易腐蝕頂空進(jìn)樣針，會損壞色譜柱的固定相，使其柱效降低，檢測器的靈敏度降低等。因此選用的酸高溫既不易揮發(fā)或發(fā)生分解，又要是強酸，且便于推廣，故選用硫酸作為酸化介質(zhì)來促使反應(yīng)穩(wěn)定的進(jìn)行。

2.1.2 溶劑的選擇

丙酮：色譜純和分析純，在測試條件下均含與二硫化碳的色譜峰干擾的物質(zhì)；正己烷：色譜純，在測試條件下不含與二硫化碳的色譜峰干擾的物質(zhì)。故選擇正己烷為配制標(biāo)準(zhǔn)溶液的試劑。

2.1.3 加熱箱（平衡）時間的選擇

實驗發(fā)現(xiàn)，隨著加熱箱平衡時間增長，目標(biāo)峰的峰面積逐漸增大，且靈敏度也有所升高。故本實驗選用加熱時間為15、20、30、40、50min進(jìn)行分析，結(jié)果表明，隨著加熱時間變長，目標(biāo)峰的峰面積逐漸變大，但當(dāng)加熱時間大于30min時，目標(biāo)峰的峰面積變化不明顯，且峰形變差。因此，在滿足靈敏度、精密度、氣密性等要求下，為了提高整個試驗的效率，故優(yōu)化選擇加熱箱平衡時間為30min。

2.2 線性范圍及檢出限

在上述實驗條件下，按照1.2.2配制一系列二硫化碳標(biāo)準(zhǔn)溶液，得出在0.05～2.0μg/mL濃度范圍內(nèi)，呈良好的線性關(guān)系，檢出限采用信噪比法，以信噪比為3∶1時對應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度作為檢出限?；貧w方程、相關(guān)系數(shù)r及檢出限詳見表1。

表1 二硫化碳回歸方程、相關(guān)系數(shù)和檢出限

2.3 精密度試驗

依據(jù)連續(xù)6針的峰面積計算相對標(biāo)準(zhǔn)偏差，RSD為2.44%，結(jié)果表明，該方法精密度良好，測定結(jié)果詳見表2。

表2 精密度測定數(shù)據(jù)

2.4 方法的準(zhǔn)確度試驗

2.4.1 標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖

在上述色譜條件下，用自動-頂空氣相色譜對一定已知濃度的二硫化碳標(biāo)準(zhǔn)溶液的進(jìn)行測定分析，得出二硫化碳的保留時間為6.860min(如圖1)。

圖1 CS2頂空進(jìn)樣色譜圖

2.4.2 方法的加標(biāo)回收率

依據(jù)測定結(jié)果計算二硫化碳的平均回收率為94.05%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為4.04%，詳見表3。結(jié)果表明，該方法具有良好的回收率。

表3 方法回收率數(shù)據(jù)

2.5 實際樣品測定

精密稱取從市場采集的6份人參樣品，按1.4方法步驟處理后，在1.3儀器條件下測定，經(jīng)測得的數(shù)據(jù)分析與計算得出，人參中有二硫代氨基甲酸酯類農(nóng)藥的檢出，但其使用量未超標(biāo)準(zhǔn)限值。

3 結(jié)論

本文通過對實驗及色譜條件的優(yōu)化，建立了一個更適用、更科學(xué)的頂空GC-ECD檢測方法來檢測人參中的二硫代氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留量。該方法不僅具有簡便、高效、靈敏、準(zhǔn)確及成本低的優(yōu)點，且精密度、回收率均能滿足農(nóng)藥殘留分析要求，適合大批量人參中二硫代氨基甲酸酯殘留量的快速檢測。