曾禹?？?，白羽嘉*，王乾乾，迪娜拉·海拉提，蔣莉瑩，劉陽(yáng)，馮作山*

（1.新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與藥學(xué)學(xué)院，新疆 烏魯木齊 830052；2.新疆果品采后科學(xué)與技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，新疆 烏魯木齊 830052）

伽師瓜是新疆特有的一種成熟期較晚的厚皮甜瓜品種，是西北地區(qū)經(jīng)濟(jì)效益較好的一種農(nóng)作物[1]。伽師瓜果皮呈現(xiàn)深綠色并覆蓋有大網(wǎng)紋及小網(wǎng)紋，部分無(wú)網(wǎng)紋，果肉呈現(xiàn)橘紅色且肉質(zhì)松脆，口味清甜。伽師瓜的主要病害是由鏈格孢菌侵染采后伽師瓜所引起的黑斑病[2-3]。鏈格孢菌侵染伽師瓜果實(shí)后，侵染初期果實(shí)呈現(xiàn)水漬狀濕腐，伽師瓜表面果皮變軟并開(kāi)始腐爛，后因鏈格孢菌開(kāi)始產(chǎn)生分生孢子梗以及大量孢子，故而果實(shí)表面會(huì)形成黑色霉斑[4-7]。在病原菌開(kāi)始侵染果實(shí)時(shí)，植物細(xì)胞會(huì)刺激產(chǎn)生幾丁質(zhì)酶（chitinase，CHT）及 β-1，3 葡聚糖酶（β-1，3-glucanase，GLU）以降解構(gòu)成真菌細(xì)胞壁骨架的幾丁質(zhì)與纖維素，從而影響真菌微生物的形態(tài)形成、生理活性和生長(zhǎng)發(fā)育等，達(dá)到抵抗病原微生物入侵的目的[8-11]。病原微生物侵染同樣會(huì)激活植物體內(nèi)的苯丙烷代謝過(guò)程，苯丙烷代謝是植物抵抗病原菌侵染的另一途徑，通過(guò)此途徑可產(chǎn)生一類(lèi)抗病原物的化合物即類(lèi)黃酮植保素及酚類(lèi)物質(zhì)，后者進(jìn)一步氧化生成對(duì)病原菌有毒害作用的醌類(lèi)物質(zhì)，從而達(dá)到抗病作用[12-13]。

目前，關(guān)于鏈格孢菌侵染采后甜瓜的研究，多采用損傷接種的方法，此方法使得病原菌更容易侵染到果實(shí)內(nèi)部，損傷接種的方法不但破壞了甜瓜果實(shí)的完整性，同時(shí)也破壞了果實(shí)抗病的第一道防線(xiàn)——外果皮，外果皮是果實(shí)重要的物理抗病性結(jié)構(gòu)[14]。本試驗(yàn)采用無(wú)損接菌的方法，模擬自然環(huán)境下甜瓜果實(shí)被侵染的情況，將鏈格孢菌孢子懸浮液吸附在伽師瓜外果皮自然產(chǎn)生的大、小、無(wú)網(wǎng)紋處，計(jì)算病害發(fā)生率，分析苯丙烷代謝相關(guān)酶活性的變化規(guī)律以及β-1，3葡聚糖酶、幾丁質(zhì)酶活性的變化規(guī)律，研究不同網(wǎng)紋組織、不同果實(shí)組織抗病能力的差異。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

伽師瓜：采摘于新疆喀什地區(qū)伽師縣，果實(shí)質(zhì)量（4.0±0.5）kg、可溶性固形物含量（12.5±0.5）°Brix。

鏈格孢菌（Alternaria alternata）：對(duì)已自然發(fā)病的伽師瓜果實(shí)進(jìn)行鏈格孢菌的分離純化并使用馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基保存。

1.2 試劑

30% H2O2、3，5-二硝基水楊酸、丙酮、冰乙酸、結(jié)晶酚、酒石酸鉀鈉、L-抗壞血酸、濃鹽酸、氫氧化鈉、無(wú)水乙醇、無(wú)水乙酸鈉、五水合四硼酸鉀、亞硫酸鈉（均為分析純）：天津市致遠(yuǎn)化學(xué)試劑有限公司；二甲苯、中性樹(shù)膠（均為分析純）：國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；幾丁質(zhì)、昆布多糖（均為分析純）：美國(guó)西格瑪奧德里奇公司；焦碳酸二乙酯（diethypyrocarbonate，DEPC）、乙二胺四乙酸（ethylenediaminetetraacetic acid，EDTA）、脫鹽蝸牛酶、β-巰基乙醇、瓊脂糖：生工生物工程（上海）股份有限公司；馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基：北京奧博星生物技術(shù)有限責(zé)任公司。

1.3 儀器與設(shè)備

NBCJ-B型無(wú)菌操作臺(tái)、MHP-250型恒溫霉菌培養(yǎng)箱：上海鴻都電子科技有限公司；XHF-DY型高速分散器：寧波新芝生物科技股份有限公司；TGL-16G型高速冷凍離心機(jī)：上海安亭科學(xué)儀器廠(chǎng)；TU-1810PC型紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)：北京普析通用公司；DZKWS-4型電熱恒溫水浴鍋：北京市永光明醫(yī)療儀器廠(chǎng)。

1.4 方法

1.4.1 樣品制備

1.4.1.1 伽師瓜預(yù)處理

配備2% 雙氧水溶液用于伽師瓜果實(shí)表面的殺菌與清洗，重復(fù)操作3次后置于陰涼且通風(fēng)處晾干備用。

1.4.1.2 網(wǎng)紋分級(jí)

大、小、無(wú)網(wǎng)紋的分級(jí)規(guī)則：伽師瓜外果皮網(wǎng)紋處網(wǎng)紋縱橫比（mm）>20∶3 為大網(wǎng)紋組；10∶1≤伽師瓜外果皮網(wǎng)紋處網(wǎng)紋縱橫比（mm）≤20∶3為小網(wǎng)紋組；伽師瓜外果皮以接種點(diǎn)為中心，半徑20 mm內(nèi)無(wú)網(wǎng)紋為無(wú)網(wǎng)紋組。

1.4.1.3 病原菌侵染

制備濃度為1.0×106spores/mL[8](含0.01% 吐溫20)鏈格孢菌孢子懸浮液。

1.4.1.4 伽師瓜無(wú)損接種

接種組：取20 μL鏈格孢菌孢子懸浮液接種于無(wú)菌海綿布上并粘貼在伽師瓜外果皮處的大網(wǎng)紋、小網(wǎng)紋及無(wú)網(wǎng)紋處，各伽師瓜果實(shí)大網(wǎng)紋、小網(wǎng)紋、無(wú)網(wǎng)紋組均接種10個(gè)點(diǎn)后置于室溫貯藏。

對(duì)照組：取20 μL無(wú)菌水接種于無(wú)菌海綿布上并粘貼在伽師瓜外果皮處的大網(wǎng)紋、小網(wǎng)紋及無(wú)網(wǎng)紋處，各伽師瓜果實(shí)大網(wǎng)紋、小網(wǎng)紋、無(wú)網(wǎng)紋組均接種10個(gè)點(diǎn)后置于室溫貯藏。

1.4.1.5 取樣

1.4.2 指標(biāo)測(cè)定

1.4.2.1 病害發(fā)生率

對(duì)照組因接種無(wú)菌水、貯藏期間無(wú)病害，故不統(tǒng)計(jì)對(duì)照組病害發(fā)生率，接種組各網(wǎng)紋組接種點(diǎn)出現(xiàn)直徑≥4.0 mm的黑色病斑即病害發(fā)生，分別統(tǒng)計(jì)大網(wǎng)紋組、小網(wǎng)紋組和無(wú)網(wǎng)紋組的病害發(fā)生率。

1.4.2.2 失重率

接種組與對(duì)照組只區(qū)分是否接種病原菌并不區(qū)分網(wǎng)紋，測(cè)量時(shí)均測(cè)量完整果實(shí)，利用電子秤分別稱(chēng)量貯藏前與貯藏后伽師瓜的質(zhì)量，計(jì)算失重率。

1.4.2.3 可溶性固形物含量

接種組與對(duì)照組只區(qū)分是否接種病原菌并不區(qū)分網(wǎng)紋，測(cè)量時(shí)均測(cè)量完整果實(shí)，隨機(jī)選擇6個(gè)伽師瓜取果肉榨汁，使用折光儀測(cè)量可溶性固形物含量。

1.4.2.4 硬度

給予綜合對(duì)癥治療：予阿托伐他汀鈣片20 mg，1次/d口服，以降血脂；予口服降糖藥或胰島素已控制血糖；根據(jù)具體病情，給予降血壓、改善腦部血液循環(huán)等治療；再予阿司匹林腸溶片100 mg，1次/d口服。治療3個(gè)月為1個(gè)療程，共1個(gè)療程。

接種組與對(duì)照組只區(qū)分是否接種病原菌并不區(qū)分網(wǎng)紋，測(cè)量時(shí)均測(cè)量完整果實(shí)，隨機(jī)選擇6個(gè)果實(shí)，使用硬度計(jì)測(cè)定硬度。

1.4.2.5 苯丙氨酸解氨酶（phenylalanine ammonia lyase，PAL）活性的測(cè)定

PAL活性的測(cè)定方法參照文獻(xiàn)[15]。稱(chēng)取0.3g外果皮、內(nèi)果皮1.5g、果肉2g，分別加入濃度為100 mmol/L、pH8.8的硼酸緩沖溶液5、5、4 mL。冰浴研磨后于4℃、12 000 r/min條件下離心30 min，上清液即粗酶液，低溫保存?zhèn)溆?。取一支試管加? mL濃度為50 mmol/L、pH8.8的硼酸緩沖溶液，0.5 mL濃度為20 mmol/L的L-苯丙氨酸，30℃保溫10 min后加入0.5 mL酶提取液混勻，迅速測(cè)定290 nm波長(zhǎng)下的吸光度記為OD0，將剩余混合液置于30℃下保溫60 min后再次測(cè)定290 nm波長(zhǎng)下的吸光度值記為OD1，根據(jù)吸光度的變化量計(jì)算PAL活性。

1.4.2.6 4-香豆酰輔酶A連接酶（4-coumaroyl-Coa ligase，4CL）活性的測(cè)定

4CL活性的測(cè)定參照張培嶺等[12]的方法。稱(chēng)取外果皮0.1 g、內(nèi)果皮0.5 g、果肉1 g，分別加入pH8.0的Tris-HCl緩沖溶液5.9、5.5、5.0 mL。在冰浴研磨后，于4℃、12 000 r/min條件下離心20 min，上清液即粗酶提取液。取一支試管加入1 mL酶提取液、0.45 mL濃度為5 μmol/L 的 p-香豆酸、0.45 mL 濃度為 50 μmol/L 的腺嘌呤核苷三磷酸（adenosine triphosphate，ATP）、0.45 mL濃度為1μmol/L的輔酶A、1.35mL濃度為15μmol/L的MgSO4?？瞻讓?duì)照為不加p-香豆酸，40℃下保溫10 min后立即在波長(zhǎng)333 nm下測(cè)定吸光度?？瞻讓?duì)照組記為OD0，試驗(yàn)組記為OD1，以吸光度變化量計(jì)算4CL活性。

1.4.2.7 幾丁質(zhì)酶（CHT）和β-1，3葡聚糖酶（GLU）活性的測(cè)定

CHT和GLU活性的測(cè)定方法參照文獻(xiàn)[15]。

CHT活性：稱(chēng)取外果皮0.5g、內(nèi)果皮0.5g、果肉1g，分別加入乙酸-乙酸鈉緩沖溶液（含EDTA、β-巰基乙醇）5.5、5.5、5.0 mL。在冰浴研磨后，于4℃、12 000 r/min條件下離心30 min，上清液即粗酶提取液。取一支試管加入1 mL酶提取液；0.5 mL濃度為50 mmol/L、pH5.2的乙酸-乙酸鈉緩沖溶液；0.5 mL濃度為10 g/L膠狀幾丁質(zhì)懸浮液?？瞻捉M只加入1.5 mL的蒸餾水，對(duì)照組加入的酶液為沸水浴滅活5 min后的酶液。37℃保溫1 h后，空白組、對(duì)照組、試驗(yàn)組均加入0.2 mL濃度為0.6 mol/L的四硼酸鉀。再經(jīng)沸水浴5 min后立即在波長(zhǎng)585 nm下測(cè)定吸光度。對(duì)照組記為OD0，試驗(yàn)組記為OD1，通過(guò)吸光度差量查出標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)上相應(yīng)的N-乙酰葡萄糖胺微摩爾數(shù)，以每秒鐘每克樣品中酶解膠狀幾丁質(zhì)產(chǎn)生1×10-9mol N-乙酰葡萄糖胺一個(gè)CHT活性單位（U）。

GLU活性：稱(chēng)取外果皮0.1 g、內(nèi)果皮1 g、果肉2 g，分別加入乙酸-乙酸鈉緩沖溶液（含EDTA、L-抗壞血酸、β-巰基乙醇）4.9、5.0、4.0mL。在冰浴研磨后，于4℃、12 000 r/min條件下離心30 min，上清液即粗酶提取液。取一支試管加入100 μL酶提取液、100 μL濃度為4 g/L的昆布多糖、1.8 mL的蒸餾水、1.5 mL的3，5-二硝基水楊酸（3，5-dinitrosalicylic acid，DNS）試劑；空白組不加昆布多糖以及酶液，蒸餾水為2 mL；對(duì)照組加入的酶液為沸水浴滅活5 min后的酶液。再經(jīng)沸水浴3 min后冷卻，加入蒸餾水定容至25 mL，混勻，立即在波長(zhǎng)540 nm下測(cè)定吸光度。對(duì)照組記為OD0，試驗(yàn)組記為OD1，以吸光度變化量查出標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)上葡萄糖的毫克數(shù)，以每秒鐘每克樣品中酶解昆布多糖產(chǎn)生1×10-9mol葡萄糖為一個(gè)GLU活性單位（U）。

1.5 數(shù)據(jù)處理

采用IBM SPSS Statistics 26.0進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，采用Duncan法進(jìn)行差異顯著性分析（p＜0.05，差異顯著），采用Origin 2018軟件進(jìn)行繪圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 病害發(fā)生率

采后伽師瓜經(jīng)鏈格孢菌無(wú)損接菌侵染后病害發(fā)生率見(jiàn)圖1。

圖1 病害發(fā)生率Fig.1 Disease incidence

如圖1所示，大網(wǎng)紋、小網(wǎng)紋以及無(wú)網(wǎng)紋處均有黑斑病的發(fā)生，且黑斑病發(fā)生率隨著貯藏時(shí)間的延長(zhǎng)而增加，病害發(fā)生率總體呈現(xiàn)上升的趨勢(shì)。3種網(wǎng)紋均在3 d時(shí)開(kāi)始出現(xiàn)病斑，且在接種18 d時(shí)達(dá)到最大，此時(shí)大網(wǎng)紋組病害發(fā)生率為89.00% ，小網(wǎng)紋病害發(fā)生率為83.33% ，無(wú)網(wǎng)紋病害發(fā)生率為78.00% ，差異顯著（p＜0.05）。推測(cè)是由于在伽師瓜生長(zhǎng)過(guò)程中表皮會(huì)產(chǎn)生一種角質(zhì)膜，而這種角質(zhì)膜有一定的疏水性，對(duì)鏈格孢菌的孢子懸浮液起到了抵抗作用[16-17]。而大網(wǎng)紋以及小網(wǎng)紋在伽師瓜的生長(zhǎng)過(guò)程中外表皮開(kāi)裂后會(huì)形成木栓，導(dǎo)致疏水性較差且表皮網(wǎng)紋下陷，易被鏈格孢菌附著，病害發(fā)生率隨之升高[8]，與本研究結(jié)果相似。

2.2 鏈格孢菌侵染對(duì)伽師瓜果實(shí)失重率、硬度、可溶性固形物含量的影響

2.2.1 鏈格孢菌侵染對(duì)伽師瓜失重率的影響

鏈格孢菌侵染對(duì)伽師瓜失重率的影響見(jiàn)圖2。

圖2 鏈格孢菌侵染對(duì)伽師瓜失重率的影響Fig.2 Effect of Alternaria alternata infection on weight loss rate of Jiashi melon

如圖2所示，采后伽師瓜經(jīng)鏈格孢菌無(wú)損接菌侵染后，接種組與對(duì)照組伽師瓜果實(shí)失重率隨著貯藏時(shí)間的延長(zhǎng)而增加，差異顯著（p＜0.05）。在貯藏期達(dá)到18 d時(shí)接種組與對(duì)照組失重率最大，此時(shí)接種組失重率為7.89% ，對(duì)照組失重率為7.09% 。推測(cè)接種組失重率高于對(duì)照組的原因是伽師瓜果實(shí)的細(xì)胞壁被鏈格孢菌分泌的細(xì)胞壁降解酶降解，細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)大量滲出，鏈格孢菌利用這些營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)大量繁殖導(dǎo)致伽師瓜腐爛，失重率上升[18]。受粉紅單端孢侵染的伽師瓜失重率呈現(xiàn)下降的趨勢(shì)[18]，與本試驗(yàn)研究結(jié)果相似。

2.2.2 鏈格孢菌侵染對(duì)伽師瓜硬度的影響

鏈格孢菌侵染對(duì)伽師瓜硬度的影響見(jiàn)圖3。

圖3 鏈格孢菌侵染對(duì)伽師瓜硬度的影響Fig.3 Effect of Alternaria alternata infection on hardness of Jiashi melon

如圖3所示，采后伽師瓜經(jīng)鏈格孢菌無(wú)損接菌侵染后，接種組與對(duì)照組伽師瓜果實(shí)硬度隨著貯藏時(shí)間的延長(zhǎng)而降低，接種組與對(duì)照組果實(shí)硬度總體呈現(xiàn)下降的趨勢(shì)。在貯藏期達(dá)到18 d時(shí)接種組與對(duì)照組果實(shí)硬度最小，此時(shí)接種組果實(shí)硬度為0.33 kg/cm2，對(duì)照組為0.31 kg/cm2。貯藏期間接種組硬度低于對(duì)照組的原因是，病原菌的侵染導(dǎo)致了伽師瓜細(xì)胞壁的降解，近而導(dǎo)致果實(shí)硬度降低。受粉紅單端孢侵染的伽師瓜硬度呈現(xiàn)下降的趨勢(shì)[18]，與本試驗(yàn)研究結(jié)果相似。

2.2.3 鏈格孢菌侵染對(duì)伽師瓜可溶性固形物含量的影響

鏈格孢菌侵染對(duì)伽師瓜可溶性固形物含量的影響見(jiàn)圖4。

圖4 鏈格孢菌侵染對(duì)伽師瓜可溶性固形物含量的影響Fig.4 Effect of Alternaria alternata infection on soluble solid content of Jiashi melon

如圖4所示，采后伽師瓜經(jīng)鏈格孢菌無(wú)損接菌侵染后，接種組與對(duì)照組伽師瓜果實(shí)可溶性固形物含量隨著貯藏時(shí)間的延長(zhǎng)先上升后下降。在貯藏期達(dá)到9 d時(shí)接種組可溶性固形物含量達(dá)到峰值，為12.85°Brix；對(duì)照組在12 d時(shí)達(dá)到峰值，為11.63°Brix，在18 d時(shí)接種組與對(duì)照組都達(dá)到最小值，分別為9.36、9.65°Brix。推測(cè)采后伽師瓜在貯藏期間可溶性固形物含量先升高再降低的原因，在貯藏前期屬于伽師瓜的后熟階段，此時(shí)無(wú)論是接種組還是對(duì)照組可溶性固形物含量都是呈上升的趨勢(shì)，當(dāng)鏈格孢菌開(kāi)始侵染時(shí)，伽師瓜為了抵抗病原菌的侵染開(kāi)始消耗果實(shí)中的可溶性固形物故而接種組的可溶性固形物含量迅速下降。受粉紅單端孢侵染的伽師瓜可溶性固形物含量呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢(shì)[18]，與本試驗(yàn)研究結(jié)果相似。

探究伽師瓜果實(shí)不同網(wǎng)紋以及不同組織部位在對(duì)病原微生物侵染的抵抗能力上的差異，可以進(jìn)一步對(duì)植物抗病機(jī)制進(jìn)行研究。以上試驗(yàn)結(jié)果表明在伽師瓜采后的病原微生物侵染階段大網(wǎng)紋病害發(fā)生率最高，小網(wǎng)紋次之，無(wú)網(wǎng)紋最低，且失重率會(huì)隨著貯藏時(shí)間的延長(zhǎng)而上升，果實(shí)硬度隨之下降，可溶性固形物含量因果實(shí)的后熟作用呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢(shì)。伽師瓜采摘后，呼吸作用成為其果實(shí)新陳代謝的主導(dǎo)過(guò)程[19]。呼吸作用協(xié)同伽師瓜自身酶進(jìn)行生理活動(dòng)，此過(guò)程會(huì)消耗伽師瓜果實(shí)中的脂肪酸以及多糖等，導(dǎo)致果實(shí)失去水分，硬度下降[20]。

2.3 鏈格孢菌侵染對(duì)伽師瓜果實(shí)苯丙烷代謝相關(guān)酶活性的影響

2.3.1 鏈格孢菌侵染對(duì)伽師瓜不同組織PAL活性的影響

鏈格孢菌侵染對(duì)伽師瓜不同組織PAL活性的影響見(jiàn)圖5。

圖5 鏈格孢菌侵染對(duì)伽師瓜外果皮、內(nèi)果皮、果肉PAL活性的影響Fig.5 Effect of Alternaria alternata infection on PAL activity of exocarp，endocarp and pulp of Jiashi melon

由圖5可知，鏈格孢菌無(wú)損侵染伽師瓜大網(wǎng)紋、小網(wǎng)紋以及無(wú)網(wǎng)紋的外果皮、內(nèi)果皮、果肉組織，PAL活性隨貯藏時(shí)間的延長(zhǎng)呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢(shì)且均高于對(duì)照組。外果皮組織無(wú)網(wǎng)紋組酶活性最先達(dá)到峰值，其次是小網(wǎng)紋組、大網(wǎng)紋組，分別為侵染9、12、15 d，無(wú)網(wǎng)紋組、小網(wǎng)紋組、大網(wǎng)紋組酶活性分別為0 d時(shí)的1.93、2.86、2.89倍。內(nèi)果皮組織無(wú)網(wǎng)紋組及大網(wǎng)紋組在9 d達(dá)到峰值，小網(wǎng)紋在侵染12 d達(dá)到峰值，此時(shí)各網(wǎng)紋組分別為0 d時(shí)的3.28、2.37、9.05倍。果肉組織大網(wǎng)紋組、小網(wǎng)紋組、無(wú)網(wǎng)紋組均在侵染9 d達(dá)到峰值，此時(shí)大網(wǎng)紋組、小網(wǎng)紋組、無(wú)網(wǎng)紋組酶活性分別為0 d時(shí)的2.05、2.00、1.43倍。在18 d的侵染過(guò)程中，外果皮組織無(wú)網(wǎng)紋組的PAL活性顯著高于小網(wǎng)紋組和無(wú)網(wǎng)紋組（p＜0.05）；接種組內(nèi)果皮組織在 3 d～6 d時(shí)大網(wǎng)紋PAL活性高于小網(wǎng)紋組、無(wú)網(wǎng)紋組，無(wú)顯著差異（p＞0.05），9 d～12 d時(shí)無(wú)網(wǎng)紋組 PAL 活性高于小網(wǎng)紋組、大網(wǎng)紋組，差異顯著（p＜0.05）；接種組果肉組織9 d時(shí)小網(wǎng)紋組PAL酶活性最高，大網(wǎng)紋組次之，無(wú)網(wǎng)紋最小，差異顯著（p＜0.05）。文獻(xiàn)[12]研究表明鏈格孢菌侵染會(huì)增強(qiáng)采后甜瓜果實(shí)PAL活性且侵染期間呈現(xiàn)先上升后下降趨勢(shì)，與本試驗(yàn)研究結(jié)果相似。結(jié)合各網(wǎng)紋接種組病害發(fā)生率得出，無(wú)網(wǎng)紋接種組在受到病原菌侵染時(shí)會(huì)更快地啟動(dòng)苯丙烷代謝途徑，增強(qiáng)自身的抗病性。

2.3.2 鏈格孢菌侵染對(duì)伽師瓜不同組織4CL活性的影響

鏈格孢菌侵染對(duì)伽師瓜不同組織4CL活性的影響見(jiàn)圖6。

圖6 鏈格孢菌侵染對(duì)伽師瓜外果皮、內(nèi)果皮、果肉4CL活性的影響Fig.6 Effect of Alternaria alternata infection on 4CL activity of exocarp，endocarp and pulp of Jiashi melon

由圖6所示，鏈格孢菌無(wú)損侵染伽師瓜大網(wǎng)紋、小網(wǎng)紋以及無(wú)網(wǎng)紋的外果皮、內(nèi)果皮、果肉組織，4CL活性都隨貯藏時(shí)間的延長(zhǎng)呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢(shì)，且高于對(duì)照組。外果皮組織大網(wǎng)紋組、小網(wǎng)紋組、無(wú)網(wǎng)紋組均在侵染9 d達(dá)到峰值。無(wú)網(wǎng)紋組、小網(wǎng)紋組、大網(wǎng)紋組酶活性分別為0 d時(shí)的1.48、1.02、1.80倍。內(nèi)果皮組織無(wú)網(wǎng)紋組、小網(wǎng)紋組4CL活性在侵染6 d達(dá)到峰值，大網(wǎng)紋組在9 d達(dá)到峰值，此時(shí)大網(wǎng)紋組、小網(wǎng)紋組、無(wú)網(wǎng)紋組分別為0 d時(shí)的1.28、1.14、1.20倍。果肉組織大網(wǎng)紋組、小網(wǎng)紋組、無(wú)網(wǎng)紋組4CL活性均在侵染的6 d達(dá)到峰值，此時(shí)大、小、無(wú)網(wǎng)紋酶活性分別為0 d時(shí)的 1.04、1.09、1.27倍。

在18 d的侵染過(guò)程中，接種組外果皮組織大網(wǎng)紋組4CL活性在9 d時(shí)顯著高于大網(wǎng)紋組和小網(wǎng)紋組（p＜0.05）；接種組內(nèi)果皮組織無(wú)網(wǎng)紋組、小網(wǎng)紋組4CL活性最先達(dá)到峰值，顯著高于大網(wǎng)紋組（p＜0.05）；接種組果肉組織無(wú)網(wǎng)紋組4CL活性在6 d時(shí)顯著高于大網(wǎng)紋組、小網(wǎng)紋組（p＜0.05）。文獻(xiàn)[12]研究表明，鏈格孢菌侵染會(huì)引起采后甜瓜果實(shí)的苯丙烷代謝通過(guò)合成類(lèi)黃酮等物質(zhì)增強(qiáng)自身的抗病性，4CL作為苯丙烷代謝過(guò)程中的最后一個(gè)酶，在侵染期間呈現(xiàn)先上升后下降趨勢(shì)，與本試驗(yàn)研究結(jié)果相似。

PAL、4CL是苯丙烷代謝的關(guān)鍵酶，PAL作為起始酶同時(shí)也是限速酶，而4CL則是此反應(yīng)的最后一個(gè)酶，苯丙烷代謝在植物抗病過(guò)程中起到了至關(guān)重要的作用，它們?yōu)轭?lèi)黃酮、木質(zhì)素等下游產(chǎn)物的合成提供原料[21]。經(jīng)大量試驗(yàn)驗(yàn)證植物在受到病原菌的侵染時(shí)，PAL活性有明顯提高，抗病組織高于感病組織[21]，因此PAL、4CL與果實(shí)的抗病性呈正相關(guān)[22-25]。

2.4 鏈格孢菌侵染對(duì)伽師瓜果實(shí)CHT和GLU活性的影響

2.4.1 鏈格孢菌侵染對(duì)伽師瓜不同組織CHT活性的影響

鏈格孢菌侵染對(duì)伽師瓜不同組織CHT活性的影響見(jiàn)圖7。

圖7 鏈格孢菌侵染對(duì)伽師瓜外果皮、內(nèi)果皮、果肉CHT活性的影響Fig.7 Effect of Alternaria alternata infection on CHT activity of exocarp，endocarp and pulp of Jiashi melon

由圖7可知，鏈格孢菌無(wú)損侵染伽師瓜大網(wǎng)紋、小網(wǎng)紋以及無(wú)網(wǎng)紋的外果皮、內(nèi)果皮、果肉組織，CHT活性都隨貯藏時(shí)間的延長(zhǎng)呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢(shì)，且均高于對(duì)照組。外果皮組織大網(wǎng)紋組、小網(wǎng)紋組、無(wú)網(wǎng)紋組酶活性均在侵染9 d時(shí)達(dá)到峰值，大網(wǎng)紋組、小網(wǎng)紋組、無(wú)網(wǎng)紋組酶活性分別為0 d時(shí)的3.37、3.04、2.66倍。內(nèi)果皮組織小網(wǎng)紋組酶活性最先達(dá)到峰值為侵染9 d，大網(wǎng)紋組以及無(wú)網(wǎng)紋組酶活性均在12 d達(dá)到峰值，此時(shí)小網(wǎng)紋組、大網(wǎng)紋組、無(wú)網(wǎng)紋組別為0 d時(shí)的5.23、1.63、4.13倍。果肉組織大網(wǎng)紋組、小網(wǎng)紋組、無(wú)網(wǎng)紋組均在侵染9 d達(dá)到峰值，此時(shí)大網(wǎng)紋組、小網(wǎng)紋組、無(wú)網(wǎng)紋組酶活性分別為0 d時(shí)的5.60、4.24、3.12倍。在18 d的侵染過(guò)程中，外果皮組織無(wú)網(wǎng)紋組CHT活性均高于大網(wǎng)紋組、小網(wǎng)紋組；接種組內(nèi)果皮組織在0～6 d時(shí)小網(wǎng)紋CHT活性高于大網(wǎng)紋組、無(wú)網(wǎng)紋組，顯著差異（p＜0.05），9 d～12 d時(shí)無(wú)網(wǎng)紋組 CHT 活性高于小網(wǎng)紋組、大網(wǎng)紋組，差異顯著（p＜0.05）；接種組果肉組織在0～3 d時(shí)無(wú)網(wǎng)紋組CHT活性低于小網(wǎng)紋組、大網(wǎng)紋組，顯著差異（p＜0.05），6 d～12 d 時(shí)無(wú)網(wǎng)紋組CHT活性高于小網(wǎng)紋組、大網(wǎng)紋組，差異顯著（p＜0.05）。文獻(xiàn)[6]研究結(jié)果表明，鏈格孢菌在侵染甜瓜果實(shí)后會(huì)刺激CHT的產(chǎn)生，并且提高自身活力，降解病原菌的細(xì)胞壁，提高自身抗病性，與本試驗(yàn)研究結(jié)果相似。

2.4.2 鏈格孢菌侵染對(duì)伽師瓜不同組織GLU活性的影響

鏈格孢菌侵染對(duì)伽師瓜不同組織GLU活性的影響見(jiàn)圖8。

圖8 鏈格孢菌侵染對(duì)伽師瓜外果皮、內(nèi)果皮、果肉GLU活性的影響Fig.8 Effect of Alternaria alternata infection on GLU activity of exocarp，endocarp and pulp of Jiashi melon

由圖8可知，鏈格孢菌無(wú)損侵染伽師瓜大網(wǎng)紋、小網(wǎng)紋以及無(wú)網(wǎng)紋的外果皮、內(nèi)果皮、果肉組織，GLU活性都隨貯藏時(shí)間的延長(zhǎng)呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢(shì)，且均高于對(duì)照組。外果皮組織大網(wǎng)紋組、小網(wǎng)紋組在侵染12 d達(dá)到峰值，無(wú)網(wǎng)紋組在15 d達(dá)到峰值，大網(wǎng)紋組、小網(wǎng)紋組、無(wú)網(wǎng)紋組酶活性分別為0 d時(shí)的5.23、4.59、5.04倍。內(nèi)果皮組織大網(wǎng)紋組、小網(wǎng)紋組在侵染9 d達(dá)到峰值，無(wú)網(wǎng)紋組在12 d達(dá)到峰值，此時(shí)各網(wǎng)紋組分別為0 d時(shí)的4.47、3.40、3.31倍；果肉組織大網(wǎng)紋（p＜0.05）。文獻(xiàn)[6]研究結(jié)果表明，GLU水解真菌的細(xì)胞壁，在鏈格孢菌侵染甜瓜果實(shí)時(shí)，甜瓜自身的GLU被刺激，產(chǎn)生大量代謝產(chǎn)物水解真菌細(xì)胞壁使其失活，提高自身抗病性，與本試驗(yàn)研究結(jié)果相似。

CHT與GLU是植物在抗病過(guò)程中起到反擊作用的關(guān)鍵酶，其原理是水解構(gòu)成真菌細(xì)胞壁的幾丁質(zhì)與葡聚糖，通過(guò)降解真菌細(xì)胞壁從而使病原菌失去致病能力，提高果實(shí)的抗病能力[26-27]，果實(shí)中CHT與GLU的活性與抗病性呈正相關(guān)[28-31]。

3 結(jié)論

采后伽師瓜在貯藏期間，其自身酶進(jìn)行生理活動(dòng)并協(xié)同呼吸作用，消耗伽師瓜果實(shí)中的脂肪酸以及多糖等，導(dǎo)致果實(shí)失去水分，硬度下降，從而影響伽師瓜各項(xiàng)指標(biāo)，接種組與對(duì)照組失重率在貯藏期間均呈現(xiàn)上升趨勢(shì)，且接種組失重率顯著高于對(duì)照組，可溶性固形物含量呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢(shì)，接種組變化趨勢(shì)顯著大于對(duì)照組，硬度在貯藏期間呈下降趨勢(shì)，接種組硬度顯著小于對(duì)照組。接種病原菌的3種網(wǎng)紋發(fā)病率，大網(wǎng)紋病害發(fā)生率最高，小網(wǎng)紋次之，無(wú)網(wǎng)紋最低。

苯丙烷代謝以及CHT與GLU在植物抗病過(guò)程中都起到了關(guān)鍵性作用，它們?yōu)轭?lèi)黃酮、木質(zhì)素等下游產(chǎn)物的合成提供原料。CHT與GLU通過(guò)水解構(gòu)成真菌細(xì)胞壁的幾丁質(zhì)與葡聚糖，通過(guò)降解真菌細(xì)胞壁從而使病原菌失去致病能力，提高果實(shí)的抗病能力。本試驗(yàn)通過(guò)測(cè)定采后伽師瓜不同網(wǎng)紋及不同組織受病原菌侵染后苯丙烷代謝相關(guān)酶以及CHT與GLU的活性，對(duì)其抗病性進(jìn)行比較，得出結(jié)論：伽師瓜外果皮、內(nèi)果皮、果肉均為無(wú)網(wǎng)紋組＞小網(wǎng)紋組＞大網(wǎng)紋組，且外果皮＞內(nèi)果皮＞果肉。組、小網(wǎng)紋組、無(wú)網(wǎng)紋組均在侵染的9 d達(dá)到峰值，此時(shí)大網(wǎng)紋組、小網(wǎng)紋組、無(wú)網(wǎng)紋組酶活性分別為0 d時(shí)的4.50、4.20、4.66倍。在18 d的侵染過(guò)程中，接種組外果皮組織無(wú)網(wǎng)紋組GLU活性均高于大網(wǎng)紋組、小網(wǎng)紋組，差異顯著（p＜0.05）；接種組內(nèi)果皮組織在 3 d～6 d時(shí)無(wú)網(wǎng)紋組GLU活性低于小網(wǎng)紋組、大網(wǎng)紋組，9 d～15 d時(shí)無(wú)網(wǎng)紋組GLU活性高于小網(wǎng)紋組、大網(wǎng)紋組，差異顯著（p＜0.05）；接種組果肉組織在 6 d～12 d時(shí)無(wú)網(wǎng)紋組GLU活性高于小網(wǎng)紋組、大網(wǎng)紋組，差異顯著