寧愛(ài)玲,何路遙,曾端,和申,李睿,禹順英,李華芳

抑郁障礙(MDD)是一種常見(jiàn)的、嚴(yán)重的、反復(fù)發(fā)作的重性精神障礙疾病,世衛(wèi)組織預(yù)計(jì),至2030年其將成為全球疾病負(fù)擔(dān)的第一大原因,其患病率在不同國(guó)家差異很大,總體上約為6%[1]；其發(fā)病的具體機(jī)制至今尚不清楚,但神經(jīng)發(fā)生和神經(jīng)可塑性可能在其中發(fā)揮著重要作用[2]。自噬是一種保守的溶酶體降解途徑,在神經(jīng)發(fā)育和突觸可塑性過(guò)程中的改變可能會(huì)導(dǎo)致發(fā)育異常和突觸功能障礙,對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)至關(guān)重要[3]。Beclin 1是一個(gè)重要的自噬標(biāo)記物,其在自噬的早期成核過(guò)程中扮演著關(guān)鍵角色,在人腦海馬和額葉皮質(zhì)的神經(jīng)元和膠質(zhì)細(xì)胞中均有表達(dá)[4]。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn),在MDD患者血液?jiǎn)蝹€(gè)核細(xì)胞和MDD模型大鼠海馬神經(jīng)元中,Beclin 1基因表達(dá)水平明顯升高[5-6]；基于這些發(fā)現(xiàn),假設(shè)Beclin-1可能是預(yù)測(cè)MDD的潛在生物標(biāo)志物。經(jīng)本中心倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)(2018-39),本研究采用病例對(duì)照方法,探討B(tài)eclin 1在MDD中的作用,以期為MDD臨床診斷提供新的分子標(biāo)記物。

1 對(duì)象和方法

1.1 對(duì)象

病例組:為2019年6月至2020年5月在本中心門診或住院的MDD患者；入組標(biāo)準(zhǔn):中國(guó)漢族；18～70歲；經(jīng)簡(jiǎn)明國(guó)際神經(jīng)精神訪談(MINI)確診,符合美國(guó)《精神障礙診斷與統(tǒng)計(jì)手冊(cè)》第4版(DSM-Ⅳ)MDD診斷標(biāo)準(zhǔn)；17項(xiàng)漢密頓抑郁量表(HAMD)評(píng)分≥7分；性別不限。排除標(biāo)準(zhǔn):經(jīng)MINI確診,符合除MDD外的 DSM-Ⅳ軸 I 診斷；有重大軀體疾病者；嚴(yán)重自殺傾向者；妊娠期和哺乳期女性患者。對(duì)照組:為同期招募的上海市精神衛(wèi)生中心的健康職工和學(xué)生；入組標(biāo)準(zhǔn):中國(guó)漢族；18～70歲；性別不限。排除標(biāo)準(zhǔn):符合DSM-Ⅳ的任何一項(xiàng)精神疾病診斷；有精神疾病家族史；有嚴(yán)重軀體疾?。粐?yán)重自殺傾向者；妊娠期和哺乳期婦女。所有研究對(duì)象均簽署知情同意書(shū)。

1.2 方法

1.2.1 一般人口學(xué)及臨床資料收集 采用自制一般情況問(wèn)卷收集入組對(duì)象人口學(xué)資料及臨床資料,包括受試者的性別、年齡、婚姻狀況、病程等信息。HAMD-17評(píng)估臨床癥狀和疾病嚴(yán)重程度,該量表包括抑郁情緒、有罪感、自殺等條目。評(píng)判標(biāo)準(zhǔn):<7分為正常,7～17分為輕度抑郁,18～24分為中度抑郁,>24分為重度抑郁。

1.2.2 血漿Beclin 1濃度檢測(cè) 所有研究對(duì)象于早晨抽取空腹靜脈血5 ml,置于EDTA采血管中,輕搖混勻防止血液凝固,4℃,1 000 r/min離心15 min,分離血漿于-80℃冰箱中保存?zhèn)溆?。使用Human Beclin 1 ELISA Kit(Novus,NBP2-69959)采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)定量檢測(cè)人類Beclin 1濃度。該ELISA試劑盒采用了Sandwich-ELISA原理,試劑盒提供的微酶聯(lián)免疫吸附板已預(yù)先涂有人Beclin 1特異性抗體,將標(biāo)準(zhǔn)品或樣品加入酶聯(lián)免疫吸附微孔中,并與特異性抗體結(jié)合,只有含有人類Beclin 1、生物素化檢測(cè)抗體和親和素-辣根過(guò)氧化物酶偶聯(lián)物的孔才會(huì)呈現(xiàn)藍(lán)色,加入終止液終止酶-底物反應(yīng),顏色變?yōu)辄S色。用分光光度法在450 nm的波長(zhǎng)處測(cè)量光密度(OD),OD值與人Beclin 1的濃度成正比,通過(guò)將樣品的OD值與標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行比較,可以計(jì)算樣品中人Beclin 1的濃度。

2 結(jié)果

2.1 兩組一般人口學(xué)資料比較

病例組41例患者、對(duì)照組47名健康志愿者入組。病例組年齡明顯大于對(duì)照組(P<0.05)。見(jiàn)表1。

表1 兩組一般資料比較例,%)

2.2 兩組血漿Beclin 1水平比較

血漿Beclin 1水平病例組為(0.61±0.24)ng/ml,對(duì)照組為(0.61±0.24)ng/ml；兩組間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Z=-1.27,P=0.20)。兩組男性間及女性間血漿Beclin 1水平比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見(jiàn)表2。

表2 兩組血漿Beclin 1水平比較

2.3 病例組中人口學(xué)因素對(duì)血漿Beclin 1水平影響

病例組中不同性別、有無(wú)MDD家族史及吸煙史患者間血漿Beclin 1水平比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見(jiàn)表3。

表3 人口學(xué)因素對(duì)血漿Beclin 1水平影響

2.4 MDD患者血漿Beclin 1水平與臨床特征相關(guān)性

Pearson 相關(guān)分析顯示,MDD患者血漿Beclin 1水平與總病程及HAMD評(píng)分無(wú)相關(guān)(r=-0.21,P=0.20；r=-0.17,P=0.33)。

3 討論

自噬是真核細(xì)胞中一個(gè)重要的溶酶體降解和循環(huán)過(guò)程,負(fù)責(zé)維持細(xì)胞功能和細(xì)胞存活的穩(wěn)態(tài)。自噬過(guò)程在神經(jīng)元和腦細(xì)胞中起著細(xì)胞保護(hù)作用,其通路的異?？赡軐?dǎo)致神經(jīng)元發(fā)育和突觸可塑性過(guò)程中的細(xì)胞交通堵塞,導(dǎo)致神經(jīng)發(fā)育障礙[7-8]。有證據(jù)表明自噬誘導(dǎo)對(duì)產(chǎn)前應(yīng)激引起的抑郁樣行為和認(rèn)知障礙有作用[9]；抑制自噬被證明可以減弱3,4-亞甲基二氧甲基苯丙胺(MDMA)對(duì)大鼠抑郁樣行為的誘導(dǎo)[10]。這些研究都表明,自噬和抑郁癥之間有一定的關(guān)系；而對(duì)調(diào)節(jié)自噬核心[11]的Beclin 1基因與抑郁癥關(guān)系的研究少有報(bào)道。

本研究應(yīng)用ELISA方法檢測(cè)了41例MDD患者和47名健康對(duì)照者血漿Beclin 1水平,比較后顯示兩組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Z=-1.27,P=0.20)；對(duì)兩組男性間和女性間血漿Beclin 1水平比較差異也無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Z=-0.49,P=0.62；Z=-1.11,P=0.27)；一項(xiàng)西班牙人群小樣本的研究[5]發(fā)現(xiàn),重度MDD患者血液?jiǎn)蝹€(gè)核細(xì)胞中自噬基因Beclin 1表達(dá)升高,與本研究結(jié)果不一致；其原因可能為研究對(duì)象不同；他們的研究只納入女性MDD患者及女性健康對(duì)照者。Beclin 1位于17q21,在人腦海馬和額葉皮質(zhì)的神經(jīng)元和膠質(zhì)細(xì)胞中均有表達(dá)；眾多研究[12-14]發(fā)現(xiàn),Beclin 1在神經(jīng)退行性疾病中發(fā)揮著重要作用,如阿爾茨海默病(AD)、Macado joseph病和精神分裂癥。Beclin 1在早期AD患者的大腦額皮質(zhì)灰質(zhì)和內(nèi)嗅皮質(zhì)表達(dá)降低[15]；在精神分裂癥患者死后大腦海馬中Beclin 1表達(dá)也特異性降低,而在外周血淋巴細(xì)胞中未檢測(cè)到差異[14]。以上研究表明Beclin 1在精神疾病患者中的表達(dá)水平變化,由于尸腦取材限制,本研究先檢測(cè)了MDD患者血漿Beclin 1水平,雖未發(fā)現(xiàn)差異,然而血漿Beclin-1的細(xì)胞來(lái)源尚不清楚,血漿Beclin-1水平是否反映人腦的真實(shí)水平還需進(jìn)一步證實(shí)。

本研究初步研究,局限性在于樣本量相對(duì)較小,以后還需收集與病例相匹配的健康對(duì)照,完善人口學(xué)特征和混雜因素的控制等,在更大的樣本中進(jìn)行更深入的研究分析；另外血漿Beclin-1的細(xì)胞來(lái)源尚不清楚,血漿Beclin-1水平是否反映人腦的真實(shí)水平還需進(jìn)一步證實(shí)。