李莉莎 張倩 劉歡 吳瓊輝 楊亭 陳潔 李廷玉

（重慶醫(yī)科大學(xué)附屬兒童醫(yī)院兒童保健科/國家兒童健康與疾病臨床醫(yī)學(xué)研究中心/兒童發(fā)育疾病研究教育部重點實驗室/兒童營養(yǎng)與健康重慶市重點實驗室，重慶 400014）

維生素A（vitamin A，VA）是維持機體生長發(fā)育及穩(wěn)態(tài)平衡的重要脂溶性維生素，維生素A缺乏（vitamin A deficiency，VAD）迄今仍是發(fā)展中國家重要的公共衛(wèi)生問題［1］。孤獨癥譜系障礙（autism spectrum disorder，ASD）是以社交缺陷和重復(fù)刻板為主要核心癥狀的一種異質(zhì)性神經(jīng)發(fā)育障礙［2］。孕期VAD可致腦發(fā)育異常且與ASD的發(fā)生發(fā)展有關(guān)，其中VA水平和ASD核心癥狀具有相關(guān)性［3］，維生素A補充（vitamin A supplement，VAS）可在一定程度上緩解VAD的ASD兒童的核心癥狀［4］。視黃酸（retinoic acid，RA）是VA在體內(nèi)發(fā)揮作用的主要活性形式，RA可通過與視黃酸受體（retinoic acid receptors，RARs）結(jié)合調(diào)控靶基因轉(zhuǎn)錄活性［3］。本課題組的既往研究表明，孕期開始的持續(xù)VAD或其他環(huán)境因素可通過下調(diào)子代大鼠體內(nèi)RA信號通路誘導(dǎo)其產(chǎn)生孤獨癥樣行為［5-7］，但RA信號通路異常誘導(dǎo)孤獨癥樣行為的具體機制有待進一步探討。

ASD病因復(fù)雜，目前研究表明其風(fēng)險基因多匯集在突觸功能相關(guān)的通路上。軸突蛋白1（neurexin 1，NRXN1）基因是其中一個突觸相關(guān)的ASD風(fēng)險基因，其編碼的突觸蛋白在突觸傳遞和可塑性中起核心作用［8］。NRXN1蛋白由NRXN1α亞型和NRXN1β亞型組成，NRXN1蛋白水平的變化可能影響突觸可塑性從而導(dǎo)致ASD等神經(jīng)精神障礙［8-9］，但NRXN1參與ASD的具體發(fā)病機制及其上游調(diào)控因子并不清楚。目前認(rèn)為ASD發(fā)病是因為全腦神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)故障［10］，磁共振光譜檢測發(fā)現(xiàn)ASD兒童視皮質(zhì)的功能連接存在異常，且伴隨突觸穩(wěn)態(tài)可塑性失衡，這些異常與ASD核心癥狀的嚴(yán)重程度相關(guān)［11-13］，提示視皮質(zhì)也可能參與到ASD的發(fā)生和發(fā)展。本課題組前期發(fā)現(xiàn)孕期VAD可通過下調(diào)仔鼠前額葉、丘腦、小腦等多個腦區(qū)的RA信號，從而誘導(dǎo)出仔鼠孤獨癥樣行為，進一步研究發(fā)現(xiàn)RA信號通路調(diào)控ASD相關(guān)風(fēng)險基因（RORA、CD38、OXT等）［5，14］是其潛在機制。但RA信號通路是否影響視皮質(zhì)，進而參與大鼠ASD樣行為的研究未見報道。NRXN1是視皮質(zhì)可塑性中重要的分子基礎(chǔ)［15-16］，研究發(fā)現(xiàn)視黃酸受體α（retinoic acid receptorα，RARα）與視皮質(zhì)突觸可塑性有關(guān)［17］，并且大腦中RA與NRXN1的表達相關(guān)［18］。為此，本文建立了不同VA水平的孕鼠模型，通過子代缺乏和早期補充，探討RARα信號變化對VAD大鼠視皮質(zhì)NRXN1的影響及其與孤獨癥樣行為的關(guān)聯(lián)。

1 材料與方法

1.1 實驗分組及模型構(gòu)建

9只SPF級Sprague-Dawley母鼠按照1∶2的比例隨機分為維生素A正常（vitamin A normal，VAN）飲食（VA含量6 500 IU/kg）和VAD飲食（VA含量400 IU/kg）。喂養(yǎng)4周后，待各組母鼠血清VA水平達到標(biāo)準(zhǔn)（VAN母鼠≥1.05μmol/L；VAD母鼠<1.05μmol/L）［14］進行雌雄合籠（1∶1）。將VAN母鼠納入VAN組，VAD母鼠隨機分為VAD組和VAS組，每組3只。從母鼠孕期和哺乳期，到仔鼠生后6周齡，VAN組母鼠和仔鼠均喂養(yǎng)VAN飼料；VAD組母鼠和仔鼠均喂養(yǎng)VAD飼料。VAS組母鼠孕期喂養(yǎng)VAD飼料，哺乳期喂養(yǎng)VAN飼料；仔鼠從生后第1~7天通過灌胃補充VA（溶于大豆油，83.33 IU/d，每天1次），仔鼠斷奶后到6周齡喂養(yǎng)VAN飼料。VAN組和VAD組仔鼠在生后第1天均給予同等劑量大豆油（不含VA）灌胃，連續(xù)7 d。各組仔鼠在6周齡時隨機抽取20只雄鼠進行ASD相關(guān)行為學(xué)測試，測試完成后收集血清和腦組織，進行相關(guān)生化和電生理檢測。由于雌鼠生長緩慢不易達到VAD表型［5］，本研究中所用仔鼠均為雄性。本實驗經(jīng)重慶醫(yī)科大學(xué)附屬兒童醫(yī)院動物實驗倫理委員會批準(zhǔn)（CHCMUIACUC20200424017）。

1.2 行為學(xué)檢測

使用ANY-Maze視頻跟蹤系統(tǒng)（美國Stoelting公司）測試仔鼠的孤獨癥樣行為。在曠場實驗中，曠場箱被分為中央?yún)^(qū)和周邊區(qū)，依次將各組仔鼠從中央?yún)^(qū)放入，測試時間5 min。攝像系統(tǒng)記錄每只仔鼠在中央?yún)^(qū)的時間以評估其探索行為，記錄自我理毛時間明確是否具有重復(fù)刻板行為表現(xiàn)［19］。

三箱實驗在連通的透明三室箱中進行，是評估大鼠社交能力的經(jīng)典方法［19］。第1天，在中間箱放入仔鼠并讓其適應(yīng)5 min。第2天，在兩側(cè)箱的金屬籠中各放入1只同齡、同性別的陌生鼠和1個玩具，受測鼠從中間箱放入后在裝置中自由探索5 min。第3天，在兩側(cè)箱的金屬籠中分別放入陌生鼠和與受測鼠同籠同性別的熟悉鼠，受測鼠再次從中間箱放入后自由探索5 min。攝像系統(tǒng)記錄受測鼠在每個箱內(nèi)的活動時間，觀察大鼠的社交能力。

1.3 樣本收集和血清視黃醇測定

各組仔鼠麻醉后股動脈采血，離心取血清。開顱取出大鼠腦枕葉的視皮質(zhì)組織。取血清200μL，以甲醇∶水為97∶3（100μL）為流動相，采用高效液相色譜法（DUG-HPLC-20AT，日本）測定血清視黃醇水平［7］。

1.4 實時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)檢測mRNA水平

采用Promega Biotech總RNA提取試劑盒（Promega，美國）提取大鼠視皮質(zhì)組織RNA。用Prime Script RT試劑盒（Takara，日本）制備cDNA。引物序列如下：RARα：上游5'-ATTGCCGACCAGATTACC-3'， 下 游 5'-AAAGCCAGCGTTGTGC-3'；N-甲基-D-天冬氨酸受體 1（N-methyl-D-aspartate receptor subunit 1，NMDAR1）：上游5'-AAGCTGCACGCCTTTATCTG-3'，下 游5'-TTCTCATGGGACTTGAGTATGGA-3'；NRXN1：上游5'-GCGTCAGCACTCAGGCATTGG-3'，下 游 5'-TTCTTGCGTGTAGCCCGTTGTG-3'；GAPDH：上 游5'-CCTGGAGAAACCTGCCAAG-3'，下游5'-CACAGGAGACAACCTGGTCC-3'。cDNA在聚合酶鏈反應(yīng)（polymerase chain reaction，PCR）儀（Bio-Rad，美國）上進行擴增，反應(yīng)體系及反應(yīng)條件參考PCR SYBR green試劑盒（QIAGEN，德國）說明書。各目的基因以GAPDH為內(nèi)參照，結(jié)果采用2-ΔCt公式計算得出。

1.5 Western blot法檢測蛋白水平

提取大鼠視皮質(zhì)組織總蛋白。使用BCA蛋白試劑盒（ATGene，美國）檢測蛋白濃度。通過電泳、轉(zhuǎn)膜、封閉，分別加入相應(yīng)的一抗：兔抗大鼠NMDAR1多克隆抗體（1∶1 000，Abcam，英國）、兔抗大鼠NRXN1α多克隆抗體（1∶10 000，Merck，德國）、兔抗大鼠NRXN1β多克隆抗體（1∶2 000，蘇州百遠(yuǎn)生物科技有限公司），兔抗大鼠RARα多克隆抗體（1∶1 000，Genetex，美國），小鼠抗大鼠GAPDH單克隆抗體（1∶5 000，Proteintech，美國）。在4℃冰箱孵育過夜，PBST漂洗3次后加入相應(yīng)二抗：HRP標(biāo)記山羊抗兔多克隆抗體（1∶5 000，ATGene，美國）、HRP標(biāo)記山羊抗小鼠多克隆抗體（1∶5 000，ATGene，美國），室溫孵育1 h，漂洗后ECL發(fā)光顯影。使用Image J軟件計算條帶灰度值，全蛋白以GAPDH為內(nèi)參。結(jié)果以目的蛋白與內(nèi)參GAPDH蛋白比值表示。

1.6 染色質(zhì)免疫共沉淀檢測

采用染色質(zhì)免疫共沉淀（chromatin immunoprecipitation，ChIP）試 劑 盒（Millipore，Bedford，美國）進行ChIP檢測。將視皮質(zhì)組織勻漿、交聯(lián)、超聲打斷DNA、用抗RARα抗體（sc-293417，Santacruz，美國）和IgG抗體（陰性對照）孵育制備protein G/antibody/protein/DNA復(fù)合物，樣品解交聯(lián)后進行DNA純化，利用LASAGNA-SEARCH 2.0轉(zhuǎn)錄因子數(shù)據(jù)庫設(shè)計NRXN1基因啟動子區(qū)域引物序列，行PCR檢測。NRXN1基因啟動子的引物序列如下：上游5'-AACTGTCTTCAGCTGCCATC-3'， 下 游 5'-TCTTGGGCTGTGCATGTATG-3'；用2-ΔΔCt計算相對于IgG的富集倍數(shù)，其中ΔΔCt=（標(biāo)準(zhǔn)化CtIPCtIgG）。

1.7 電生理記錄

各組仔鼠麻醉后，4℃切片液灌注心臟。取出完整腦組織，并轉(zhuǎn)移到4℃含氧人工腦脊液中。用振動切片機將視皮質(zhì)組織行冠狀位切片后孵育1 h。刺激電極刺激視皮質(zhì)的Ⅳ層，記錄電極放置于視皮質(zhì)的Ⅱ~Ⅲ層，記錄場興奮性突觸后電位（field excitatory postsynaptic potentials，fEPSPs）。刺激強度為最大電場電位的50%，記錄fEPSP 15 min（基線）。用高頻電刺激（high frequency train stimulation，HFS）誘導(dǎo)長時程增強（long-term potentiation，LTP）并記錄45 min。HFS誘發(fā)后的fEPSP振幅較基線超過20%且持續(xù)至少30 min，稱為成功誘導(dǎo)LTP。使用PClamp10軟件（Molecular Devices）進行數(shù)據(jù)收集、分析和處理。

1.8 統(tǒng)計學(xué)分析

采用SPSS 25.0軟件進行統(tǒng)計分析。計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，多組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用SNK-q檢驗。P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同VA水平大鼠血清視黃醇水平

視黃醇是臨床評估VA缺乏的診斷指標(biāo)。3組（分別n=20）仔鼠血清視黃醇水平比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（F=232.87，P<0.001）。VAD組仔鼠血清視黃醇水平［（0.53±0.06）μmol/L］明顯低于VAN組［（1.21±0.13）μmol/L］和VAS組［（1.14±0.12）μmol/L］（P<0.05）；VAS組血清視黃醇水平恢復(fù)至正常，與VAN組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。這一結(jié)果表明，我們成功構(gòu)建了VAN、VAD和VAS大鼠模型。

2.2 不同VA水平大鼠行為學(xué)檢測結(jié)果

在曠場實驗中，各組大鼠的移動總行程差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），表明孕期較低的視黃醇水平未損害后代視力相關(guān)的運動活動。與VAN組相比，VAD組在中央?yún)^(qū)停留時間更少（P<0.05），自我理毛時間更長（P<0.05）。與VAD組相比，VAS組在中央?yún)^(qū)停留時間更長（P<0.05）。見圖1、表1。

圖1 各組大鼠曠場實驗移動軌跡圖

表1 各組大鼠曠場實驗結(jié)果比較 （±s，n=20）

表1 各組大鼠曠場實驗結(jié)果比較 （±s，n=20）

注：［VAN］維生素A正常；［VAD］維生素A缺乏；［VAS］維生素A補充。a示與VAN組比較，P<0.05；b示與VAD組比較，P<0.05。

組別VAN組VAD組VAS組F值P值移動總行程(m)10.1±2.2 9.4±2.3 9.7±1.9 0.472 0.626中央?yún)^(qū)停留時間(s)4.5±2.6 1.6±1.5a 3.9±3.4b 6.820 0.002自我理毛時間(s)30±9 43±13a 35±7 9.216<0.001

在三箱實驗對陌生鼠與玩具間的社交偏好測試中，結(jié)果顯示VAD組在陌生鼠箱中的停留時間顯著短于VAN組和VAS組（P<0.05），在玩具箱中的停留時間則顯著長于VAN組和VAS組（P<0.05）。在對陌生鼠與熟悉鼠的社交偏好測試中，結(jié)果顯示VAD組在陌生鼠箱中的停留時間顯著短于VAN組和VAS組（P<0.05），在熟悉鼠箱中的停留時間顯著長于VAN組和VAS組（P<0.05）。提示妊娠期VAD會損害后代的社會互動和社會新奇認(rèn)知水平；生后早期補充VA后，這些受損行為可得到改善。見圖2、表2。

表2 各組大鼠三箱實驗各箱停留時間比較 （±s，s，n=20）

表2 各組大鼠三箱實驗各箱停留時間比較 （±s，s，n=20）

注：［VAN］維生素A正常；［VAD］維生素A缺乏；［VAS］維生素A補充。a示與VAN組比較，P<0.05；b示與VAD組比較，P<0.05。

組別VAN組VAD組VAS組F值P值陌生鼠與玩具的社交偏好測試玩具箱110±31 143±24a 112±29b 8.476 0.001中間箱49±17 45±13 49±23 0.334 0.718陌生鼠箱141±28 112±22a 138±30b 6.746 0.002陌生鼠與熟悉鼠的社交偏好測試熟悉鼠箱116±38 170±54a 124±49b 7.511 0.001中間箱43±22 38±32 36±25 0.353 0.704陌生鼠箱141±35 92±42a 140±41b 10.146<0.001

圖2 各組大鼠三箱實驗移動軌跡圖 上圖為大鼠在陌生鼠箱與玩具箱中移動的軌跡圖；下圖為大鼠在陌生鼠箱與熟悉鼠箱中移動的軌跡圖。

2.3 不同VA水平大鼠視皮質(zhì)突觸可塑性的變化

為研究孕期VAD對后代視皮質(zhì)可塑性的影響，檢測突觸可塑性關(guān)鍵蛋白NMDAR1的表達水平和LTP水平［20］。VAD組大鼠視皮質(zhì)NMDAR1 mRNA和蛋白表達水平均顯著低于VAN組和VAS組（P<0.05）。電生理實驗結(jié)果顯示，VAD組大鼠的LTP顯著低于VAN組和VAS組（P<0.05）。提示孕期VAD可能會影響仔鼠視皮質(zhì)突觸可塑性的改變，生后早期的VA補充能基本挽救VAD所致異常。見圖3、表3。

表3 各組大鼠視皮質(zhì)NMDAR1相對表達量及LTP水平比較 （±s）

表3 各組大鼠視皮質(zhì)NMDAR1相對表達量及LTP水平比較 （±s）

注：［NMDAR1］N-甲基-D-天冬氨酸受體1；［HFS］高頻刺激；［LTP］長時程增強。a示與VAN組比較，P<0.05；b示與VAD組比較，P<0.05。

組別VAN組VAD組VAS組F值P值NMDAR1 mRNA相對表達量(n=5)1.00±0.15 0.72±0.90a 0.97±0.08b 8.671 0.005 NMDAR1蛋白相對表達量(n=3)1.00±0.04 0.66±0.05a 0.94±0.03b 45.411<0.001 HFS誘導(dǎo)41~45 min的LTP平均值(n=9)166±14 123±7a 170±14b 85.576<0.001

圖3 VAN組、VAD組和VAS組大鼠視皮質(zhì)突觸可塑性的改變 左圖為突觸可塑性關(guān)鍵蛋白NMDAR1的電泳條帶圖（n=3）。右圖為LTP誘發(fā)前后的變化（n=9），用HFS誘發(fā)LTP并記錄，其中HFS誘發(fā)后的標(biāo)準(zhǔn)化fEPSP斜率增加20%以上且持續(xù)至少30 min，提示LTP誘發(fā)成功。

2.4 不同VA水平大鼠視皮質(zhì)RARα和NRXN1表達變化

VAD組大鼠視皮質(zhì)RARα和NRXN1的mRNA表達水平顯著低于VAN組和VAS組（P<0.05）。VAD組RARα、NRXN1α和NRXN1β的蛋白表達水平顯著低于VAN組和VAS組（P<0.05）。ChIP檢測表明RARα在視皮質(zhì)NRXN1基因的啟動子上富集。在VAD組中，RARα轉(zhuǎn)錄因子在NRXN1基因啟動子區(qū)域預(yù)測位點的富集與VAN組和VAS組相比顯著降低（P<0.05），提示RARα轉(zhuǎn)錄因子可能通過與NRXN1基因的啟動子結(jié)合來調(diào)控其轉(zhuǎn)錄活性。見圖4、表4。

圖4 Western blot法檢測各組大鼠視皮質(zhì)RARα、NRXN1α、NRXN1β蛋白表達電泳圖（n=3）

表4 各組大鼠組大鼠RARα和NRXN1相對表達量比較 （±s）

表4 各組大鼠組大鼠RARα和NRXN1相對表達量比較 （±s）

注：［VAN］維生素A正常；［VAD］維生素A缺乏；［VAS］維生素A補充。a示與VAN組比較，P<0.05；b示與VAD組比較，P<0.05。［RARα］視黃酸受體α；［NRXN1］軸突蛋白1；［NRXN1α］軸突蛋白1α；［NRXN1β］軸突蛋白1β。

組別VAN組VAD組VAS組F值P值RARαmRNA(n=5)1.00±0.13 0.57±0.64a 0.99±0.17b 16.851<0.001 RARα蛋白(n=3)1.00±0.10 0.52±0.02a 0.94±0.03b 17.667 0.003 NRXN1 mRNA(n=5)1.00±0.11 0.40±0.10a 0.85±0.19b 23.881<0.001 NRXN1α蛋白(n=3)1.00±0.08 0.59±0.03a 0.92±0.12b 17.126 0.003 NRXN1β蛋白(n=3)1.00±0.07 0.51±0.06a 1.01±0.09b 39.221<0.001 RARα在NRXN1基因啟動子區(qū)域的富集量水平(n=3)8 280 655±1 015 390 5 136 636±900 535a 80 430 975±612 772b 12.439 0.007

3 討論

ASD兒童常共患嚴(yán)重挑食及胃腸道問題，因此易出現(xiàn)營養(yǎng)缺乏癥［21］。研究發(fā)現(xiàn)，在ASD兒童常見的微量營養(yǎng)素中，VAD的檢出率（77.9%）最高［22］，且與ASD部分核心癥狀有關(guān)。動物實驗發(fā)現(xiàn)，生命早期VAD誘導(dǎo)的RA信號下調(diào)可能是ASD的風(fēng)險因素［5］。此外，丙戊酸、三氯生等環(huán)境因素均可通過下調(diào)RA信號通路參與大鼠孤獨癥樣行為的發(fā)生［6，19］。但RA信號對ASD的具體機制還需進一步探討。本研究成功構(gòu)建了孕期開始的持續(xù)VAD大鼠模型，對部分VAD仔鼠生后早期補充VA，其血清VA恢復(fù)到正常水平。行為學(xué)結(jié)果顯示，盡管VAD仔鼠沒有運動活動障礙，但它們表現(xiàn)出明顯的社交障礙和增加的重復(fù)性行為，VA補充能有效改善仔鼠的孤獨癥樣行為，這與既往研究［5］結(jié)果相同。以上提示孕期VAD可誘發(fā)后代的孤獨癥樣行為，孕期VAD可能是ASD的危險因素。

突觸相關(guān)基因NRXN1是ASD的易感基因［8］，且參與NMDA介導(dǎo)的突觸傳遞［23］，調(diào)節(jié)視皮質(zhì)的突觸可塑性［10，15-16］。Kim等［24］發(fā)現(xiàn)ASD患者大腦中NRXN1的表達顯著降低。且NRXN1基因敲除小鼠存在社會交往和認(rèn)知功能受損的表現(xiàn)［25］。近期研究表明，NRXN1通過影響突觸可塑性穩(wěn)態(tài)參與ASD發(fā)?。?-9］。本研究中，VAD組仔鼠視皮質(zhì)NRXN1的mRNA和蛋白表達水平下降，同時NMDAR1的mRNA和蛋白表達水平下調(diào)，LTP降低。生后早期VA補充治療后，VAS組仔鼠的孤獨癥樣行為得到改善，視皮質(zhì)NRXN1、NMDAR1表達水平和LTP水平明顯改善，提示RA通路異?？赏ㄟ^下調(diào)NRXN1表達引起視皮質(zhì)突觸可塑性異常參與大鼠孤獨癥樣行為的形成。

VA的絕大部分作用是通過RA與RARs的結(jié)合進而調(diào)控RA靶基因的轉(zhuǎn)錄表達［3］。RARα信號影響小鼠視皮質(zhì)的突觸穩(wěn)態(tài)可塑性，該信號受損可能與神經(jīng)精神疾病有關(guān)［17］。有研究報道，NRXN與RA信號通路有關(guān)，NRXN的突觸組織者小腦蛋白2直接由RA介導(dǎo)［18］，提示NRXN1可能與RA信號下調(diào)引起的后代孤獨癥樣行為的發(fā)病機制有關(guān)。本研究發(fā)現(xiàn)，與VAN組相比，VAD組仔鼠視皮質(zhì)RARα和NRXN1的表達水平均降低。ChIP檢測結(jié)果顯示，VAD組較VAN組在NRXN1基因啟動子區(qū)RARα的富集減少，提示RARα信號可能調(diào)控NRXN1的轉(zhuǎn)錄。在VAS組中，VA補充可增加RARα和NRXN1的表達，上調(diào)RARα與NRXN1基因啟動子的結(jié)合。以上結(jié)果表明，妊娠期VAD導(dǎo)致RARα表達減少，從而導(dǎo)致RARα與NRXN1的結(jié)合減少，進而影響視皮質(zhì)的突觸可塑性。近期研究認(rèn)為，ASD兒童存在全腦神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)受損，其神經(jīng)環(huán)路的突觸功能異常與ASD密切相關(guān)［10］。從RARα-NRXN1下調(diào)引起視皮質(zhì)可塑性與孤獨癥行為變化的相關(guān)性使我們推測這種變化可能參與ASD的神經(jīng)環(huán)路受損，也可能參與VAD仔鼠的孤獨癥樣行為形成。然而本實驗未能有條件檢測視皮質(zhì)的行為學(xué)指標(biāo)，且僅在體內(nèi)利用ChIP檢測了RARα可以與NRXN1有結(jié)合，尚未在NRXN1基因啟動子上尋找具體的結(jié)合位點，這將成為我們下一步的研究重點。

綜上所述，RARα可結(jié)合在NRXN1基因啟動子上調(diào)控其mRNA表達水平，進而影響大鼠視皮質(zhì)突觸可塑性參與VAD大鼠孤獨癥樣行為的形成。