譚 菲

（徐州醫(yī)科大學附屬醫(yī)院 江蘇徐州 221000）

下呼吸道感染在呼吸系統(tǒng)中屬于常見病變，疾病類型主要體現(xiàn)在肺炎、氣管炎、支氣管炎等方面。發(fā)病原因主要是指患者下呼吸道入侵病原微生物，臨床主要以體溫升高、呼吸異常、咳痰、胸部疼痛等癥狀表現(xiàn)為主。若病情不能得到及時的處理，會導致患者病情發(fā)展，危害患者的身心健康，所以當前需要對下呼吸道感染患者進行及時診治，從而有效控制患者的病情發(fā)展。以往臨床在病原學診斷的過程中，主要采用微生物培養(yǎng)、血清學檢查方法，但是采用該方法在病原學方面的診斷效果有限，所以當前提倡選擇二代測序技術，在標本中對基因片段進行高通量測序，從而精準獲得病原微生物的遺傳信息，提高診斷準確率以及敏感度[1]。本文采用對比研究實驗，將常規(guī)病原體檢測方法作為對照，探究二代測序技術應用在下呼吸道感染患者中的臨床效果。

1 資料與方法

1.1 一般資料

本文研究時間開展于2020 年7 月～2021 年7月，樣本數(shù)據(jù)為時間段內(nèi)收錄的116 例下呼吸道感染患者，將其隨機分為實驗組和對照組，均為58 例。

對照組男性30 例，女性28 例，年齡39 歲～70歲，平均（55.36±4.35）歲。

實驗組男性31 例，女性27 例，年齡38 歲-70歲，平均（55.24±4.75）歲。

兩組一般資料比較差異不明顯，P＞0.05。

納入標準：入選患者經(jīng)體格檢查、血常規(guī)檢查、病原學檢查進行疾病確診，患者主動于知情同意書簽字。

排除標準：上呼吸道感染者；其它部位感染者；有重大器質(zhì)性病變者。

1.2 方法

對照組患者選用免疫熒光法、酶聯(lián)免疫吸附法、病毒血清學檢查法等常規(guī)病原學檢查方案來分析患者感染的病毒類型。

實驗組所選用的是二代測序技術，檢測的過程中應該提前告知患者主動簽署二代測序技術（NGS）的知情同意書，將收集的標本在4℃環(huán)境中進行冷藏處理，在24 小時之內(nèi)將標本送往測序中心進行檢測[2]。在開展二代測序診斷的過程中應該注意標本、取樣的整個過程中樹立無菌操作理念，并且要制定規(guī)范性的質(zhì)量控制標準，從而有效提高診斷精準度。收集兩組患者的資料數(shù)據(jù)，回顧性研究患者基礎病變、治療措施、癥狀體征、預后水平、mNGS 檢測結果、疾病轉歸等資料數(shù)據(jù)。與此同時，分析患者是否為混合感染，混合感染為患者同時被檢測出多種細菌、真菌、病毒等感染。

1.3 觀察指標

（1）病原微生物檢出種類對比。（2）不同病原微生物檢出率比較。

1.4 統(tǒng)計學方法

SPSS.23 統(tǒng)計學軟件開展本文資料處理，觀察指標在臨床上用計數(shù)資料表示，以卡方檢驗的形式開展，結果表現(xiàn)為%，組間數(shù)據(jù)是否存在統(tǒng)計學意義用P 值進行判定，P＜0.05 證明組間存在明顯的差異。

2 結果

2.1 兩組病原微生物檢出種類及總陽性率對比

NGS 檢測病原微生物檢出陽性率顯著高于對照組（P＜0.05）。見表1。

表1 兩組病原微生物檢出種類及總陽性率對比（n/%）

2.2 兩組對不同病原微生物的檢出率對比

NGS 檢測方法在病原、細菌、真菌等方面的檢出率明顯優(yōu)于對照組（P＜0.05）。見表2。

表2 兩組對不同病原微生物的檢出率對比（n/%）

3 討論

下呼吸道感染在臨床具有較高的發(fā)病率，且發(fā)病群體廣泛。依據(jù)感染的病原菌，可以將下呼吸道感染分為細菌性、病毒性兩種類型。支氣管炎、支氣管擴張屬于常見病變，下呼吸道感染不僅會危害患者的身心健康，同時還具有一定的傳染性，如可經(jīng)飛沫、密切接觸等進行疾病傳播。所以在患者出現(xiàn)發(fā)熱、咳嗽、呼吸異常、胸部疼痛等癥狀表現(xiàn)時，需要立即開展疾病診斷，病情確診后，依據(jù)患者的病毒感染情況，合理開展治療方案的制定[3]。

病原學檢查是確診患者病情的主要方法，但是傳統(tǒng)微生物檢測所耗費的時間較長，整體診斷陽性率低，且在診斷前期可能會受到抗生素的感染。然而核酸檢測、抗體與抗原檢測所針對的病原體具有單一性，需要醫(yī)生借助自身的經(jīng)驗分析患者感染病原菌種類，之后采用相應檢測方案予以論證處理。臨床為了突破常規(guī)病原學檢查的局限性，提倡采取二代測序技術（NGS），二代測序技術在臨床也被稱之為高通量策略，可同時對幾十條、幾百條的DNA 分子進行處理，可以有效避免檢測細菌、病毒、真菌、寄生蟲時出現(xiàn)偏移的情況[4]。二代測序技術（NGS）具有快速性、覆蓋廣泛性的特點，且不容易受到醫(yī)生主觀意識以及抗生素使用情況等外界因素的干擾，所以在臨床應用具有廣泛性。

分子生物學研究領域中一直將DNA 測序技術作為主要的技術手段，第二代測序技術是在第一代測序基礎上發(fā)展。該測序技術的應用可以有效將測序成本降低，實現(xiàn)測序效率的提升，相較于第一代DNA 測序技術，具有高通量性、高安全性。將第二代測序技術應用在下呼吸道感染診斷中，可以將一些難以確定病原體的病原體診斷出來，于病毒、細菌、真菌等病原體檢測方面均具有良好的效果。雖然NGS 整體的檢測陽性率較高，但是受到病原體載量有限、標本質(zhì)量差等因素的影響，NGS 檢測存在假陰性。所以若發(fā)現(xiàn)患者所呈現(xiàn)的癥狀表現(xiàn)與下呼吸道感染高度相似，然而檢測結果為陰性，這時就可以重復開展NGS 檢測[5]。第二代測序技術（NGS）在下呼吸道感染中可以快速將病原體識別出來，在難治性支原體感染治療方案制定中，NGS 檢測技術的應用也可為其提供理論方向以及相關支持。難治性支原體感染患者的C 反應蛋白數(shù)值會顯著升高，但是臨床難以確定C 反應蛋白升高的原因，免疫反應、感染都可導致C 反應蛋白水平升高，在對支氣管肺泡灌洗液進行檢測時，采用NGS 檢測法可發(fā)現(xiàn)部分患者感染支原體，且這一結果與培養(yǎng)結果具有一致性。這說明患者C 反應蛋白升高與免疫反應過強有關，真菌感染會危害患者的生命安全，而通過NGS 檢測可以將患者真菌感染狀況檢測出來，采用針對性的抗真菌治療方案來改善患者的疾病癥狀[6]。

臨床針對疑似下呼吸道感染患者進行早期的病原學診斷，對于治療方案的選擇具有指導性作用，尤其是診斷伴發(fā)癌癥病變以及免疫功能障礙的患者，出現(xiàn)下呼吸道感染的感率更高，且容易伴發(fā)細菌、病毒、真菌等混合型感染，所以依據(jù)致病菌類型進行抗感染治療至關重要[7]。本文在對下呼吸道感染患者進行診斷時，開展傳統(tǒng)病原學診斷以及二代測序技術的對比研究實驗，最終研究結果中，采用二代測序技術的實驗組，病原微生物檢出種類、總陽性率、不同病原微生物檢出率的數(shù)值更高，組間存在明顯的統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。上述研究結論的出現(xiàn)，主要是因為臨床上一些病原微生物較為特殊，其與非感染性疾病相似，鑒別難度大，僅采用傳統(tǒng)的病原體檢測方法難以進行準確診斷，在混合型感染方面的檢出率低，無法有效消滅患者機體感染的病原菌，延誤患者的疾病治療，使得患者病情發(fā)展，降低患者預后水平，且整體而言傳統(tǒng)檢測方法的效能差，可能會受到標本種類、患者疾病種類、抗生素治療等多種因素影響。然而二代測序技術的整體通量高，病原體可進行大范圍覆蓋，在病原微生物檢測時的范圍廣，且整體耗時短，可以有效提高診斷陽性率以及靈敏度。上呼吸道感染與下呼吸道感染相比癥狀較為相似，所以臨床需要將下呼吸道感染與上呼吸道感染鑒別開來。

綜上所述，在對上呼吸道感染診斷過程中，采用二代測序技術（NGS）在病原微生物檢測方面的陽性率明顯在傳統(tǒng)檢測方法之上，整體檢測陽性率以及病毒、真菌、細菌的診斷準確率顯著高于對照組，表明二代測序技術（NGS）在下呼吸道感染診治中的應用效果明顯。雖然此次研究的檢驗結果與預期相符，但是樣本量較少，且選擇的標本主要來源于肺泡灌洗液，很少選擇血液、痰液、肺組織等作為標本，這就導致最終的診斷結果出現(xiàn)偏倚情況，所以期待后續(xù)開展大樣本、長時間的研究。