張曦文 欒美琪 席玉棚 鄭紅剛 花寶金

(1 中國中醫(yī)科學(xué)院廣安門醫(yī)院，北京，100053； 2 黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，哈爾濱，150040)

肺癌是臨床最常見的腫瘤，在我國肺癌患病率和死亡率居所有惡性腫瘤的首位[1]。脂質(zhì)代謝異常與腫瘤的關(guān)系是近年興起的研究熱點與前沿科學(xué)問題。脂代謝異常能夠誘發(fā)惡性腫瘤，并且可以通過抑制抗腫瘤免疫，調(diào)節(jié)腫瘤微環(huán)境(Tumor Microenvironment，TME)形成腫瘤免疫抑制微環(huán)境，進而促進腫瘤細胞增殖、侵襲轉(zhuǎn)移，促進腫瘤的進展[2]。因此，重塑腫瘤微環(huán)境中免疫細胞的功能是防治腫瘤進展和轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵。

樹突狀細胞(Dendritic Cells，DCs)是機體功能最強的專職抗原遞呈細胞(Antigen Presenting Cells，APC)，可以通過細胞間接觸和分泌細胞因子等方式提供免疫調(diào)節(jié)信號，高效地攝取、加工處理和遞呈抗原，未成熟DCs具有較強的遷移能力，成熟DCs表現(xiàn)為表面共刺激分子的過表達，調(diào)節(jié)細胞因子分泌，能有效激活初始T細胞，增加Th細胞(輔助性T細胞)和CTL(細胞毒性T淋巴細胞)亞群、降低調(diào)節(jié)性T細胞(Tregs)亞群表達，是機體內(nèi)常見的免疫細胞。腫瘤相關(guān)樹突狀細胞Tumor-associated DCs，TDCs)是指在惡性腫瘤微環(huán)境中，表現(xiàn)出表型和功能異質(zhì)性的樹突細胞，TDCs盡管能攝取抗原，但其抗原呈遞及T細胞活化能力受限，具有較低的免疫監(jiān)視和防御功能[3-5]。越來越多的證據(jù)表明，腫瘤微環(huán)境中的DCs不僅阻礙抗腫瘤免疫，而且是多種腫瘤發(fā)生發(fā)展的積極促進劑。TDCs內(nèi)氧化脂質(zhì)的異常積累，導(dǎo)致DCs的功能障礙，脂質(zhì)異常堆積的TDCs在處理加工呈遞抗原方面具有很大的缺陷，不能有效地激活T細胞抗腫瘤免疫作用，促進腫瘤的發(fā)生發(fā)展[6]。

“脂濁”既為病理產(chǎn)物也是致病因素，多歸屬于中醫(yī)學(xué)“痰濁”的病理范疇。全國名中醫(yī)樸炳奎教授依據(jù)多年的臨床經(jīng)驗并且結(jié)合現(xiàn)代醫(yī)學(xué)藥物篩選結(jié)果研制了具有確切肺癌療效的肺瘤平膏。肺瘤平膏全方由四類藥物組成，包括扶正藥物、解毒藥物、化痰藥物和活血藥物，具有益氣養(yǎng)陰、化痰散結(jié)、解毒活血的功效。肺瘤平膏中扶正藥物可通過“扶正”達到“調(diào)氣”之功，恢復(fù)和維持機體生理之氣的正常輸布，使其陰陽平和，機體正氣充足；化痰活血、解毒散結(jié)之品共奏“解毒”之功，使痰凝、血瘀、癌毒之邪消減，驅(qū)邪外出。

本實驗將體外模擬腫瘤微環(huán)境，構(gòu)建TDCs模型，探究肺瘤平膏改善脂質(zhì)堆積，逆轉(zhuǎn)TDCs功能的效應(yīng)機制，探析中醫(yī)“調(diào)氣解毒”與改善肺癌免疫微環(huán)境的關(guān)聯(lián)性，豐富并充實中醫(yī)腫瘤理論體系。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 細胞與動物 Lewis肺癌細胞株(購自國家實驗細胞資源共享平臺北京總部)；4周齡的C57BL/6雄性小鼠，體質(zhì)量(14±1)g，購自于北京維通利華實驗動物技術(shù)有限公司，飼養(yǎng)于中國中醫(yī)科學(xué)院廣安門醫(yī)院清潔級動物實驗中心[許可證號：SYXK(京)2005-0001]。

1.1.2 藥物 肺瘤平膏(中國中醫(yī)科學(xué)院廣安門醫(yī)院院內(nèi)制劑室，批號：20171211)。

1.1.3 試劑與儀器 RPMI 1640(Hyclone公司，美國，貨號：SV30809.01)；Fetal Bovine Serum(胎牛血清)(Gibco公司，美國，貨號：10099141C)；0.25%Trypsin+0.02%EDTA胰酶消化液(杭州吉諾生物醫(yī)藥技術(shù)有限公司，貨號：GNM-25200)；二甲基亞砜(Sigma公司，美國，貨號：DMSO D2650)；青鏈霉素雙抗(Hyclone公司，美國，貨號：SV30010)；磷酸鹽緩沖液(Phosphate-Buffered Saline,PBS)(Hyclone公司，美國，貨號：SH30256.01B)；重組小鼠粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子蛋白(Recombinant Mouse GM-CSF Protein)(R&D公司，美國，貨號：415-ML-020)；重組小鼠白介素-4蛋白(Recombinant Mouse IL-4 Protein)(R&D公司，美國，貨號：404-ML-025)；10X濃縮裂解緩沖液Lysing Buffer 10X Concentrate 100 mL(BD公司，美國，貨號：555899)中性脂滴熒光探針BODIPY 493/503(Thermo Fisher公司，美國，貨號：D3922)；流式細胞技術(shù)使用抗體：APC Hamster Anti-Mouse CD11c 0.1 mg(BD公司，美國，批號：550261)；APC Hamster Anti-Mouse CD11c 0.1 mg(BD公司，美國，貨號：550261)；PerCP-CyTM5.5 Rat Anti-Mouse I-A/I-E 50 μg(BD公司，美國，批號：562363)；PE Rat Anti-Mouse CD86 0.2 mg(BD公司，美國，批號：553692，)；FITC(Fluorescein isothiocyanate)Hamster Anti-Mouse CD80 0.1 mg(BD公司，美國，批號：561954)；APC Hamster IgG1，λ1 Isotype Control 0.1 mg(BD公司，美國，批號：553956，)；PerCP-CyTM5.5 Rat IgG2b，κ Isotype Control 0.1 mg(BD公司，美國，批號：550764)；PE Rat IgG2a，κ Isotype Control 0.1 mg(BD公司，美國，批號：553930)；FITC Hamster IgG2 κ Isotype Control 0.25 mg(BD公司，美國，批號：550056)；PerCP Armenian Hamster Anti-Mouse CD3e(BD公司，美國，批號：553067，)；FITC Rat Anti-Mouse CD4(BD公司，美國，批號：553046)；PE Rat Anti-Mouse CD8a(BD公司，美國，批號：553032)；APC Rat Anti-Mouse CD25(BD公司，美國，批號：557192)；PE Rat anti-Mouse Foxp3(BD公司，美國，批號：563101)；PE Rat IgG2a，κ Isotype Control(BD公司，美國，批號：553930)；轉(zhuǎn)錄因子緩沖液Transcription Factor Buffer Set(BD公司，美國，貨號：562574)；多因子檢測試劑盒(eBioscience公司，美國，批號：PPX-05；LOT.222242-000，)；TGF-β1檢測試劑盒(eBioscience公司，美國，批號：BMS608-4；LOT.218843-005)；動物脾臟組織淋巴細胞分離液(天津市灝洋生物制品科技有限責(zé)任公司，批號：LTS1092PK)；FACS Calibur流式細胞儀FACS Calibur Flow Cytometer System(BD公司，美國，型號：FACS Calibur)；多功能酶標儀(BioTek公司，美國，型號：Synergy HT)；Luminex 200多因子檢測儀(Luminex公司，美國，型號：Luminex200)。

1.2 方法

1.2.1 分組與模型制備

1.2.1.1 肺瘤平膏含藥血清配置 成人按照體質(zhì)量60 kg計算，肺瘤平膏正常使用劑量為20 g/次，2次/d。根據(jù)成人與大鼠的換算系數(shù)為6.3，則大鼠等效劑量20 g/60 kg×6.3=2.1 g/kg，中劑量為等效劑量的2倍，大鼠中劑量為4.2 g/kg。大鼠體質(zhì)量按照0.20 kg計算，則每次用藥劑量為4.2 g/kg×0.20 kg=0.84 g，按照單次灌胃體積為2 mL計算，則肺瘤平膏濃度需調(diào)整為0.42 g/mL，空白組(NRS)采取生理鹽水0.2 mL灌胃。將20只Wistar大鼠，隨機分為肺瘤平膏(FLP)組和空白組，每組10只。適應(yīng)性飼養(yǎng)24 h后，2次/d進行灌胃，連續(xù)給藥3 d，第3天晚上禁食不禁水，第4天晨起給藥1次，1 h后，麻醉，腹主動脈取血，靜置離心后完成肺瘤平膏組及空白組含藥血清配置。

1.2.1.2 TDCs的分離、誘導(dǎo)培養(yǎng)及鑒定 取4周齡雄性C57BL/6小鼠脫頸處死，無菌條件下取出股骨和脛骨，進行骨髓腔沖洗，將骨髓細胞沖入15 mL離心管中，1 300 r/min，離心半徑30 cm，離心5 min后充分裂解紅細胞，加入細胞因子的完全培養(yǎng)基重懸培養(yǎng)(完全培養(yǎng)基配比：RPMI1640培養(yǎng)液、10%FBS、1%青鏈霉素雙抗、Recombinant Mouse GM-CSF終濃度40 ng/mL，Recombinant Mouse IL-4終濃度20 ng/mL)，每2天半量換液至第6天，收集并流式細胞儀檢測細胞分子表面標記CD11c表達，鑒定獲得小鼠骨髓源DCs，20%Lewis肺癌細胞培養(yǎng)上清，進行誘導(dǎo)培養(yǎng)，即獲得TDCs。

1.2.1.3 構(gòu)建TDCs與T細胞共培養(yǎng)模型 制備BALB/c小鼠脾臟單細胞懸液，并運用淋巴細胞液分離液進行T細胞分離，與TDCs共培養(yǎng)72 h后獲得TDCs-T細胞共培養(yǎng)模型。

1.2.2 干預(yù)方法 本實驗共分2組：空白血清對照組(Control對照組)：建立TDCs培養(yǎng)體系后，按10%的濃度加入空白血清；肺瘤平膏含藥血清組(FLP組)：建立TDCs培養(yǎng)體系后，按10%的濃度加入肺瘤平膏含藥血清；以上分組以106細胞培養(yǎng)于細胞培養(yǎng)十二孔板中，5%CO237 ℃細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h，觀察肺瘤平膏含藥血清對腫瘤相關(guān)樹突狀表型影響、白細胞介素-12p70、γ干擾素的分泌的影響。通過FLP組及對照組干預(yù)后的TDCs與T細胞共培養(yǎng)，觀察肺瘤平膏含藥血清對淋巴細胞增殖及T細胞亞群表達的影響。

1.2.3 檢測指標與方法

1.2.3.1 肺瘤平膏含藥血清對體外誘導(dǎo)TDCs中脂質(zhì)的影響 小鼠骨髓源DCs的分離、培養(yǎng)，建立體外TDCs培養(yǎng)模型，肺瘤平膏含藥血清及空白血清干預(yù)培養(yǎng)，通過BODIPY 493/503染色后流式細胞儀檢測，使用Flow Jo 10.4軟件進行流式數(shù)據(jù)分析。

1.2.3.2 肺瘤平膏含藥血清對體外誘導(dǎo)腫瘤相關(guān)樹突狀表型的影響 小鼠骨髓源DCs的分離、培養(yǎng)，建立體外TDCs培養(yǎng)模型，肺瘤平膏含藥血清及空白血清干預(yù)培養(yǎng)，通過流式細胞儀檢測肺瘤平膏含藥血清對TDCs細胞表面分子CD11c、主要組織相容性復(fù)合體(Major Histocompatibility Complex,MHC)-Ⅱ、CD80、CD86的表達，使用軟件Flow Jo 10.4對TDCs表型進行分析。

1.2.3.3 肺瘤平膏含藥血清調(diào)節(jié)TDCs細胞因子白細胞介素-12p70、γ干擾素的分泌(基于Luminex技術(shù)定量檢測TDCs細胞因子白細胞介素-12p70、γ干擾素的分泌) 收集上述實驗培養(yǎng)上清，通過多因子分析儀(Luminex 200)檢測白細胞介素-12p70、γ干擾素的分泌并進行分析。

1.2.3.4 肺瘤平膏含藥血清調(diào)節(jié)TDCs對混合淋巴細胞增殖的影響(CCK8檢測混合淋巴細胞增殖情況) 分離、培養(yǎng)小鼠骨髓源DCs，建立體外TDCs培養(yǎng)模型，肺瘤平膏含藥血清及空白血清干預(yù)培養(yǎng)；取脫頸處死BALB/c小鼠，分離獲得小鼠脾淋巴細胞；將TDCs與淋巴細胞按照1∶10共培養(yǎng)72 h，CCK8試劑盒檢測混合細胞增殖。

1.2.3.5 肺瘤平膏含藥血清調(diào)節(jié)TDCs影響Th細胞、CTL細胞和Tregs細胞表型的影響 分離、培養(yǎng)小鼠骨髓源DCs，建立體外腫瘤相關(guān)DCs培養(yǎng)模型，肺瘤平膏含藥血清及空白血清干預(yù)培養(yǎng)；取脫頸處死BALB/c小鼠，分離獲得小鼠脾淋巴細胞；將TDCs與淋巴細胞按照1∶10共培養(yǎng)72 h，流式細胞儀檢測CD3e、CD4、CD8a、CD25、叉頭框蛋白3(Forkhead box protein 3，F(xiàn)oxp3)細胞分子標志物表達。

2 結(jié)果

2.1 流式細胞儀檢測小鼠骨髓源DCs表面分子的表達 為觀察小鼠骨髓源DCs表面分子CD11c表達情況，應(yīng)用流式細胞術(shù)對獲得到細胞懸液進行CD11c APC表面標記染色，單染CD11c同型抗體流式圈門后，CD11c陽性比例為76.5%。因此，小鼠骨髓源單核細胞經(jīng)體外細胞因子粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子(Granulocyte-macrophage Colony Stimulating Factor，GM-CSF)和白細胞介素-4誘導(dǎo)培養(yǎng)后，得到CD11c+DCs的純度為76.5%，可用于接下來的實驗研究。見圖1。

圖1 流式細胞法檢測小鼠骨髓來源單核細胞誘導(dǎo)DCs的純度

2.2 肺瘤平膏含藥血清對TDCs脂質(zhì)的影響 結(jié)果表明，肺瘤平膏含藥血清作用于TDCs，脂質(zhì)含量小于空白血清對照組，F(xiàn)LP組>對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。見表1、圖2。

表1 FLP含藥血清對TDCs脂質(zhì)含量表達的作用(平均熒光強度,

圖2 FLP含藥血清對TDCs脂質(zhì)含量表達的作用

2.3 肺瘤平膏含藥血清對TDCs表型的影響 結(jié)果表明：肺瘤平膏含藥血清干預(yù)后，MCH-Ⅱ、CD80、CD86表達水平均有一定程度的提高，其中CD80、CD86表達水平明顯高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，MCH-Ⅱ細胞分子的差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表2、圖3～6。

表2 肺瘤平膏含藥血清對體外誘導(dǎo)TDCs表型的影響

圖3 肺瘤平膏含藥血清對體外誘導(dǎo)TDCs MCH-Ⅱ表型的影響

圖4 肺瘤平膏含藥血清對體外誘導(dǎo)TDCs CD80表型的影響

圖5 肺瘤平膏含藥血清對體外誘導(dǎo)TDCs CD86表型的影響

圖6 肺瘤平膏含藥血清對TDCs表型的影響

2.4 肺瘤平膏含藥血清調(diào)節(jié)TDCs細胞因子白細胞介素-12p70、γ干擾素的分泌 結(jié)果表明：肺瘤平膏含藥血清干預(yù)后，白細胞介素-12p70、γ干擾素具有一定程度的提高(FLP組>對照組)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表3、圖7。

表3 FLP含藥血清對TDCs分泌白細胞介素-12p70、γ干擾素表達的影響

圖7 FLP含藥血清對TDCs分泌白細胞介素-12p70、γ干擾素表達的影響

2.5 肺瘤平膏含藥血清對TDCs調(diào)節(jié)混合淋巴細胞增殖和T細胞亞群的影響

2.5.1 肺瘤平膏含藥血清對混合淋巴細胞反應(yīng)中細胞增殖的影響 結(jié)果顯示，肺瘤平膏含藥血清能夠一定程度地影響細胞的CCK8 OD值結(jié)果，說明肺瘤平膏對能夠一定程度地提高混合細胞的增殖能力。結(jié)果表明，肺瘤平膏含藥血清刺激混合淋巴細胞的增殖能力較空白血清組較強。見圖8。

圖8 肺瘤平膏對混合淋巴細胞培養(yǎng)細胞增殖的影響

2.5.2 肺瘤平膏含藥血清調(diào)節(jié)TDCs影響Th細胞和CTL細胞亞群 結(jié)果表明，淋巴細胞培養(yǎng)后的混合細胞中后，與空白血清組比較，肺瘤平膏含藥血清干預(yù)可以明顯提高T細胞中CD4+、CD8+表達比例，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。FLP含藥血清可以提高T細胞中Th細胞和CTL細胞亞群的分化。見表4、圖9～10。

表4 FLP含藥血清調(diào)節(jié)TDCs對CD4+、CD8+T細胞表達的影響

圖9 FLP含藥血清調(diào)節(jié)TDCs對CD4+、CD8+T細胞表達的影響

圖10 FLP含藥血清調(diào)節(jié)TDCs對CD4+、CD8+T細胞表達的影響

2.5.3 肺瘤平膏含藥血清作用于TDCs影響Tregs細胞表型的表達 結(jié)果表明：肺瘤平膏含藥血清干預(yù)后，Tregs細胞表達百分比具有一定程度的下降(FLP組<對照組)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表5、圖11～12。

表5 FLP含藥血清調(diào)節(jié)TDCs對Tregs表達的影響

圖11 FLP含藥血清調(diào)節(jié)TDCs對Tregs表達的影響

圖12 FLP含藥血清調(diào)節(jié)TDCs對Tregs表達的影響

3 討論

肺癌屬于中醫(yī)學(xué)癌病范疇，但并沒有具體的病名，根據(jù)其臨床的具體表現(xiàn)，可以將肺癌歸屬于“肺積”“息賁”“咳嗽”等范疇?！峨y經(jīng)·論五臟積病》記載：“肺之積，名日息賁，在右脅下，覆大如杯，久不已，令人灑淅寒熱，喘咳，發(fā)肺壅?！薄毒霸廊珪ぬ摀p》篇中對于肺癌的相似論述，曰：“勞嗽，聲啞，聲不能出或喘息氣促者，此肺臟敗也，必死?！狈伟┑陌l(fā)病基礎(chǔ)為“正虛氣滯，邪毒內(nèi)戀”，氣機升降失調(diào)、正氣虛損導(dǎo)致痰凝、血瘀內(nèi)生，釀生癌毒是肺癌發(fā)生及進展的關(guān)鍵病機，可認為“調(diào)氣解毒”是肺癌的防治準則。

“全國名中醫(yī)”樸炳奎教授，根據(jù)多年臨床經(jīng)驗，結(jié)合現(xiàn)代藥理學(xué)研究結(jié)果，研制出肺癌治療的有效方劑肺瘤平膏，全方選用益氣養(yǎng)陰藥物：黃芪、西洋參、沙參、麥冬等；清熱解毒藥物：拳參、敗醬草、白花蛇舌草、仙鶴草等；化痰活血藥物：桔梗、川貝母、杏仁、桃仁等，共奏調(diào)氣解毒、標本兼治之功。

腫瘤微環(huán)境通過多種作用機制，形成機體免疫系統(tǒng)抑制網(wǎng)絡(luò)，導(dǎo)致多種機體免疫細胞功能障礙，抗腫瘤免疫能力下降，形成復(fù)雜的腫瘤免疫逃逸。DCs作為機體最重要的APC，在抗腫瘤免疫中具有重要的調(diào)節(jié)作用。腫瘤免疫抑制微環(huán)境也通過多種機制抑制DCs的分化和活化成熟，抑制機體抗腫瘤免疫應(yīng)答的啟動，使腫瘤局部募集的DCs表現(xiàn)為異常分化的未成熟表型，細胞呈遞腫瘤抗原的能力減弱，降低免疫監(jiān)視和防御功能，促進腫瘤細胞的生長和轉(zhuǎn)移[7]。

近年來研究發(fā)現(xiàn)，TDCs內(nèi)脂質(zhì)的異常堆積也是影響TDCs的功能的關(guān)鍵因素。隨著腫瘤相關(guān)刺激的暴露，細胞內(nèi)脂肪在DCs中積聚[8]。研究報道稱，氧化脂質(zhì)的積累，特別是三酰甘油的積累，會引起DCs的功能障礙，縮短細胞的壽命[9-11]。研究顯示，未成熟及功能受到了系統(tǒng)性地干擾的TDCs，具體表現(xiàn)為細胞表面共刺激分子表達量的下降、白細胞介素-12等細胞因子分泌減少、細胞吞噬抗原能力減弱、T細胞提呈功能下降等[12-16]。

本研究通過對體外模擬培養(yǎng)的TDCs中的脂質(zhì)進行流式檢測，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，肺瘤平膏含藥血清作用后的TDCs，脂質(zhì)含量小于空白血清對照組(FLP組>對照組)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)，證明肺瘤平膏能夠改善DCs內(nèi)的脂質(zhì)積累，對DCs的功能產(chǎn)生正向調(diào)控。DCs的表面共刺激分子，MHC-Ⅱ類分子在免疫應(yīng)答過程中表達，被看成是DCs抗原遞呈能力的標志。CD80(B7-1)、CD86(B7-2)表達在成熟的DCs細胞表面，與表達在T淋巴細胞上的配體CD28、CTLA-4結(jié)合后提供協(xié)同信號，導(dǎo)致T淋巴細胞活化。因此，本實驗通過流式驗證DCs表面分子MHC-Ⅱ、CD80、CD86的表達，評估肺瘤平膏含藥血清作用后的TDCs的抗原呈遞能力。本實驗研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，肺瘤平膏含藥血清干預(yù)后，MCH-Ⅱ、CD80、CD86表達水平均有一定程度的提高，其中CD80、CD86表達水平明顯高于空白血清組(P<0.05)，證明肺瘤平膏能夠有效地促進TDCs細胞的成熟，改善細胞的抗原呈遞能力，促進T細胞激活。

DCs能夠激活淋巴細胞的增殖和活化[17]。本研究采用負載抗原的TDCs與淋巴細胞共培養(yǎng)的方式，研究肺瘤平膏調(diào)控TDCs對混合淋巴細胞增殖和T細胞亞群活化的影響。結(jié)果顯示：共培養(yǎng)細胞后，肺瘤平膏含藥血清作用后的混合細胞增殖能力較空白血清增強。通過研究肺瘤平膏對T細胞亞群的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與空白血清組比較，肺瘤平膏含藥血清干預(yù)可以明顯提高T細胞中CD4+、CD8+表達比例(P<0.05)，降低Tregs的表達。由此可知，F(xiàn)LP含藥血清可以促進Th細胞和CTL亞群、抑制Tregs亞群的活化。

研究發(fā)現(xiàn)，高水平的細胞因子白細胞介素-12、γ干擾素可以有效地激活T細胞增殖活化[18]，腫瘤免疫抑制微環(huán)境對TDCs的細胞因子分泌具有負調(diào)節(jié)作用。本研究發(fā)現(xiàn)，肺瘤平膏含藥血清干預(yù)后，白細胞介素-12p70、γ干擾素具有一定程度的提高(FLP組>對照組)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，可以印證對混合淋巴細胞增殖活化作用的改善或是與促進白細胞介素-12p70、γ干擾素分泌相關(guān)。

綜上所述，在腫瘤免疫微環(huán)境中，肺瘤平膏含藥血清能夠有效地降低TDCs中的脂質(zhì)堆積，促進TDCs的成熟和抗原呈遞能力，促進白細胞介素-12p70、γ干擾素的分泌，改善激活混合淋巴細胞增殖和T細胞亞群活化功能，增強腫瘤免疫功能。揭示了中醫(yī)藥“調(diào)氣解毒”代表方劑肺瘤平膏具有改善肺癌免疫抑制微環(huán)境的作用，進而發(fā)揮中醫(yī)藥腫瘤免疫調(diào)節(jié)作用，抑制腫瘤的發(fā)生發(fā)展，豐富并充實中醫(yī)藥腫瘤防治理論。