陳 娟 孫翠珍 李 蕓 周 薇 申 利*

1.河南省新鄉(xiāng)市輝縣市人民醫(yī)院(453600)；2.華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬梨園醫(yī)院

妊娠期肝內(nèi)膽汁淤積癥(ICP)是一種妊娠并發(fā)癥，病因不完全明確，免疫功能失常、遺傳易感性、內(nèi)分泌激素失調(diào)、藥物、環(huán)境均與其發(fā)作存在一定聯(lián)系[1]。研究表明，ICP的發(fā)展和肝功能異常、膽汁酸水平上升有密切聯(lián)系[2]。脂肪細(xì)胞型脂肪酸結(jié)合蛋白(AFABP)在脂肪酸的運(yùn)轉(zhuǎn)、攝取中均發(fā)揮作用，AFABP水平變化和非酒精性脂肪性肝病的發(fā)生有聯(lián)系[3]。沉默信息調(diào)節(jié)因子1(sirt1)有調(diào)節(jié)T淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞的作用，同時(shí)可參與膽汁酸的合成并有調(diào)節(jié)作用，在膽汁酸肝循環(huán)中發(fā)揮重要作用[4]?？扇苄匝芗?xì)胞黏附因子-1(sVCAM-1)是免疫球蛋白超家族的一員。目前關(guān)于AFABP、sirt1、sVCAM-1在ICP中表達(dá)研究較少，因此本文探究其在ICP中的表達(dá)及其可能影響，為該疾病的早期診治提供參考。

1 對象與方法

1.1 研究對象

選擇2020年1月-2021年1月本院診治的ICP患者60例作為ICP組，健康孕婦50例作為健康組。納入標(biāo)準(zhǔn)：ICP患者符合《妊娠期肝內(nèi)膽汁淤積癥診療指南(2015)》診斷標(biāo)準(zhǔn)[5]；空腹血清總膽汁酸水平≥10μmol/L；存在皮膚瘙癢、黃疸等癥狀；病例資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并妊娠期心臟病、高血壓；②合并膽石癥及肝功能異常；③合并全身感染；④有免疫系統(tǒng)疾病，精神類疾病。兩組研究對象均已知情并同意本次研究，且該研究通過院倫理委員會審核批準(zhǔn)。

1.2 檢測方法

于孕婦入院當(dāng)天抽取靜脈血分離血清，酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法檢測AFABP、sVCAM-1水平，試劑盒由上海臻科生物科技有限公司生產(chǎn)；采用實(shí)時(shí)熒光定量(PCR)法對sirt1進(jìn)行檢測，Trizol法提取血清RNA，使用Takara逆轉(zhuǎn)錄試劑盒2μg完整無雜質(zhì)的RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，采用Primer5.0軟件設(shè)計(jì)引物序列，啟動(dòng)PCR儀，反應(yīng)體系：0.4μl上下游引物、1μlcDNA模板、10μlSYBGreen，加蒸餾水至20μl。反應(yīng)條件：95℃預(yù)變性1s、95℃5s、60℃31s，共進(jìn)行40個(gè)循環(huán)，采用2-ΔΔCt方法計(jì)算sirt1表達(dá)量。sirt1上游引物序列：5’-TACCCCATGAAGTGCCTCAA-3’，下游引物序列：5’-CCTTTTGTGTTCGTGGAGGT-3’。

1.3 嚴(yán)重程度評價(jià)

根據(jù)《妊娠期肝內(nèi)膽汁淤積癥診療指南(2015)》[5]對ICP癥狀嚴(yán)重程度進(jìn)行評價(jià)。輕度：血清膽汁酸≥10～40μmol/L，臨床癥狀表現(xiàn)為皮膚瘙癢；重度，血清膽汁酸≥40μmol/L，瘙癢癥狀較為嚴(yán)重，且伴隨著其他癥狀，如黃疸等。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 一般情況

ICP組確診孕周(28.5±2.0)周(28～32周)，年齡(28.0±35.5)(24～35歲)；健康組孕周(28.5±4.0)周(26～34周)，年齡(29.0±5.5)歲(25～36歲)。兩組均衡可比(P>0.05)。

2.2 各組AFABP、sirt1、sVCAM-1表達(dá)對比

與健康組相比，ICP組sirt1表達(dá)降低，AFABP、sVCAM-1表達(dá)升高(P<0.05)；ICP組中，重度患者AFABP、sVCAM-1高于輕度患者，sirt1低于輕度患者(均P<0.05)。見表1。

表1 各組AFABP、sirt1、sVCAM-1表達(dá)對比

2.3 AFABP、sirt1、sVCAM-1相關(guān)性分析

AFABP、sirt1、sVCAM-1之間Pearson相關(guān)性分析顯示，AFABP與sirt1之間負(fù)相關(guān)(r=-0.621，P=0.001)；AFABP與sVCAM-1之間正相關(guān)(r=0.640，P=0.001)；sirt1與sVCAM-1之間負(fù)相關(guān)(r=-0.647，P=0.001)。

2.4 ROC曲線分析

ROC曲線顯示，AFABP、sirt1、sVCAM-1聯(lián)合診斷ICP的價(jià)值高于單項(xiàng)診斷(P<0.05)。見表2。

表2 各指標(biāo)診斷ICP的ROC曲線分析

3 討論

ICP是一種妊娠期發(fā)生的特有肝臟疾病，患者會出現(xiàn)肝功能異常、膽汁酸含量升高等特征[6-8]。ICP患者的肝內(nèi)膽汁淤積、肝內(nèi)膽汁酸水平上升與體內(nèi)異常雌激素水平有關(guān)，會引起胎盤血灌注不足造成胎兒宮內(nèi)血氧缺失，導(dǎo)致胎兒在宮內(nèi)室息、窘迫，嚴(yán)重者會使胎兒死亡，對孕婦肝功能也會造成損傷[9-10]。臨床上對ICP早期診斷和評估，對患者早期治療尤為重要。

AFABP是巨噬細(xì)胞和脂肪細(xì)胞中所存在的一組小分子蛋白質(zhì)物質(zhì)[11-12]。在體內(nèi)長鏈脂肪酸的代謝、攝取、運(yùn)轉(zhuǎn)中均有參與，可以將膽固醇轉(zhuǎn)運(yùn)到細(xì)胞核、線粒體及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)等特定的細(xì)胞器中，膽固醇在肝細(xì)胞內(nèi)的轉(zhuǎn)化產(chǎn)生膽汁酸，膽汁酸的生成會引發(fā)肝內(nèi)膽汁淤積癥的發(fā)生[13-14]。本研究發(fā)現(xiàn)，ICP患者AFABP水平明顯上升，且隨疾病嚴(yán)重程度上升而加劇，表明AFABP與ICP病情及嚴(yán)重程度存在一定聯(lián)系。

研究表明ICP患者會出現(xiàn)膽汁酸代謝異常。sirt1在能量、炎癥代謝和心血管疾病等疾病的發(fā)生中均有參與，對膽汁酸的肝腸循環(huán)有促進(jìn)作用[15-16]。研究發(fā)現(xiàn)，膽固醇7α-羥化酶對膽汁酸的合成有抑制作用，當(dāng)膽固醇7α-羥化酶出現(xiàn)異常表達(dá)時(shí)，膽汁酸水平會上升，sirt1可通過對法尼酯衍生物X受體和肝X受體α等受體表達(dá)的調(diào)控，調(diào)控膽固醇7α-羥化酶表達(dá)，進(jìn)而抑制膽汁酸合成；sirt1對炎性因子腫瘤壞死因子-α、白細(xì)胞介素-6有抑制作用，從而起到抑制炎癥作用[17-18]。本研究結(jié)果顯示，sirt1在ICP組水平低于健康組，表明sirt1對膽汁酸的抑制作用減弱，對膽汁酸肝腸循環(huán)的促進(jìn)能力減弱，導(dǎo)致妊娠期肝內(nèi)膽汁淤積癥發(fā)生。

sVCAM-1對白細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞的黏附具有促進(jìn)作用，導(dǎo)致血管功能障礙，造成組織損傷，影響胎兒于宮內(nèi)生長，嚴(yán)重時(shí)會導(dǎo)致胎兒死亡[19]。隨著sVCAM-1水平升高加劇血管內(nèi)皮損傷加重[20-21]。本研究發(fā)現(xiàn)，sVCAM-1于ICP患者體內(nèi)表達(dá)升高，且隨著病情嚴(yán)重程度的發(fā)展升高加劇，表明sVCAM-1對內(nèi)皮血管的損傷加重。雖然本文證實(shí)了AFABP、sirt1、sVCAM-1和ICP但關(guān)系，但因樣本過少，還需大樣本多中心研究論證結(jié)論。

綜上所述，本文研究發(fā)現(xiàn)，ICP患者sirt1呈低表達(dá)，AFABP、sVCAM-1呈高表達(dá)，臨床可參考診斷評估。